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吉林大学学报（医学版） 2024年第2期50卷 326-335页

作者：杨爽许娜张剑旭孙成彪王燕董明鑫刘文森军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所吉林长春130117 延边大学医学院生理学与病理生理学教研室吉林延吉133002 吉林医药学院吉林吉林132000

目的:探讨甜叶悬钩子苷(RUB)对小鼠脊髓损伤(SCI)和神经炎症的影响,并阐明其作用机制。方法:将48只雌性昆明小鼠随机分为假手术组、SCI组、SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组,每组12只;采用脊髓损伤行为学(BBB)评分法评估SCI小鼠后肢运... 详细信息

目的:探讨甜叶悬钩子苷(RUB)对小鼠脊髓损伤(SCI)和神经炎症的影响,并阐明其作用机制。方法:将48只雌性昆明小鼠随机分为假手术组、SCI组、SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组,每组12只;采用脊髓损伤行为学(BBB)评分法评估SCI小鼠后肢运动功能,脊髓组织含水量法检测SCI小鼠脊髓水肿情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组小鼠促炎细胞因子环氧化酶2(COX-2)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平,ELISA法检测各组小鼠血清中炎症因子水平,HE染色观察各组小鼠脊髓组织病理形态学,免疫荧光法检测各组小鼠脊髓组织中小胶质细胞活化情况,Western blotting法检测SCI小鼠脊髓组织中相关蛋白表达水平。结果:BBB评分,与假手术组比较,SCI组小鼠评分低至0分;与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠BBB评分逐步升高。脊髓组织含水量法检测,与假手术组比较,SCI组小鼠脊髓组织含水量明显升高(P<0.01);与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓组织含水量明显降低(P<0.01)。RT-qPCR法检测,与假手术组比较,SCI组小鼠脊髓组织中COX-2、IL-1β和TNF-αmRNA表达水平明显升高(P<0.001);与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓组织中COX-2、IL-1β和TNF-αmRNA表达水平明显降低(P<0.001)。ELISA法检测,与假手术组比较,SCI组小鼠血清中IL-1β(P<0.01)和TNF-α(P<0.001)水平升高;与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠血清中IL-1β和TNF-α水平降低(P<0.001);Western blotting法检测,与假手术组比较,SCI组小鼠脊髓组织中核因子κB(NF-κB)抑制因子α(IκB-α)、磷酸化IκB-α(p-IκB-α)、磷酸化p65(p-p65)、p-65、磷酸化p38(p-p38)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.001);与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓组织中IκB-α、p-IκB-α、p-p65、p-65、p-p38、p-ERK和p-JNK蛋白表达水平明显降低(P<0.001)。HE染色观察,与假手术组比较,SCI组小鼠脊髓组织中可见组织疏松,有空泡形成,脊髓中间有一较大的坏死空洞区域;与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓中央坏死空洞区域明显减小(P<0.05)。免疫荧光法检测,与假手术组比较,SCI组小鼠脊髓组织中小胶质细胞阳性细胞数明显增加(P<0.001);与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓组织中小胶质细胞阳性细胞数明显减少(P<0.001)。结论:RUB可改善SCI小鼠运动功能障碍,减轻脊髓组织神经炎症,抑制小胶质细胞活化,其机制可能与下调脊髓组织中NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达有关。

关键词：甜叶悬钩子苷脊髓损伤神经炎症核因子κB 丝裂原活化蛋白激酶

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甜叶悬钩子苷通过NF-κB和MAPK信号通路抑制小鼠神经炎症细胞模型炎症反应

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中国病理生理杂志 2023年第4期39卷 616-622页

作者：杨爽董明鑫姜新邴艳华王燕张剑旭孙成彪岳灿灿许娜刘文森延边大学医学院生理学与病理生理学教研室吉林延吉133002 中国农业科学院长春兽医研究所吉林长春130000 吉林医药学院吉林吉林132000

目的:通过体外实验探究甜叶悬钩子苷(RUB)对脂多糖(LPS)诱导小鼠BV-2小胶质细胞神经炎症反应的影响及改善机制。方法:采用CCK-8法检测RUB对BV-2细胞活力的影响;使用LPS诱导BV-2小胶质细胞建立神经炎症细胞模型,用不同浓度RUB进行干预,将... 详细信息

目的:通过体外实验探究甜叶悬钩子苷(RUB)对脂多糖(LPS)诱导小鼠BV-2小胶质细胞神经炎症反应的影响及改善机制。方法:采用CCK-8法检测RUB对BV-2细胞活力的影响;使用LPS诱导BV-2小胶质细胞建立神经炎症细胞模型,用不同浓度RUB进行干预,将BV-2细胞分为对照组、LPS模型组及LPS+RUB(25、50和100µmol/L)干预组,采用ELISA法检测细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度;RTqPCR法检测促炎细胞因子环加氧酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平;Western blot法检测NF-κB和MAPK信号通路相关蛋白的表达;免疫荧光染色观察细胞中p65的表达情况。结果:与对照组相比,LPS诱导后细胞上清液中IL-1β和TNF-α的分泌量增加(P<0.01),促炎细胞因子COX-2、iNOS、IL-1β和TNF-α的mRNA水平显著增加(P<0.01),NF-κB和MAPK信号通路蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01),且p65出现荧光强度增加(P<0.05);与LPS模型组相比,LPS+RUB(25、50和100µmol/L)干预组中,IL-1β和TNF-α的分泌量减少(P<0.05或P<0.01),促炎细胞因子COX-2、iNOS、IL-1β和TNF-α的mRNA水平降低(P<0.05或P<0.01),p-p65、p-IκBα、p-ERK、p-p38和p-JNK蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01),同时p65荧光减弱(P<0.05)。结论:体外实验表明RUB能够通过抑制NF-κB和MAPK信号通路的活化减轻小鼠神经炎症细胞模型炎症反应。

关键词：甜叶悬钩子苷神经炎症小胶质细胞 NF-κB信号通路 MAPK信号通路

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甜叶悬钩子苷通过IRS-1/PI3K/Akt通路拮抗棕榈酸诱导的小鼠胰岛β细胞凋亡的研究

甜叶悬钩子苷通过IRS-1/PI3K/Akt通路拮抗棕榈酸诱导的小鼠胰岛β...

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作者：徐文悦吉林农业大学

学位级别：硕士

糖尿病(Diabetes mellitus,DM)是一种代谢紊乱性疾病,其发病率及致死率呈逐年上升趋势,严重危害人类和动物的健康,其中以2型糖尿病(Type-2 diabetes mellitus,T2DM)为主要发病类型。T2DM病程初期常伴有胰岛素抵抗(Insulin resistance,I... 详细信息

糖尿病(Diabetes mellitus,DM)是一种代谢紊乱性疾病,其发病率及致死率呈逐年上升趋势,严重危害人类和动物的健康,其中以2型糖尿病(Type-2 diabetes mellitus,T2DM)为主要发病类型。T2DM病程初期常伴有胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR),后期逐渐发展为胰岛β细胞分泌胰岛素减少,直至β细胞凋亡。脂质异常蓄积是造成胰岛β细胞凋亡的主要原因,常被称为脂毒性。因此在T2DM的预防和治疗中,如何能有效抑制脂毒性引发的胰岛β细胞凋亡成为一个关键靶点。如今,治疗T2DM的药物大多以西药为主,而长期服用对机体具有一定损害,而天然产物制药可规避长期服用西药所带来的缺陷。甜叶悬钩子苷(Rubusoside,Rub)作为悬钩子(Rubus suavissimus S.Lee,Rubus)甜叶中提取的天然产物,被证明具有降血糖、降血脂和抗炎等功效,且存在毒副作用小、生物活性丰富等优势。目前,由于Rub的降糖机制还尚未阐明,本研究利用Rub探讨其对脂毒性诱导胰岛β细胞凋亡的保护作用及相关作用机制研究,为天然药物开发与T2DM的防治提供有价值的靶点。本研究选用小鼠胰岛瘤Min6细胞作为研究对象;通过MTT比色法,首先初步验证棕榈酸(Palmitic acid,PA)不同浓度对Min6细胞的损伤变化,再确定Rub的安全浓度范围以选取合适的应用浓度,同时利用q RT-PCR法检测0.1、0.2和0.3mmol/L PA诱导Min6细胞损伤的不同程度以确定合适的造模浓度;借助光学显微镜直观的观察并对比Rub对脂毒性细胞形态的影响;应用流式细胞试验通过Annexin V-FITC/PI双染法检测Rub对脂毒性诱导的细胞凋亡率的影响;采用ELISA试验检测Rub对脂毒性诱导的Min6细胞中葡萄糖刺激胰岛素分泌水平;利用免疫荧光试验检测Rub对脂毒性诱导的Min6细胞中Caspase 9和细胞色素C(Cytochrome c,Cyto-c)的影响;运用q RT-PCR试验检测Rub对脂毒性诱导的Min6细胞中Bax、Bcl-2、Caspase 3、INS-1、IRS-1、PI3K及Akt表达水平的影响;通过Western Blot法检测Rub对脂毒性诱导的Min6细胞中Bax、Bcl-2、CleavedCaspase-9/Caspase 9、Cleaved-Caspase-3/Caspase 3、IRS-1、PI3K及p-Akt/Akt表达水平的影响。结果显示:(1)0.1mmol/L的PA能够降低Min6细胞的存活率,且诱导其凋亡,降低胰岛素基因INS-1表达水平,说明成功构建体外脂毒性T2DM模型供后续试验应用;12.5～200μmol/L Rub对Min6细胞无明显毒性损伤且有利于细胞增殖,所以选择12.5、50、100和200μmol/L Rub用于后续试验验证。(2)与对照组相比,模型组Min6细胞体积缩小、细胞突触缩短、与周围连接消失以及呈现近“圆形”状态;细胞早期凋亡率及总凋亡率增加(P<0.01);Bcl-2/Bax m RNA表达下降,Caspase 3 m RNA表达上升(P<0.01);Cyto-c、Cleaved-Caspase 9、Caspase 9、Cleaved-Caspase 3和Caspase 3蛋白表达均升高(P<0.01)。与模型组相比,Rub干预后细胞形态发生不同程度的改善;细胞早期凋亡率及总凋亡率下降(P<0.01);Bcl-2/Bax m RNA表达上升(P<0.01),Caspase 3 m RNA表达下降(P<0.05或P<0.01);Cyto-c、Cleaved-Caspase 9、Caspase 9、Cleaved-Caspase 3和Caspase 3蛋白表达均下调(P<0.05或P<0.01),且上述结果均呈浓度依赖性。(3)与对照组相比,模型组中INS-1 m RNA表达与高糖刺激后细胞胰岛素分泌水平均降低(P<0.01);IRS-1、PI3K和Akt m RNA表达显著下降(P<0.01);IRS-1、PI3K和p-Akt/Akt蛋白表达也明显下降(P<0.01)。与模型组相比,Rub干预后上述结果均发生逆转(P<0.05或P<0.01)。综上,得出结论为:(1)Rub可减轻脂毒性Min6小鼠胰岛β细胞凋亡,其分子机制与内源性线粒体细胞凋亡途径相关;(2)Rub可通过抑制脂毒性Min6细胞凋亡改善其胰岛素分泌功能,加强胰岛素分泌水平;(3)Rub对脂毒性Min6细胞的保护作用与IRS-1/PI3K/Akt通路具有相关性。

关键词：甜叶悬钩子苷细胞凋亡胰岛素抵抗 IRS-1/PI3K/Akt通路

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甜叶悬钩子苷对2型糖尿病小鼠AMPK/GLUT2/4通路及氧化应激作用的影响

甜叶悬钩子苷对2型糖尿病小鼠AMPK/GLUT2/4通路及氧化应激作用的...

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作者：胡曦予延边大学

学位级别：硕士

目的探讨甜叶悬钩子苷(Rubusoside,Rub)对2型糖尿病(Type 2 Diabetes Melitus,T2DM)小鼠降血糖作用及作用机制,为临床防治T2DM提供理论基础。方法选取80只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为10只正常对照组(Control)。其余小鼠采用高脂饮食1个... 详细信息

目的探讨甜叶悬钩子苷(Rubusoside,Rub)对2型糖尿病(Type 2 Diabetes Melitus,T2DM)小鼠降血糖作用及作用机制,为临床防治T2DM提供理论基础。方法选取80只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为10只正常对照组(Control)。其余小鼠采用高脂饮食1个月联合腹腔注射小剂量STZ,制备T2DM小鼠,血糖值≧7.8 mmol/ml认定模型制备成功。小鼠成模后,分为模型组(Model)、Rub组(Rub,50、100和200 mg/kg/d)和阳性对照组(Met,200 mg/kg/d),Control组和Model组小鼠每天灌胃0.1 ml生理盐水,连续干预10周。固定时间观察小鼠生活状态、记录体重变化。干预10周后,测定小鼠血清FBG,OGTT,FINS,TG,T-CHO和LDL-C,并计算HOMA-IR;检测肝组织中p-AMPK,GLUT2,GLUT4,SOD,MDA,CAT,GSH-Px水平;HE法观察肝形态学变化。结果与Control组小鼠相比,Model组小鼠中FBG,OGTT,HOMA-IR,TG,T-CHO以及LDL-C水平显著增高(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.05),肝组织中p-AMPK以及GLUT4含量明显降低,GLUT2含量明显增加(P<0.01,P<0.01,P<0.05),SOD,CAT,GSH-Px在肝组织的含量显著降低,MDA在肝组织中的含量显著增高(P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01),肝指数明显升高(P<0.01),HE结果显示肝细胞肿胀,出现气球样变;与Model组小鼠比较,Rub组小鼠血清中FBG,OGTT,HOMA-IR,TG,T-CHO以及LDL-C显著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01),肝组织中p-AMPK,GLUT4显著增高(P<0.01,P<0.01),GLUT2的表达显著降低(P<0.05),肝组织中SOD、CAT,GSH-Px的表达量显著升高,MDA的表达量显著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.01),肝指数明显降低(P<0.05),HE结果显示肝组织结构不同程度改善;与Met组小鼠相比,Rub H组小鼠中FBG,OGTT,HOMA-IR,TG,LDL-C,p-AMPK,GLUT2,MDA以及肝指数并无统计学意义,血清中T-CHO的含量显著降低(P<0.05),肝组织中GLUT4,SOD,CAT以及GSH-Px的表达显著增加(P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.05)。结论Rub对T2DM小鼠有较好的降血糖作用,其机制可能是通过激活肝组织中AMPK/GLUT 2/4通路,同时与改善肝组织的氧化应激反应有关。

关键词：甜叶悬钩子苷 2型糖尿病葡萄糖转运蛋白氧化应激

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瑶药复方甜茶降脂合剂质量标准研究

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中国新药杂志 2015年第23期24卷 2729-2732,2745页

作者：刘凡王硕蔡锦源龚小妹樊溪源周小雷广西药用植物园广西药用资源保护与遗传改良重点实验室南宁530023 广西科技大学鹿山学院柳州545616

目的:建立复方甜茶降脂合剂的质量标准。方法:利用薄层色谱法(TLC)对复方甜茶降脂合剂处方中的甜茶、菊花进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定复方甜茶降脂合剂中甜叶悬钩子苷。色谱条件:色谱柱为Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μ... 详细信息

目的:建立复方甜茶降脂合剂的质量标准。方法:利用薄层色谱法(TLC)对复方甜茶降脂合剂处方中的甜茶、菊花进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定复方甜茶降脂合剂中甜叶悬钩子苷。色谱条件:色谱柱为Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水,梯度洗脱;检测波长为208 nm;进样量为15μL,流速为0.8 m L·min^(-1);柱温为25℃。结果:在薄层色谱中能检出甜茶和菊花,甜叶悬钩子苷线性范围为1.005~6.030μg,加样回收率为96.29%(RSD为1.73%,n=9),10批次复方的平均含量为0.008 0mg·m L^(-1)。结论:所建立的方法稳定可靠,可有效控制该合剂的质量。

关键词：复方甜茶降脂合剂高效液相色谱法甜叶悬钩子苷薄层含量测定

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