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甘露聚糖结合凝集素对调节性T细胞诱导分化及功能的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第2期37卷 112-117页

作者：张卫斌陈晨李昊典王艳杨琳何全中陈露露王帅王凡平王明永新乡医学院医学检验学院 453003 河南省临床医学研究生创新实践基地新乡雅士杰医学检验所453003 新乡第一人民医院妇产科 453003 新乡医学院第三附属医院妇产科 453003 新乡医学院基础医学院人体寄生虫学教研室 453003 河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心 453003

目的探讨甘露聚糖结合凝集素（mannan-binding lectin,MBL）对调节性T细胞（regu-latory T cell,Treg）诱导分化及功能的影响.方法采用免疫磁珠分选法分选出脐血CD4＋CD25-T细胞,对照组用anti-CD3 McAb和anti-CD28 McAb活化细胞并加... 详细信息

目的探讨甘露聚糖结合凝集素（mannan-binding lectin,MBL）对调节性T细胞（regu-latory T cell,Treg）诱导分化及功能的影响.方法采用免疫磁珠分选法分选出脐血CD4＋CD25-T细胞,对照组用anti-CD3 McAb和anti-CD28 McAb活化细胞并加入适当浓度的TGF-β1作为诱导剂,在对照组基础上加入不同浓度的MBL作为实验组,细胞培养72 h后,荧光活化细胞分选法（FACS）分析各组中适应性调节性T细胞（induced regulatory T cell,iTreg）比例变化情况;RT-PCR方法分析新鲜脐血单个核细胞（cord blood mononuclear cell,CBMC）、纯化的CD4＋CD25-T细胞、未加MBL对照组及MBL组Foxp3 mRNA表达的水平;CCK-8法测定MBL对iTreg调节异体CD4＋CD25-T细胞增殖的影响.结果 FACS分析表明,经体外72 h培养,与对照组相比,超生理浓度MBL能够增强CD4＋CD25-T细胞向Treg细胞诱导分化;RT-PCR结果显示MBL能够增强iTreg高表达Foxp3 mRNA;体外抑制试验显示,iTreg以浓度依赖方式抑制异体CD4＋CD25-T细胞的增殖,培养体系中加入MBL后增强了iTreg对CD4＋CD25-T细胞的增殖抑制效应.结论 MBL能够促进Treg诱导分化,而且对Treg抑制效应T细胞的增殖具有一定的协同调控作用.

关键词：甘露聚糖结合凝集素调节性T细胞脐血单个核细胞效应T细胞诱导分化

甘露聚糖结合凝集素(MBL)对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的调节作用及机制

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中华微生物学和免疫学杂志 2020年第2期40卷 122-128页

作者：杨泳慧杨婧文李志欣孙彦威杨易孟张伟王凡平于莉莉王明永新乡医学院医学检验学院 453003 新乡医学院国际教育学院 453003 新乡医学院基础医学院 453003 河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心新乡453003 新乡市免疫调控与分子诊断重点实验室 453003

目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的调节及其机制。方法体外诱导3T3-L1前脂肪细胞成脂分化,同时给予不同浓度的MBL(0、1、10、20μg/ml)干预。CCK-8法检测细胞增殖能力变化,油红O染色... 详细信息

目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的调节及其机制。方法体外诱导3T3-L1前脂肪细胞成脂分化,同时给予不同浓度的MBL(0、1、10、20μg/ml)干预。CCK-8法检测细胞增殖能力变化,油红O染色和细胞内甘油三酯含量测定法分析脂质积累情况。Western blot及qRT-PCR检测脂肪细胞成脂分化相关因子PPARγ及C/EBPα的蛋白质及mRNA表达水平。Western blot分析脂肪合成调控信号分子Akt的表达及磷酸化。结果实验组各浓度MBL(0、1、10、20μg/ml)对3T3-L1前脂肪细胞增殖都无影响。3T3-L1前脂肪细胞诱导分化3 d,甘油三酯检测发现MBL处理组细胞内甘油三酯水平下降,并呈剂量依赖关系;油红O染色结果进一步显示,MBL处理组的脂滴数量显著减少,吸光度值也显著降低,同样呈现浓度依赖关系。Western blot及qRT-PCR检测结果证实,MBL处理组PPARγ和C/EBPα的蛋白质及mRNA表达水平均显著下降,呈剂量依赖性。在MBL干预下,Akt的磷酸化水平也明显下调。结论MBL通过Akt信号通路调控3T3-L1前脂肪细胞的成脂分化。

关键词：甘露聚糖结合凝集素 3T3-L1前脂肪细胞 Akt 成脂分化

甘露聚糖结合凝集素对3T3-L1脂肪细胞分化过程中自噬的调节作用及机制

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第4期41卷 270-279页

作者：杨婧文李志欣孙彦威任智宏黄晓愉王凡平张伟于莉莉王明永新乡医学院医学检验学院 453003 新乡医学院基础医学院 453003 河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心新乡453003 新乡市免疫调控与分子诊断重点实验室 453003

目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)对3T3-L1脂肪细胞分化过程中自噬的调节及其机制,为靶向自噬在固有免疫上预防肥胖及相关病理改变提供可行性。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化。油红O染色分析细胞分... 详细信息

目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)对3T3-L1脂肪细胞分化过程中自噬的调节及其机制,为靶向自噬在固有免疫上预防肥胖及相关病理改变提供可行性。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化。油红O染色分析细胞分化成熟及脂滴积累情况,CCK-8法检测不同浓度MBL(0、1、5、10μg/ml)对不同分化阶段细胞增殖能力的影响,Western blot分析MBL(10μg/ml)对不同分化阶段细胞自噬关键因子LC3B、Beclin1和p62蛋白的表达,油红O染色观察MBL干预下脂滴蓄积的改变,Western blot、qRT-PCR检测不同浓度MBL干预下自噬关键因子蛋白质及mRNA表达水平,基于自噬性降解的自噬流分析来进一步说明自噬活性,Western blot分析单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号分子的表达及磷酸化。结果油红O染色结果显示经过10 d诱导的3T3-L1前脂肪细胞可达到完全分化状态;CCK-8结果表明实验组各浓度MBL(1~10μg/ml)对不同分化阶段细胞增殖无影响;Western blot及qRT-PCR检测发现在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中,MBL处理组自噬相关蛋白及mRNA表达水平增强,并呈一定浓度依赖关系;油红O染色显示不同分化阶段脂肪细胞内脂滴在MBL干预下呈不同程度的减少;荧光显微镜检测结果进一步证实MBL通过增加自噬体的合成增强脂肪细胞自噬活性;并且在MBL干预下,AMPK的磷酸化水平明显上调,mTOR的磷酸化水平明显下调,同样呈现浓度依赖关系。结论MBL通过AMPK/mTOR信号通路加快3T3-L1脂肪细胞分化过程中的自噬进程,降低脂质积累,为治疗肥胖及其相关代谢疾病提供了一种潜在的功能途径。

关键词：甘露聚糖结合凝集素 3T3-L1细胞自噬 AMPK/mTOR 成脂分化

甘露聚糖结合凝集素基因多态性对社区获得性肺炎病情程度的评估作用

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中华危重病急救医学 2014年第9期26卷 655-660页

作者：刘学花张学如李青田卓民天津市人民医院感染免疫科 300121

目的研究社区获得性肺炎（CAP）患者甘露聚糖结合凝集素（MBL）结构基因第一外显子54位密码子基因多态性及血清MBL、C-反应蛋白（CRP）水平对疾病严重程度的评估价值.方法采用前瞻性观察性临床研究方法,选择天津市人民医院住院的汉族... 详细信息

目的研究社区获得性肺炎（CAP）患者甘露聚糖结合凝集素（MBL）结构基因第一外显子54位密码子基因多态性及血清MBL、C-反应蛋白（CRP）水平对疾病严重程度的评估价值.方法采用前瞻性观察性临床研究方法,选择天津市人民医院住院的汉族成人CAP患者104例,检测MBL 54位密码子点突变频率;进行肺炎严重指数（PSI）评分并分级;于治疗前及治疗4d、7d采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清MBL水平,用免疫比浊法检测CRP水平.另外选取100例同地区年龄、性别、民族匹配的健康体检人群作为对照组.比较CAP组与对照组及不同PSI分级CAP患者血清MBL、CRP水平,并进行相关性分析.结果 CAP组与对照组MBL 54位密码子存在GGC→GAC变异,两组MBL 54位密码子野生型及杂合突变型基因型频率（x2=0.018,P=0.893）和等位基因频率（x2=0.019,P=0.903）的分布无统计学差异.CAP组治疗前及治疗4d、7d血清MBL水平（mg/L）先升后降,分别为3.75±1.78、4.53±1.99、4.04±1.91,均明显高于对照组（2.84±1.41,均P＜0.01）;血清CRP水平（mg/L）逐渐下降,分别为66.88±40.47、51.21±37.54、36.91±36.02,均明显高于对照组（6.96±2.19,均P＜0.01）.CAP患者PSI分级Ⅰ级12例,Ⅱ级32例,Ⅲ级20例,Ⅳ级22例,V级18例.不同PSI分级之间（x2=1.210,P=0.876）、普通病房与重症监护病房之间（x2=0.569,P=0.451） MBL 54位密码子基因型分布无统计学意义.CAP患者不同PSI分级之间血清MBL水平在治疗前（F=1.313,P=0.279）、治疗4d（F=1.705,P=0.165）、治疗7 d（F=1.684,P=0.170）差异均无统计学意义;PSIⅡ～V级患者治疗4d时血清MBL浓度较治疗前均明显增高,治疗7d时降至治疗前水平.CAP患者不同PSI分级之间血清CRP水平在治疗前（F=23.179,P=0.000）、治疗4d（F=26.601,P=0.000）、治疗7 d（F=10.358,P=0.000）差异均有统计学意义;PSI各级患者血清CRP水平均随治疗时间逐渐下降,PSI分级越高,血清CRP下降越不明显.CAP患者治疗前及治疗4d、7d时PSI分级与血清MBL均无相关性（治疗前r=-0.205,P=0.145;治疗4 dr=-0.062,P=0.662;治疗7 d r=-0.063,P=0.656）,与血清CRP均呈显著正相关（治疗前r=0.809,P=0.000;治疗4dr=0.842,P=0.000;治疗7 d r=0.702,P=0.000）.结论 MBL 54位密码子基因型对CAP疾病严重程度无影响;CAP患者血清MBL升高并随治疗时间呈动态变化,可作为CAP的炎性标志物,但尚不能用于对CAP疾病严重程度的评估.

关键词：社区获得性肺炎甘露聚糖结合凝集素 C-反应蛋白肺炎严重程度评分

甘露聚糖结合凝集素对人中性粒细胞功能的影响

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南方医科大学学报 2013年第6期33卷 842-846页

作者：陈阿德王燕张丽芸卢晓左大明陈政良南方医科大学免疫学教研室广东广州510515

目的研究甘露聚糖结合凝集素(MBL)对人中性粒细胞(PMN)功能的影响。方法采用ELISA和Dot blot检测MBL与微生物的结合;应用流式细胞术检测及荧光显微镜观察MBL对PMN吞噬功能的影响;用qPCR分析MBL对PMN表达IL-1β、TNF-α和CD11b mRNA的影... 详细信息

目的研究甘露聚糖结合凝集素(MBL)对人中性粒细胞(PMN)功能的影响。方法采用ELISA和Dot blot检测MBL与微生物的结合;应用流式细胞术检测及荧光显微镜观察MBL对PMN吞噬功能的影响;用qPCR分析MBL对PMN表达IL-1β、TNF-α和CD11b mRNA的影响,以ELISA检测MBL对PMN分泌TNF-α和IL-6的影响;应用NBT还原法检测MBL对PMN呼吸爆发的影响。结果 MBL与微生物结合并呈浓度依赖关系。无人血清时,MBL对PMN吞噬***和***无明显影响。存在MBL缺陷人混合血清时,MBL可促进PMN对***的吞噬且这种作用可被甘露聚糖所阻断,上调PMN IL-1β、TNF-α、IL-6及CD11b表达水平,刺激PMN呼吸爆发。结论 MBL以补体凝集素途径依赖方式增强PMN吞噬功能,并促进炎性细胞因子分泌。

关键词：甘露聚糖结合凝集素中性粒细胞吞噬促炎细胞因子

甘露聚糖结合凝集素抑制肽聚糖刺激THP-1／CD14细胞产生的炎性反应及机制

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第11期32卷 977-982页

作者：王凡平王明永杨建斌赵东方连荣徐素玲邵峰孙瑞利郭庆合李海斌郭继强宋志善新乡医学院医学检验系 453003 新乡医学院第一附属医院检验科学院第三附属医院检验科

目的探讨甘露聚糖结合凝集素（mannan-bindinglectin，MBL）对肽聚糖（peptidogly—can，PGN）刺激佛波酯（PMA）活化的THP-1／CD14细胞产生TNF—α和IL-6影响。方法用PMA活化THP-1／CD14细胞，以不同浓度人MBL预处理2b后再用PGN刺激24... 详细信息

目的探讨甘露聚糖结合凝集素（mannan-bindinglectin，MBL）对肽聚糖（peptidogly—can，PGN）刺激佛波酯（PMA）活化的THP-1／CD14细胞产生TNF—α和IL-6影响。方法用PMA活化THP-1／CD14细胞，以不同浓度人MBL预处理2b后再用PGN刺激24h。收集培养上清，以ELISA从蛋白水平分析TNF-α和IL-6的产生。收集细胞提取总RNA，以RT—PCR从转录水平评估TNF—α和IL-6的表达。FACS分析MBL与THP-1／CD14细胞的结合，并进一步分析MBL对PGN结合THP-1／CD14细胞的影响，Western blot分析NF-κB的细胞核移位。结果ELISA检测发现，PGN可刺激PMA活化的各THP-1／CD14细胞分泌TNF-α和IL-6，高浓度MBL（10～20mg／L）可抑制PGN诱导细胞分泌TNF—α和IL-6；RT—PCR分析亦显示，MBL（20mg／L）对PGN诱导的TNF—α和IL-6的mRNA表达有不同程度的抑制作用；流式细胞术检测显示MBL能够与THP-1／CD14细胞以Ca^2＋依赖形式结合，PGN可竞争性抑制MBL结合THP-1／CD14细胞。MBL还可通过结合THP-1／CD14竞争性抑制PGN与THP-1／CD14的结合。Western blot分析显示，MBL对PGN诱导的NF—κB细胞核移位有显著的抑制作用。结论MBL通过配体结合抑制PGN诱导的THP-1／CD14细胞产生的细胞反应，提示MBL能够在PGN诱导的炎性反应中起免疫调控作用。

关键词：甘露聚糖结合凝集素肽聚糖 THP-1 CD14细胞细胞因子免疫调节

甘露聚糖结合凝集素阻遏人巨细胞病毒感染MD-DC细胞的研究

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四川大学学报（医学版） 2011年第5期42卷 599-603,615页

作者：潘开宇尚世强陈英虎吴蔚乔会菊陶然浙江大学医学院附属儿童医院中心实验室杭州310003 杭州市萧山区第一人民医院儿科杭州311201

目的探讨不同来源、不同浓度的甘露聚糖结合凝集素（MBL）阻遏人巨细胞病毒（HCMV）感染人外周血单个核细胞衍生出的DC细胞（MD-DC）的作用。方法通过载体构建得到重组MBL（rMBL）,通过血浆分离得到天然MBL（hMBL）,先以不同浓度的hMBL/... 详细信息

目的探讨不同来源、不同浓度的甘露聚糖结合凝集素（MBL）阻遏人巨细胞病毒（HCMV）感染人外周血单个核细胞衍生出的DC细胞（MD-DC）的作用。方法通过载体构建得到重组MBL（rMBL）,通过血浆分离得到天然MBL（hMBL）,先以不同浓度的hMBL/rMBL预处理MD-DC 0.5 h,再以HCMV感染MD-DC 2 h,比较不同浓度的hMBL/rMBL阻遏MD-DC捕获HCMV的作用差异。经HCMV感染后的MD-DC和MBL共培养,比较不同浓度的hMBL/rMBL阻遏HCMV在MD-DC间扩散的作用差异。荧光定量PCR法检测MD-DC内HCMV-DNA的拷贝数,流式细胞仪检测MD-DC内HCMV-PP65的阳性率,激光共聚焦技术观察MD-DC对HCMV的捕获。结果荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,1μg/mL hMBL/rMBL组MD-DC内HCMV-DNA含量均无明显变化（P〉0.05）,而5μg/mL和10μg/mL hMBL/rMBL组MD-DC内HCMV-DNA含量均降低（P〈0.05）。激光共聚焦技术和流式细胞术证实10μg/mL hMBL/rMBL能明显阻遏MD-DC捕获HCMV。经HCMV感染后的MD-DC与MBL共培养,在第72 h,5μg/mL和10μg/mL hMBL/rMBL组开始显现阻遏作用。结论生理浓度范围（5~10μg/mL）内的hMBL/rMBL能显著阻遏HCMV感染。

关键词：人巨细胞病毒甘露聚糖结合凝集素 MD-DC 阻遏感染

甘露聚糖结合凝集素对脂多糖诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应和胰岛素抵抗的调节作用及机制

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中国免疫学杂志 2023年第10期39卷 2126-2131页

作者：李志欣任智宏雷一鸣穆永慧于莉莉王明永(指导) 新乡医学院医学检验学院新乡453003 新乡医学院基础医学院新乡453003

目的:研究甘露聚糖结合凝集素(MBL)对脂多糖的诱导3T3-L1脂肪细胞炎症反应及胰岛素抵抗的调节作用及机制。方法:诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,油红O染色分析细胞分化程度,使用CCK-8检测分化过程中MBL(1、10、20μg/ml)及LPS对细胞增殖能力... 详细信息

目的:研究甘露聚糖结合凝集素(MBL)对脂多糖的诱导3T3-L1脂肪细胞炎症反应及胰岛素抵抗的调节作用及机制。方法:诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,油红O染色分析细胞分化程度,使用CCK-8检测分化过程中MBL(1、10、20μg/ml)及LPS对细胞增殖能力的影响;ELISA检测细胞炎症因子IL-6、TNF-α含量,Western blot检测TNF-α、IL-6及TLR4/NF-κB信号通路中蛋白表达,并分析Akt、IRS-1 try蛋白磷酸化及GLUT4表达情况;流式细胞术检测MBL对3T3-L1细胞摄取葡萄糖的调节作用。结果:油红O染色显示,12 d时,3T3-L1前体脂肪细胞已诱导为完全成熟的脂肪细胞;CCK-8结果证实,在细胞分化全过程,不同浓度的MBL (1、10、20μg/ml)及LPS对其增殖能力无明显影响;ELISA及Western blot结果显示在脂肪细胞分化至成熟过程中,MBL处理均可抑制LPS诱导的炎症因子分泌,且其抑制作用呈浓度依赖性;Western blot结果显示MBL以浓度依赖的方式抑制LPS诱导的IκB、IKK磷酸化和TLR4以及核NF-κB表达,且MBL可增强Akt和IRS-1磷酸化,增加GLUT4表达;流式细胞术结果显示MBL可以在一定程度上解除LPS对3T3-L1细胞摄取葡萄糖的抑制,并呈一定的浓度依赖性。结论:在脂肪细胞中,MBL通过TLR4/NF-κB信号通路抑制细胞炎症因子分泌,发挥抑炎作用;MBL通过抑制炎症因子分泌,解除LPS对3T3-L1细胞摄取葡萄糖和IRS-1/Akt信号的抑制,减轻胰岛素抵抗。

关键词：甘露聚糖结合凝集素炎症胰岛素抵抗 3T3-L1细胞脂多糖

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甘露聚糖结合凝集素与临床疾病的研究进展

细胞与分子免疫学杂志 2014年第5期30卷 546-549页

作者：杨小燕翟勇平南方医科大学南京临床学院(南京军区总医院)血液科江苏南京210002

甘露聚糖结合凝集素(MBL)是天然免疫补体系统中的一员,主要由肝细胞合成,作为急性期反应蛋白分泌入血清。血清MBL的水平主要由MBL2基因启动子区及外显子1区的基因多态性决定。MBL可选择性的与病原微生物(如G+/G-细菌、病毒、真菌、原生... 详细信息

甘露聚糖结合凝集素(MBL)是天然免疫补体系统中的一员,主要由肝细胞合成,作为急性期反应蛋白分泌入血清。血清MBL的水平主要由MBL2基因启动子区及外显子1区的基因多态性决定。MBL可选择性的与病原微生物(如G+/G-细菌、病毒、真菌、原生物等)、坏死损伤细胞、凋亡细胞以及肿瘤细胞等表面的相应配体结合,通过激活补体系统、调理吞噬、调节炎症反应等保护人体。血清MBL的水平对人体影响较大:当血清MBL缺乏时,机体易患某些疾病,如感染性疾病、自身免疫性疾病;但如果血清MBL水平过高,又会对自身组织造成损伤,如在心肌梗死及器官移植中,引起机体的缺血再灌注损伤;此外,MBL基因型及血清MBL水平与肿瘤的易感性可能也存在一定关系。

关键词：甘露聚糖结合凝集素感染自身免疫性疾病肿瘤