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α-甘露糖苷酶研究进展

中国比较医学杂志 2006年第11期16卷 697-702页

作者：刘红霞苏卫张连峰中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所北京100021

N-糖基化是机体蛋白质翻译后的一种重要的修饰过程。蛋白质N-糖基化生物过程和相关的许多酶主要定位于胞浆内质网和高尔基体。α-甘露糖苷酶是一种参与糖蛋白合成和代谢的重要蛋白酶,它的功能是修剪N-聚糖中的甘露糖。本文重点介绍α-... 详细信息

N-糖基化是机体蛋白质翻译后的一种重要的修饰过程。蛋白质N-糖基化生物过程和相关的许多酶主要定位于胞浆内质网和高尔基体。α-甘露糖苷酶是一种参与糖蛋白合成和代谢的重要蛋白酶,它的功能是修剪N-聚糖中的甘露糖。本文重点介绍α-甘露糖苷酶的分类、在体内参与糖蛋白的成熟和降解过程,以及α-甘露糖苷酶基因突变可导致的相关疾病。

关键词：蛋白质糖基化甘露糖苷酶

编码与大鼠ERα-甘露糖苷酶同源的人6A8cDNA在真核细胞的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 1998年第4期18卷 268-271页

作者：张立新马凤蓉朱立平李波石伟张淑珍李国燕王汛赵方萄中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院

目的观察６Ａ８ｃＤＮＡ（１３５８ｂｐ）在真核细胞的表达。方法Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，构建６Ａ８ｃＤＮＡ表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ－６Ａ８ｃＤＮＡ，转染ＣＯＳ－７细胞，及基因免疫小鼠。结果６Ａ８ｃＤＮＡ有４．３ｋｂ和３．... 详细信息

目的观察６Ａ８ｃＤＮＡ（１３５８ｂｐ）在真核细胞的表达。方法Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，构建６Ａ８ｃＤＮＡ表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ－６Ａ８ｃＤＮＡ，转染ＣＯＳ－７细胞，及基因免疫小鼠。结果６Ａ８ｃＤＮＡ有４．３ｋｂ和３．５ｋｂ两种ｍＲＮＡ转录形式。４．３ｋｂｍＲＮＡ以外周血白细胞最丰富，其次为淋巴结、脾脏和骨髓，胸腺组织表达较少，胎肝则缺如。３．５ｋｂ者也以外周血白细胞最丰富，其次为肝脏、淋巴结和骨髓，胸腺和脾脏表达量最少。ｐＲｃ／ＣＭＶ－６Ａ８ｃＤＮＡ在ＣＯＳ－７细胞表达了分子量４５０００左右的蛋白质，与单抗６Ａ８有反应。ｐＲｃ／ＣＭＶ－６Ａ８ｃＤＮＡ基因免疫小鼠，６／１０只小鼠血清与人活化Ｂ细胞株３Ｄ５细胞膜有反应，５／５只对照小鼠血清呈阴性反应。结论６Ａ８ｃＤＮＡ（１３５８ｂｐ）在真核细胞获得表达，但此ｃＤＮＡ非为全长。

关键词： RNA 信使 DNA 互补甘露糖苷酶真核细胞

烟曲霉甘露糖苷酶基因的克隆表达及酶学性质研究

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烟曲霉甘露糖苷酶基因的克隆表达及酶学性质研究

第六届中国酶工程学术研讨会

作者：李雁洁金城课题组中国科学院微生物研究所

烟曲霉(Aspergillus fumigatus)甘露糖苷酶是在烟曲霉糖蛋白N-糖链加工过程中起到重要作用的一类酶,它通过水解N-糖链上的甘露糖,并在其他酶的协同参与下对糖链进行修饰加工,从而保证了糖蛋白N-糖链的多样性和复杂性。afman70基因编码... 详细信息

烟曲霉(Aspergillus fumigatus)甘露糖苷酶是在烟曲霉糖蛋白N-糖链加工过程中起到重要作用的一类酶,它通过水解N-糖链上的甘露糖,并在其他酶的协同参与下对糖链进行修饰加工,从而保证了糖蛋白N-糖链的多样性和复杂性。afman70基因编码的甘露糖苷酶属于第一类甘露糖苷酶(ClassⅠmannosidase)。对afman70基因的克隆、表达、以及酶学性质的研究,可以为阐明afman70基因在烟曲霉中的作用奠定一定的基础。烟曲霉甘露糖苷酶afman70基因(GeneBank accession No:AY573354)位于第一条染色体上,全长1677bp,有三个内含子,eDNA全长是1512bp,编码的蛋白质理论分子量是55KDa,分析其氨基酸序列,N-端有一段跨膜区,有两个潜在的N-糖基化位点,是Ⅱ型跨膜蛋白,属于第一类甘露糖苷酶(ClassⅠmannosidase),特异性水解寡糖链上的α-1,2连接的甘露糖,在糖蛋白N-糖链加工过程中起到重要作用。根据文献的相关报道以及序列比对,推测其位于高尔基体,属于Golgiα1,2-mannosidase。我们对烟曲霉YJ-407的afman70基因进行了原核表达,并且对此酶进行了纯化和相关的酶学性质研究。酶作用的最适温度为37-40℃;最适pH值是5.5;Km值为1.78mM;Deoxymannojirimycin对酶活性有很明显的抑制作用。另外,还将烟曲霉AFMAN70P的酶学性质和目前已知的其他种属的ClassⅠGolgiα-mannosidase的酶学性质进行了简单的比较,发现这一类酶都能以Methyl2-o-a-D-mannopyranosyl-a-D-mannopyranoside(Manl-2Man-OMe)为底物,并且被Deoxymannoiirimycin(DMJ)抑制,完全符合Ⅰ类甘露糖苷酶的特征。另外,哺乳动物(如:兔、人)和酵母的ClassⅠα-mannosidase的酶活性发挥需要Ca的存在,而我们研究的烟曲霉AFMAN70P酶活性却不受Ca的影响,这一现象和在Aspergillus saitoi、Penicillium citrinum中发现的现象是一致的。

关键词：烟曲霉 N-糖基化甘露糖苷酶

来源： cnki会议评论

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低分子量石斛寡糖的酶法制备及益菌活性研究

低分子量石斛寡糖的酶法制备及益菌活性研究

作者：非祖琪浙江农林大学

学位级别：硕士

石斛(Dendrobium nobile Lindl.)药用历史悠久,作为一种药食同源的传统中药材,因其生津养胃,清热降燥;治热病伤肝,口渴烦闷,病后虚热等功效受到了广泛的应用,其中石斛多糖是其主要的活性物质。现代药理学研究表明,石斛多糖具有抗菌消炎... 详细信息

石斛(Dendrobium nobile Lindl.)药用历史悠久,作为一种药食同源的传统中药材,因其生津养胃,清热降燥;治热病伤肝,口渴烦闷,病后虚热等功效受到了广泛的应用,其中石斛多糖是其主要的活性物质。现代药理学研究表明,石斛多糖具有抗菌消炎、抗病毒、抗氧化、免疫调节、抑制肿瘤和降血糖等多种生物活性。本研究为制备低分子量石斛寡聚糖,筛选了嗜热菌Thermobifida halotolerans来源的糖苷水解酶Thms,通过异源重组表达制备糖苷水解酶蛋白,以石斛多糖为底物探讨了Thms酶的酶学性质,并对不同分子量的石斛寡糖水解制备条件进行了优化。在此基础上进一步探讨了不同分子量的石斛寡聚糖对乳酸菌的益菌增殖活性,基于代谢组学和转录组学技术对石斛寡糖促进植物乳杆菌增殖的机理进行了分析,从分子水平确定了石斛寡糖对植物乳杆菌糖酵解途径、丙酮酸代谢途径和脂肪酸合成途径的关键酶的调控作用,初步揭示了石斛寡糖的菌群调节机理。该研究也为功能性寡糖对微生物菌群的促增殖机理研究提供了新的见解。本文主要研究结果如下:(1)基于基因数据库挖掘与分析,获得了来源于***的糖苷水解酶编码基因THMS(NCBI基因登录号为WP＿068692523.1,编码455个氨基酸),进化关系分析表明,THMS归属于糖基水解酶5纤维素酶A家族(glycosyl hydrolase5(cellulase A)family)。基于异源重组表达系统THMS-p ET21a/BL21(DE3)的构建,实现了糖苷水解酶Thms在大肠杆菌中的高活性重组表达及蛋白纯化,酶学性质表征显示Thms最适底物浓度为2.4 g/L,最适温度为60°C,最适p H为7.0;并且具有较好的热稳定性和p H耐受稳定性。石斛多糖单糖组成分析表明其是由24.5%的葡萄糖和75.5%的甘露糖两种单糖组成的典型葡甘聚糖。通过优化Thms酶对石斛多糖水解时间(0,45 min,4.5 h,12 h),获得了分子量为661.33 k Da、11.49 k Da、7.17 k Da和3.69 k Da的石斛寡聚糖。水解产物经傅里叶红外光谱分析比对,结果显示酶水解后不影响石斛寡聚糖的主要官能团与化学键,产物结构不受到影响。(2)为探究石斛寡聚糖对乳酸菌的益生效果,采用上述制备的多种分子量的石斛寡聚糖用于副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)的细胞增殖培养试验,在M17乳酸菌基础培养基中添加不同石斛寡聚糖评估其细胞增殖。结果显示石斛寡糖的添加,显著促进了细胞的生长,且寡糖分子量越低,其促生长效果越好。其中最小分子量为3.69 k Da的石斛寡糖对植物乳杆菌的增殖效果最好,相比对照组,添加0.1%寡糖组在培养24 h时后达到最大增殖率61.52%,明显促进了该菌株的生长繁殖。将寡糖浓度提高到1%植物乳杆菌在培养至24 h后增殖率达到最大值288.23%,表明低分子量石斛寡聚糖对植物乳杆菌的增殖效果具有显著促进作用。通过代谢组学进一步发现石斛寡聚糖的添加能够显著促进了植物乳杆菌短链脂肪酸的合成与积累,初步表明低分子量石斛寡聚糖可以作为植物乳杆菌良好的益生元。(3)通过分析促进植物乳杆菌增殖作用的转录组数据,统计得到石斛寡糖实验组与对照组的基因表达情况。根据基因表达差异性得到GO富集数据库与KEGG富集数据库。前者显示GO富集中生物过程富集到的通路显著性较高,其中最靠前的通路为离子跨膜转运和嘌呤核苷三磷酸代谢,说明石斛寡糖主要具有促进植物乳杆菌细胞的生长发育的益菌效果。KEGG富集结果显示富集到的显著通路有:脂肪酸生物合成、糖酵解与葡萄糖合成和丙酮酸代谢等,之后对具有显著性差异的三个通路进行具体分析,并筛选出部分编码相关代谢途径重要酶的基因。在脂肪酸合成通路中,明显上调的基因有8个,最高上调倍数达4.7倍,主要调控编码的Fab Z酶参与乙酰辅酶A的脱羧反应;在糖酵解途径中,明显上调的基因有6个,上调基因编码酶主要促进了植物乳杆菌乙酰辅酶A的生成,有利于细胞代谢供能;在丙酮酸代谢途径中,明显上调的基因有6个,主要通过促进丙酮酸代谢过程中丙二酸单酰辅酶A的生成,该物质作为参与脂肪酸合成的重要前体物参与长链脂肪酸的合成。三个通路通过乙酰辅酶A相互联系,构成闭环,从而促进植物乳杆菌细胞生长的能量代谢与增殖。

关键词：石斛多糖甘露糖苷酶植物乳杆菌增殖转录组学

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血清α-甘露糖苷酶活性的比色测定法

临床检验杂志 1991年第1期9卷 16-17页

作者：张世民吴孟超陈汉崔贞福第二军医大学肝胆外科研究所上海200433

复合糖在正常的生命活动中起着十分重要的作用.体内复合糖代谢维持在一个相对恒定的状态,这种恒定状态直接取决于复合糖合成酶和分解酶之间的平衡.肿瘤时。

关键词：甘露糖苷酶活性比色法血清

血清锌与α-D-甘露糖苷酶活性测定对恶性肿瘤诊断价值初探

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中国现代医学杂志 1998年第8期8卷 49-50页

作者：王先酉李明张凤英湖南医学高等专科学校生化教研室

报道４５例恶性肿瘤患者血清锌和酸性－α－Ｄ－甘露糖苷酶活性检测结果。与正常对照比较，血清锌水平降低非常显著；血清酸性－α－Ｄ－甘露糖苷酶活性则显著升高，二者呈非显著性的负相关。后者在血清中升高可能有临床意义。

关键词：恶性肿瘤锌酸性α-D 甘露糖苷酶诊断

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功能性指标评价人体锌营养状况的效果观察

解放军预防医学杂志 1999年第4期17卷 267-269页

作者：王冬兰朱开平程义勇蒋与刚顾景范军事医学科学院卫生学环境医学研究所天津300050 解放军第二五四医院营养科

目的：为了验证功能性指标在评价人体锌营养状况的效果。方法：选健康男性青年，进行体格检查和有关血液生化分析，重点观察碱性磷酸酶（ＡＫＰ）、甘露糖苷酶（Ｍａｎｎ）和暗适应能力（ＤＡ）等功能指标在膳食锌干预前后的... 详细信息

目的：为了验证功能性指标在评价人体锌营养状况的效果。方法：选健康男性青年，进行体格检查和有关血液生化分析，重点观察碱性磷酸酶（ＡＫＰ）、甘露糖苷酶（Ｍａｎｎ）和暗适应能力（ＤＡ）等功能指标在膳食锌干预前后的变化。结果：实验组暗适应所需的时间在试前显著长于对照组；但经２０ｄ补锌后，两组的暗适应能力未见明显差别。实验组的ＡＫＰ活性在补锌后明显提高，而Ｍａｎｎ活性（差值）在补锌后显著降低。表明血浆锌水平结合３项功能指标的变化，能够综合反映机体缺锌的可能性。结论：锌依赖酶ＡＫＰ和Ｍａｎｎ的活性以及ＤＡ的测定，有助于筛选边缘缺锌的人体。

关键词：人体锌功能性指标碱性磷酸酶甘露糖苷酶

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山羊甘肃棘豆中毒临床病理学研究

西北农林科技大学学报（自然科学版） 1990年第3期24卷 62-68页

作者：顾百群段得贤崔中林曹光荣西北农业大学兽医系

每天以10g/kg的剂量,经瘤胃瘘管给山羊甘肃棘豆(Oxytropis kansuensis)粉,20d后受试羊(n=8)陆续出现与自然病例相同的中毒症状,中毒羊血清碱性磷酸酶、谷草转氨酶、精氨酸酶、肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶活性和尿素氮含量明显升高,尿低聚... 详细信息

每天以10g/kg的剂量,经瘤胃瘘管给山羊甘肃棘豆(Oxytropis kansuensis)粉,20d后受试羊(n=8)陆续出现与自然病例相同的中毒症状,中毒羊血清碱性磷酸酶、谷草转氨酶、精氨酸酶、肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶活性和尿素氮含量明显升高,尿低聚糖及其中甘露糖含量明显升高,血清α-甘露糖苷酶活性和E-玫瑰花环形成率明显下降,脑脊液乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、肌酸磷酸激酶活性明显升高。表明甘肃棘豆对山羊脑、肝、肾、心和其他脏器有不同程度的损害作用,并能降低机体细胞免疫功能,其有毒成分属于吲哚兹定生物碱。

关键词：甘肃棘豆病理学临床病理学甘露糖苷酶吲哚兹定生物碱疯草病

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碳水化合物酶对生长育肥猪的影响

饲料研究 2011年第5期34卷 1-4,11页

作者：付锦锋周永奎王钊广州博仕奥集团湖南唐人神集团

1材料与方法1.1酶碳水化合物复合酶（CS）由韩国首尔Easy BioSystem公司提供。CS由40%黑曲霉（PRL 2315）和米曲霉（ATCC 66222）发酵产物和60%脱水大麦芽组成。主要酶种包括,α-1,6-半乳糖苷酶、β-1,4-甘露聚糖酶和β-1,4-甘露糖苷酶... 详细信息

1材料与方法1.1酶碳水化合物复合酶（CS）由韩国首尔Easy BioSystem公司提供。CS由40%黑曲霉（PRL 2315）和米曲霉（ATCC 66222）发酵产物和60%脱水大麦芽组成。主要酶种包括,α-1,6-半乳糖苷酶、β-1,4-甘露聚糖酶和β-1,4-甘露糖苷酶。还有少量的β-葡萄糖苷酶、纤维二糖酶、

关键词：碳水化合物复合酶生长育肥猪 β-葡萄糖苷酶半乳糖苷酶甘露聚糖酶甘露糖苷酶纤维二糖酶