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负载漆黄素的纳米药物制备及其对小鼠急性肝损伤的保护作用研究

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负载漆黄素的纳米药物制备及其对小鼠急性肝损伤的保护作用研究

作者：杨慧青岛科技大学

学位级别：硕士

目的药物性肝损伤是临床上常见的急性肝损伤之一,引起药物性肝损伤的最常见的原因是过量使用对乙酰氨基酚。目前,临床上对于对乙酰氨基酚引起的急性肝损伤只有N-乙酰半胱氨酸一种治疗药物,但是N-乙酰半胱氨酸对于晚期的患者作用较弱。因... 详细信息

目的药物性肝损伤是临床上常见的急性肝损伤之一,引起药物性肝损伤的最常见的原因是过量使用对乙酰氨基酚。目前,临床上对于对乙酰氨基酚引起的急性肝损伤只有N-乙酰半胱氨酸一种治疗药物,但是N-乙酰半胱氨酸对于晚期的患者作用较弱。因此,研究新的治疗药物具有很重要的意义。本研究将构建甘草酸二钾-漆黄素前体胶束这一创新制剂,并使用对乙酰氨基酚构建小鼠急性肝损伤模型,评价其对于急性肝损伤的治疗效果。方法1.使用溶剂蒸发法构建甘草酸二钾-漆黄素前体胶束,优化处方,并对其固体及溶液特性进行表征;评价其储存稳定性;采用FRAP法测定其抗氧化能力;使用溶血实验考察甘草酸二钾前体胶束的安全性。2.测定甘草酸二钾-漆黄素前体胶束在不同介质中的溶解度,并通过透析袋实验对其体外释放特性进行考察;采取体外平行人工膜渗透实验对前体胶束渗透性进行考察;使用香豆素6作为模型药物通过荧光强度考察其体内吸收特性。3.使用对乙酰氨基酚构建小鼠肝损伤模型。观察小鼠72小时内的存活情况;收集小鼠肝脏、脾脏并称重,观察肝脏外观,计算肝指数以及脾指数;对小鼠血清中ALT和AST进行测定;石蜡切片H＆E染色考察肝脏病理变化;TUNEL法对小鼠肝脏细胞凋亡情况进行评价;小鼠肝脏中氧化应激和炎症因子水平进行考察。结果1.成功制备甘草酸二钾-漆黄素前体胶束。前体胶束水溶性良好,溶液呈黄色透明状,粒径为84.17±3.88 nm,包封率达到99.65±0.78%;储存稳定性良好;抗氧化能力较强;无溶血性,安全性良好。2.在水中,甘草酸二钾-漆黄素前体胶束中漆黄素的溶解度是常规漆黄素的1804倍;体外释放结果表明,在5小时前体胶束的累积释放量达到了92.87±2.79%;在3.5小时前体胶束中漆黄素的渗透量为267.30±14.53μg,是漆黄素混悬液的21.2倍;体内吸收实验表明,甘草酸二钾的包封显著提高了模型药物在肠道的吸收。3.使用对乙酰氨基酚成功建立小鼠肝损伤模型。甘草酸二钾-漆黄素前体胶束组72 h存活率为83.3%;肝脏外观与健康对照组相似;血清中ALT和AST恢复到正常水平（与健康对照组相比P＞0.05）;与模型组相比,肝脏中的氧化应激和炎症因子水平均显著降低（P＜0.05）。结论甘草酸二钾-漆黄素前体胶束显著提高了药物的溶解度和体内吸收,对于对乙酰氨基酚引起的小鼠急性肝损伤具有保护作用,具有良好的进一步研究前景。

关键词：对乙酰氨基酚急性肝损伤漆黄素甘草酸二钾前体胶束溶解度

增溶型柚皮素滴眼液的制备及其有效性实验研究

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增溶型柚皮素滴眼液的制备及其有效性实验研究

作者：王惠青岛科技大学

学位级别：硕士

目的柚皮素(Naringenin,NAR),综合研究表明,其药理活性丰富且广泛,已知的包括抗氧化等。最近的研究报道,在治疗眼部相关疾病方面柚皮素展现出一定的疗效,包括抑制角膜新生血管化、视网膜损伤、糖尿病视网膜病变、葡萄膜炎等。柚皮素的... 详细信息

目的柚皮素(Naringenin,NAR),综合研究表明,其药理活性丰富且广泛,已知的包括抗氧化等。最近的研究报道,在治疗眼部相关疾病方面柚皮素展现出一定的疗效,包括抑制角膜新生血管化、视网膜损伤、糖尿病视网膜病变、葡萄膜炎等。柚皮素的水溶性较差,使其在眼科方向的应用受到了较大限制,一些重要参数如稳定性和其他性能也未有很好的解决方法,因此,制备一种有效增溶柚皮素的眼用制剂有很重要的意义。本实验主要通过两种辅料制备增溶型柚皮素滴眼液,并对其进行表征和药效学评价。方法1.通过溶剂蒸发水化法以聚乙烯吡咯烷酮K-17PF(Kollidon17PF,17PF)为辅料制备增溶型柚皮素滴眼液,测定络合率以确定滴眼液最优处方,对制备的滴眼液进行表征;分别于4℃和25℃进行储存稳定性考察;采用2,2’-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid(ABTS)法测定抗氧化活性;采用眼部临床指标综合评分法和病理学考察评价其眼局部刺激性,Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide(MTT)法检测细胞毒性评价其安全性;透析膜检测其体外释放情况;新西兰兔点眼高效液相法检测柚皮素滴眼液在眼部吸收分布情况;建立眼局部炎症模型,对滴眼液抗炎活性进行评价。2.选取有一定药理活性的甘草酸二钾(Dipotassium Glycyrrhizinate,DG)作为辅料,溶剂蒸发水化法制备甘草酸二钾增溶型柚皮素胶束滴眼液,测定其包封率、电位粒径;ABTS法检测其抗氧化能力;眼部综合评分法考察眼局部刺激性;香豆素6(Cou-6)荧光标记检测滴眼液在小鼠角膜的吸收情况。3.选用Balb/C眼表给予苯扎氯铵(Benzalkonium chloride,BAC)构建实验型小鼠干眼症模型。选取造模成功的小鼠进行分组给药,给药组分为:DG-NAR滴眼液组、NAR溶液组、DG溶液组、物理混合物组、阳性对照组、PBS组,按实验方案给药同时苯扎氯铵维持,与健康组进行对照;裂隙灯对各组小鼠角膜荧光素钠染色与虎红着色情况拍照观察;测定其泪液分泌、角膜敏感度情况;SEM观察各组小鼠角膜上皮和内皮微观结构的变化;HE染色评价角膜病理情况;Western Blot考察高迁移率族蛋白B1(高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group B1)表达;ELISA考察角膜中炎症因子表达。结果1.17PF增溶型柚皮素滴眼液络合率为98.51±0.86%,平均粒径为6.73±0.42nm,储存稳定性良好。17PF增溶柚皮素显著提高了柚皮素的抗氧化活性和和膜透性,滴眼液有良好体外细胞耐受性且无眼局部刺激性;较柚皮素溶液,眼部吸收情况也得到极大改善。17PF-NAR显著提高了NAR在兔眼部的抗炎活性。2.甘草酸二钾增溶型柚皮素滴眼液的包封率接近100.00%,平均粒径为24.75±0.52 nm,DG-NAR抗氧化活性较NAR、DG溶液得到显著提高。眼部安全性良好且在角膜的吸收状况得到极大改善。3.通过与健康小鼠比较,干眼症小鼠明显观察到泪液的产生量下降,角膜敏感度降低。与PBS组比较,其他给药组的治疗程度有一定提高,DG-NAR滴眼液组显著促进了干眼症的修复(p甘草酸二钾均可显著增溶柚皮素,制备的滴眼液表征和理化性质良好。柚皮素有较好的抗炎作用,17PF增溶型柚皮素滴眼液在眼部炎症的治疗中重发挥要作用;甘草酸二钾增溶型柚皮素滴眼液调控HMGB1信号通路在干眼中发挥重要作用,基于HMGB1抑制剂-甘草酸二钾所构建的增溶型柚皮素滴眼液发挥多靶点调控HMGB1信号通路从而有效防治干眼症的作用。

关键词：柚皮素 17PF 干眼症 HMGB1 甘草酸二钾

以HMGB1为靶点防治糖尿病性角膜病变的有效性及其机制研究

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以HMGB1为靶点防治糖尿病性角膜病变的有效性及其机制研究

作者：侯玉真青岛科技大学

学位级别：硕士

目的糖尿病性角膜病变(Diabetic Keratopathy,DK)是常见的糖尿病眼部并发症,其发病机制尚未完全明确,临床尚无有效的手术或药物等干预措施。因此,研究DK新的疾病机制、新的治疗靶标和有效防治措施具有重要的临床意义。本研究将探讨链脲... 详细信息

目的糖尿病性角膜病变(Diabetic Keratopathy,DK)是常见的糖尿病眼部并发症,其发病机制尚未完全明确,临床尚无有效的手术或药物等干预措施。因此,研究DK新的疾病机制、新的治疗靶标和有效防治措施具有重要的临床意义。本研究将探讨链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱导的Ⅰ型糖尿病模型小鼠角膜病理生理改变和上皮/神经损害,以及高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group B1,HMGB1)及下游信号因子晚期糖基化终产物受体(Receptor of Advanced Glycation Endproducts,RAGE)在DK发生发展中的变化;探讨抑制HMGB1在糖尿病模型小鼠角膜上皮/神经损伤后修复中的作用;构建载药甘草酸二钾纳米胶束滴眼液后,评价甘草酸二钾纳米胶束滴眼液协同调控HMGB1信号通路促进糖尿病模型小鼠角膜上皮/神经损伤后的修复。方法1.C57BL/6J小鼠腹腔注射STZ建立Ⅰ型糖尿病模型。于造模成功后4、8、12、16周测量同龄正常鼠和糖尿病鼠的体重、血糖、泪液分泌量、眼压等指标;利用裂隙灯观察各组小鼠角膜荧光素钠与虎红着色情况;扫描电子显微镜观察各组小鼠角膜上皮/内皮微观结构随年龄和/或糖尿病进程的改变;TUNEL法评价小鼠角膜上皮细胞凋亡情况;角膜敏感度仪测量角膜敏感度;采用角膜神经染色的方法观察各组小鼠角膜神经密度;利用Western Blot法和免疫组化法检测和观察HMGB1/RAGE蛋白的表达情况。2.构建糖尿病小鼠角膜上皮损伤模型,分别结膜下注射外源性HMGB1蛋白和甘草酸二钾溶液,利用荧光素钠染色观察各组小鼠角膜上皮损伤后的修复情况,观察各组小鼠角膜上皮修复后角膜神经密度。并利用Western Blot法检测相关蛋白的表达水平。3.选用Gen1121(Gen)为模型药物,构建载药甘草酸二钾纳米胶束滴眼液,测定其包封率与粒径,评价其储存稳定性;采用FRAP和ABTS法测定甘草酸二钾纳米胶束滴眼液的抗氧化能力;考察甘草酸二钾纳米胶束滴眼液的透膜与体外释放特性、安全性、在体吸收特性。构建糖尿病小鼠角膜上皮损伤模型,将模型小鼠分为五组:PBS滴眼组、甘草酸二钾滴眼组、Gen滴眼组、甘草酸二钾和Gen混合药物滴眼组、甘草酸二钾-Gen纳米胶束溶液滴眼组,按实验方案对各组小鼠进行治疗。于规定时间点,观察并检测各组小鼠角膜上皮愈合速度、角膜神经密度以及角膜敏感度;利用Western Blot法和免疫组化法检测和观察HMGB1/RAGE蛋白的表达情况,ELISA检测小鼠角膜中IL-6和IL-1β的含量。结果1.糖尿病小鼠的泪液分泌量减少,泪膜破坏,眼压升高,角膜上皮微观结构改变;伴随着眼表功能损害,角膜上皮细胞凋亡增多,角膜敏感度降低,神经密度降低;Western Blot法和免疫组化结果显示HMGB1/RAGE的表达量随糖尿病病程延长呈持续升高的趋势;相对于正常同龄鼠,糖尿病小鼠角膜上皮损伤后上皮/神经愈合延迟(p甘草酸二钾可以显著促进糖尿病小鼠角膜/神经损伤修复(p甘草酸二钾构建的纳米胶束滴眼液平均粒径为29.5±2.05 nm,包封率为98.96±0.95%,无眼表刺激性。纳米胶束包封后Gen的抗氧化能力增强,透膜以及在体吸收能力增强。与PBS组相比,甘草酸二钾溶液组角膜上皮愈合速度加快(p甘草酸二钾组、混合溶液组相比,纳米胶束滴眼液显著促进角膜上皮愈合和角膜神经的再生与修复(p甘草酸二钾所构建的纳米胶束滴眼液能够发挥多靶点调控HMGB1信号通路,有效防治DK的作用。

关键词：糖尿病性角膜病变 HMGB1 甘草酸二钾角膜上皮愈合

细胞脂筏对钩端螺旋体感染的作用及潜在的治疗价值

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细胞脂筏对钩端螺旋体感染的作用及潜在的治疗价值

作者：吕天宝吉林大学

学位级别：硕士

钩端螺旋体病是由致病性钩端螺旋体感染引起的人畜共患传染病,其在全球范围内广泛传播,为人畜互源,自然疫源性传染病。被感染的人或动物出现黄疸、流产、脓毒血症、肝肾衰竭甚至死亡等症状。钩端螺旋体感染后在宿主的肾脏中长期定殖有... 详细信息

钩端螺旋体病是由致病性钩端螺旋体感染引起的人畜共患传染病,其在全球范围内广泛传播,为人畜互源,自然疫源性传染病。被感染的人或动物出现黄疸、流产、脓毒血症、肝肾衰竭甚至死亡等症状。钩端螺旋体感染后在宿主的肾脏中长期定殖有并随尿液排出,其在潮湿的环境中可存活数月并保持感染性,严重威胁着公共卫生安全和畜牧业的发展。因此,揭示钩端螺旋体的入胞机制有助于靶向从源头控制其感染,减轻其对机体的损伤和钩端螺旋体尿的排出。但是目前少有关于钩端螺旋体入胞机制的研究。细胞脂筏是脂膜中的纳米级膜结构域,其富含胆固醇和鞘磷脂,包括多种信号转导蛋白和转运蛋白。已有报道表明越来越多的病原体的入胞过程需要脂筏的参与。本实验通过研究钩体入胞过程与脂筏的关系,为临床筛选有效防治钩端螺旋体病的药物提供理论基础。首先在体外实验中验证脂筏是否和钩端螺旋体体入胞有关。用甲基β环糊精破坏J774A.1细胞的脂筏结构,钩端螺旋体感染40 min后收集细胞,用q PCR检测钩端螺旋体特异性基因Lip32,结果表明胞内钩端螺旋体量明显减少,胆固醇恢复脂筏结构后,胞内钩端螺旋体量有所升高,同时,用Cav-1小RNA干扰实验破坏J774A.1细胞脂筏结构,q PCR结果同样显示胞内钩端螺旋体量明显降低,以上结果证明钩端螺旋体进入细胞需要脂筏的完整性。另外,在Vero细胞上进行了同样的实验,结果同样表明了钩端螺旋体进入细胞对脂筏的依赖性,并且证明了钩端螺旋体进入细胞需要脂筏与巨噬细胞的吞噬作用无关。在对胞内钩端螺旋体进行透射电子显微镜观察可知,J774A.1细胞在感染后第40 min和第4 h,脂筏破坏组的胞内钩端螺旋体量明显减少,并且钩端螺旋体的形态学发生改变,说明脂筏破坏后,细胞清除钩端螺旋体的能力增强。q PCR和细菌培养计数也证明了脂筏破坏组在感染4 h后胞内钩端螺旋体基本被杀死。Western Blot结果显示,脂筏被破坏后细胞自噬相关蛋白LC3-Π和LAMP的表达量升高,证明了自噬的激活。为了探究细胞清除钩端螺旋体能力的增强是否与细胞自噬有关,采用雷帕霉素和3MA分别刺激细胞后感染钩体,钩端螺旋体培养计数结果显示,雷帕霉素处理组胞内钩端螺旋体量明显降低,表明细胞自噬水平的提高有助于杀灭钩端螺旋体。以上研究工作表明,钩端螺旋体可以通过脂筏进入胞内,避免激活细胞自噬。为了探究干扰细胞脂筏的药物能否起到抗钩端螺旋体感染的效果,我们分别用甲基β环糊精和甘草酸（一种从甘草根中分离出来的三萜甘,具有破坏细胞脂筏完整性的生物学功能）进行了体内体外实验。体外实验证明甘草酸二钾在预处理TCMK-1细胞2 h后,能阻止钩端螺旋体进入细胞。不同动物模型的药物治疗效果显示,腹腔注射甲基β环糊精和甘草酸二钾并不能提高钩端螺旋体感染后金黄地鼠的存活率,证明甲基β环糊精和甘草酸二钾不能治疗急性钩端螺旋体病;但在慢性钩端螺旋体病模型中,感染5 D后腹腔注射甲基β环糊精和甘草酸二钾能够明显缓解钩端螺旋体感染引起的肾脏病理损伤,并且减少肾脏中的钩端螺旋体定殖。通过ELISA检测肾脏中炎性细胞因子的分泌,结果表明甘草酸二钾能够降低肾组织炎性细胞因子（IL-1β,TNF-α）的释放;q PCR结果证明了治疗组肾脏中的钩端螺旋体量降低。体外实验对甘草酸二钾作用机制进行研究,q PCR检测炎性细胞因子和趋化因子的m RNA水平,结果证明甘草酸二钾能够减低钩端螺旋体感染引起的TCMK-1细胞的细胞因子（IL-1β,IL-6,TNF-α）,趋化因子（RANTES,MCP-1）和i NOS的m RNA的表达;并通过ELISA方法检测细胞因子的分泌,结果证明甘草酸二钾能够减低钩端螺旋体感染引起的TCMK-1细胞的细胞因子（IL-1β,TNF-α）的分泌。Western blot检测NF-κB和MAPK信号通路,结果证明甘草酸二钾抑制了钩端螺旋体感染引起的NF-κB和MAPK信号通路的活化。以上结果说明了甘草酸二钾通过抑制钩端螺旋体感染引起的NF-κB和MAPK信号通路的活化,抑制炎性细胞因子和趋化因子的表达,起到抗炎作用。综上所述,本实验证明了钩端螺旋体进入细胞需要脂筏,破坏脂筏后,钩端螺旋体进入细胞的数量明显减少,并且细胞清除钩端螺旋体的能力增强,这与细胞自噬水平的升高有关。应用干扰细胞脂筏的药物甲基β环糊精和甘草酸二钾对急性钩端螺旋体病无效,但能够治疗慢性钩端螺旋体病。

关键词：钩端螺旋体脂筏钩端螺旋体病甘草酸二钾

新型卡维地洛前体胶束及其对小鼠肝损伤的预防与治疗作用

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新型卡维地洛前体胶束及其对小鼠肝损伤的预防与治疗作用

作者：滕含章青岛科技大学

学位级别：硕士

对乙酰氨基酚过量引起的药物性肝损伤是临床常见急症。目前只有N-乙酰半胱氨酸被批准临床用于肝损伤的急救。但该药生物利用度低,治疗窗窄,只在肝损伤发生的初期有效,限制其临床应用,研究新型肝损伤预防/治疗药物具有重要临床意义。已... 详细信息

对乙酰氨基酚过量引起的药物性肝损伤是临床常见急症。目前只有N-乙酰半胱氨酸被批准临床用于肝损伤的急救。但该药生物利用度低,治疗窗窄,只在肝损伤发生的初期有效,限制其临床应用,研究新型肝损伤预防/治疗药物具有重要临床意义。已上市药物卡维地洛是潜在的肝损伤预防/治疗药物,但其溶解度差,口服生物利用度低,影响其预防/治疗肝损伤的效果。本项目拟以具有保肝活性的中药甘草酸为主要纳米载体,辅以小分子植物提取物瑞鲍迪苷A为混合纳米载体,增溶增效主药卡维地洛,制备一种新型的卡维地洛前体纳米胶束制剂,评价其对对乙酰氨基酚诱导的小鼠肝损伤的预防和治疗的有效性,并揭示其作用机制。采用溶剂蒸发法成功构建卡维地洛前体胶束,以包封率为筛选指标,借助实验设计软件Design-Expert对卡维地洛前体胶束的处方进行优化,得到卡维地洛与纳米载体(即甘草酸二钾&瑞鲍迪苷A混合物)的最优比为1:16,甘草酸二钾与瑞鲍迪苷A的最优比为8.13:1,该比例下甘草酸二钾&瑞鲍迪苷A的临界胶束浓度较小,加入至水或PBS后,能够立即自组装成胶束。该处方下卡维地洛前体胶束的包封率为99.67±0.02%。成功建立卡维地洛分光光度计和高效液相分析方法,用于卡维地洛体外定性和定量分析。制备得到的卡维地洛前体胶束是一种均匀的白色粉末,微观下呈簇状纳米球状结构。由于被成功包封于甘草酸二钾&瑞鲍迪苷A中,卡维地洛以无定形形式存在于前体胶束中,在水中的表观溶解度提高了502倍。卡维地洛前体胶束溶于水性介质中,形成清澈透亮的卡维地洛纳米胶束溶液,平均粒径为15.62±0.27 nm,其多分散系数为0.126±0.010,Zeta电位为-11.77±0.93 m V。卡维地洛前体胶束在25℃环境中具有良好的储存稳定性,在人工肠液中体外释放迅速且不受介质p H影响。卡维地洛前体胶束表现出了较强的体外抗氧化活性。卡维地洛前体胶束具有良好的生物相容性,可以用于口服药物递送系统。急性肝损伤预防/治疗效果评价表明,对乙酰氨基酚过量可诱导小鼠重度肝损伤。卡维地洛前体胶束对对乙酰氨基酚过量表现出了显著的预防/治疗作用,能够有效改善肝损伤小鼠的肝脏组织状态,降低血清AST和ALT水平。这种预防/治疗机制与抑制肝脏氧化应激和HMGB1信号通路相关促炎因子有关。卡维地洛前体胶束制备工艺简单,所用成分均是已获批药物和辅料,有利于临床转化。该前体胶束在体内外实验中均展现出了优异的特性,对肝损伤展现出了较强的预防/治疗效果,而通过调控肝脏中HMGB1信号通路而发挥药效是其作用机制之一。卡维地洛前体胶束这一新剂型可有效提高卡维地洛治疗对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤的药效,为卡维地洛提供了一种较为新颖且具有前景的老药新用思路。

关键词：卡维地洛急性肝损伤对乙酰氨基酚前体胶束甘草酸二钾瑞鲍迪苷A

抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）天然化合物的体外筛选及其抗病毒机制研究

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抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）天然化合物的体外筛选及其抗...

作者：孙娜山西农业大学

学位级别：硕士

目的：从20种天然化合物中筛选出具有体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiration syndrome virus, PRRSV）的化合物,并探讨其抗病毒机制。方法：采用细胞病变法（cytopathologic effect, CPE）和噻唑蓝... 详细信息

目的：从20种天然化合物中筛选出具有体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiration syndrome virus, PRRSV）的化合物,并探讨其抗病毒机制。方法：采用细胞病变法（cytopathologic effect, CPE）和噻唑蓝比色法（3-（4,5-dimethyithiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT）来测定天然化合物在Marc-145细胞上的最大安全浓度（maximum no-cytotoxic concentration, MNTC）、50%细胞毒性浓度（50%cytotoxic concentration, CC50）、50%药物有效浓度（50%effective concentration, EC50）以及化合物对PRRSV的最大抑制率（maximum inhibition ratio, MIR）。筛选出选择指数（selection index, SI）大于3同时最大抑制率高于50%的化合物,并通过复制抑制试验、吸附抑制试验及直接灭活病毒试验来解释药物的抗病毒机制。此外,还通过Annexin V/PI双染法及Western blot检测caspase-3表达量,研究化合物对PRRSV诱导的细胞凋亡的影响。结果：从20种天然化合物中筛选出了甘草酸二钾（dipotassium glycyrrhizinate, DG）、苦参碱（Matrine,MT）和丹参酮ⅡA磺酸钠（sodium tanshinone IIA sulfonate, STS）在Marc-145细胞上具有抗PRRSV的作用。DG、MT和STS的SI数值分别为：＞16.6、＞3.8和＞10.9，其最高抑制率均高于90%。DG、MT和STS在病毒复制1-14h的抑制率均高于70%,且对PRRSV的直接灭活率均高于90%。此外,DG、MT和STS处理组的晚期细胞凋亡数明显低于PRRSV对照组,且DG和MT处理组未检测到活化的caspase-3片段。结论：DG、MT和STS在体外具有抗PRRSV的作用,其抗病毒机制可能是通过持续抑制PRRSV的复制、直接灭活病毒及干扰PRRSV诱导的细胞凋亡来实现的。

关键词：天然化合物猪繁殖与呼吸综合征病毒甘草酸二钾苦参碱丹参酮 IIA磺酸钠细胞凋亡

水+混合溶剂体系的液液相平衡及在分离中的应用

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水+混合溶剂体系的液液相平衡及在分离中的应用

作者：金春英华侨大学

学位级别：硕士

水+混合溶剂体系是一种新型的萃取分离体系,可适用于生物物质分离、中草药和天然产物中有效成分的提取、分析中样品的富集和分离、溶剂分离和环境保护等领域,是一种具有潜在应用价值的萃取分离体系。本文对由水+乙醇+异丁醇组成的水+... 详细信息

水+混合溶剂体系是一种新型的萃取分离体系,可适用于生物物质分离、中草药和天然产物中有效成分的提取、分析中样品的富集和分离、溶剂分离和环境保护等领域,是一种具有潜在应用价值的萃取分离体系。本文对由水+乙醇+异丁醇组成的水+混合溶剂萃取体系的液液相平衡关系做了较为详细的研究,并探讨了该体系对甘草酸二钾的萃取分配规律。主要内容如下: 1)采用浊度法实验测定了水+异丁醇二元体系液液相平衡数据,并用遗传算法对该体系NRTL方程的二元相互作用参数进行了回归计算和数据关联,结果表明关联精度较高,温度对模型参数有一定的影响,当考虑二者之间为线性关系时,关联精度最高,但取与温度无关的常数,已能满足关联精度要求;2)采用浊度一密度法实验测定了30℃、35℃下水+乙醇+异丁醇三元体系的溶解度数据以及液液相平衡数据。结果表明,该体系30～35℃下两相的大致摩尔分数范围为:水0.44～0.99,乙醇0～0.105,异丁醇0～0.55。该体系在某个区域内能够形成水分含量较高的较为温和的萃取环境,可用于生物活性物质的分离和提纯;3)采用NRTL模型和Othmer-Tobias和Bancroft经验方程对由水+乙醇+异丁醇组成的水+混合溶剂体系的液液相平衡关系进行了预测、关联和分析。结果表明:由本文的二元液液相平衡实验数据关联得到的水+异丁醇体系的相互作用参数和文献上由二元气液相平衡数据关联得到的水+乙醇体系的相互作用参数都具有预测三元液液相平衡关系的能力,而文献上由二元气液相平衡数据关联得到的乙醇+异丁醇体系的相互作用参数不具有预测三元液液相平衡关系的能力;可以用从30℃三元液液相平衡数据关联回归得到的模型参数来预测35℃时的液液相平衡关系;水+异丁醇的相互作用参数与温度关系不是很密切,计算时取与温度无关的常数即能满足关联精度要求;Othmer-Tobias和Bancroft经验方程可用于水+乙醇+异丁醇两相体系的液液相平衡关系的关联计算,但这类经验方法并不具有预测能力。 4)实验测定甘草酸二钾在水+乙醇+异丁醇液液两相体系中的分配系数,考察了影响分配系数的影响因素,用经验方程对分配系数进行了经验关联,并用红外和TG对萃取产物进行表征。结果表明:体系的初始点越靠近临界点,甘草酸二钾的分配系数越大;温度对甘草酸二钾的分配有～定的影响,但分配系数随温度变化不大;pH值对甘草酸二钾的分配有较大的影响,在pH=2附近,分配系数高出其他位置达8倍;改进的Diamond-Hsu模型可以用于关联甘草酸二钾在水+乙醇+异丁醇体系中的分配系数;红外和TG分析结果表明萃取产物与甘草酸二钾样品的性质特征相同。

关键词：异丁醇乙醇萃取混合溶剂液液相平衡 NRTL 遗传算法甘草酸二钾分配系数

“鸡尾酒型”纳米滴眼液对角膜HMGB1信号通路的干预作用及其机制研究

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“鸡尾酒型”纳米滴眼液对角膜HMGB1信号通路的干预作用及其机制...

作者：李琦琦青岛科技大学

学位级别：硕士

目的:角膜损伤是眼科中高发性的疾病,严重损害患者的视力和生活质量,而研究发展机制,探索有效的药物治疗方法是目前亟待解决的临床与科研问题。高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group Box 1,HMGB1)能够促使NF-кB等炎症分子释放,导致角... 详细信息

目的:角膜损伤是眼科中高发性的疾病,严重损害患者的视力和生活质量,而研究发展机制,探索有效的药物治疗方法是目前亟待解决的临床与科研问题。高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group Box 1,HMGB1)能够促使NF-кB等炎症分子释放,导致角膜上皮损伤后修复延缓,角膜神经敏感度下降,角膜组织发生病变。抑制HMGB1信号通路是角膜上皮损伤后的有效干预手段。角膜神经因子中的血管活性肠多肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)不仅促进神经系统发育过程中神经元的分化和修复,还可抑制过度炎症和免疫反应,对维持和调节角膜组织的免疫稳态起重要作用。本研究目的是构建“鸡尾酒型”纳米滴眼液,采用甘草酸二钾(dipotassium glycyrrhizinate,DG)和α-葡糖基橙皮苷(a-glucosyl hesperidia,GH)这两种小分子活性成分构建稳定型纳米胶束滴眼液,增溶增效双脱甲氧基姜黄素(bisdemethoxycurcumin,BDMC)。探讨该纳米滴眼液对HMGB1信号通路的调控作用,对VIP信号通路中关键分子VIP蛋白在角膜的表达变化的影响,以及探讨该信号通路中多靶点调控相关分子之间可能存在的相互关系。方法:1.构建“鸡尾酒型”纳米滴眼液,即甘草酸二钾-α-葡糖基橙皮苷-双脱甲氧基姜黄素纳米胶束滴眼液。测定此滴眼液的包封率,粒径,PDI,电位,溶解度;眼部安全性;眼部吸收特性。2.建立正常小鼠角膜上皮损伤模型,建模成功后按预定方法滴注各组药物后于预定时间检测以下指标:荧光素钠染色检查角膜上皮修复程度;测量角膜神经敏感度;检测角膜组织病理;进行角膜神经染色判断神经纤维恢复情况;测定NF-κB、IL-6、HMGB1、TLR2、TLR4与VIP、SHH等分子水平表达差异。3.建立小鼠角膜去神经模型和角膜上皮损伤模型,建模成功后按预定方法滴注各组药物后于预定时间检测以下指标:荧光素钠染色检查角膜上皮修复程度;测量角膜神经敏感度;检测角膜组织病理;进行角膜神经染色判断神经纤维恢复情况;测定NF-κB、IL-6、HMGB1、TLR2、TLR4、TLR9与VIP、SHH等分子水平表达差异。4.构建AQP1基因敲除小鼠模型和角膜上皮损伤模型,建模成功后按预定方法滴注各组药物后于预定时间检测以下指标:荧光素钠染色检查角膜上皮修复程度;虎红染色检查干眼程度;测量角膜神经敏感度;检测角膜组织病理;测量泪液分泌量。结果:1.甘草酸二钾-α-葡糖基橙皮苷-双脱甲氧基姜黄素纳米滴眼液包封率为98.37±2.26%,平均粒径为4.06±0.22nm,多分散性指数为0.254±0.04,Zeta电位为-(21.23±1.86)m V。具有良好的眼部安全性,眼耐受性和眼部吸收特性。2.正常小鼠角膜上皮损伤模型中,0.5mg/m L甘草酸二钾-α-葡糖基橙皮苷-双脱甲氧基姜黄素纳米滴眼液组显著促进角膜上皮损伤修复,显著促进神经角膜神经敏感度恢复,促进角膜组织损伤的愈合。并且显著降低NF-κB和IL-6的表达水平,显著降低HMGB1,TLR4和TLR2的表达水平,增强VIP和SHH的表达水平。3.角膜去神经小鼠角膜上皮损伤模型中,0.5mg/m L甘草酸二钾-α-葡糖基橙皮苷-双脱甲氧基姜黄素纳米滴眼液组显著促进角膜上皮损伤修复,显著促进神经角膜神经敏感度恢复,促进角膜上皮神经纤维的再生,促进角膜组织结构的愈合。并且显著降低NF-κB和IL-6的表达,显著降低HMGB1,TLR4,TLR2和TLR9的表达,增强VIP和SHH的表达。***1基因敲除小鼠角膜上皮损伤模型中,0.5mg/m L甘草酸二钾-α-葡糖基橙皮苷-双脱甲氧基姜黄素纳米滴眼液组显著促进角膜上皮损伤修复,显著促进角膜神经敏感度修复,显著促进眼部干燥细胞的活化,增加泪液分泌量,改善眼表干燥症状。结论:本论文制备的纳米滴眼液安全性好,可显著促进正常小鼠角膜上皮/角膜神经损伤后的修复,促进角膜去神经小鼠角膜上皮/角膜神经恢复和再生,促进AQP1基因敲除小鼠角膜上皮/角膜神经修复,且增加泪液分泌量并改善该模型小鼠眼表干燥症状。滴眼液的作用机制与抑制HMGB1信号通路发挥抗炎作用,增强VIP信号通路发挥角膜神经再生作用有关。

关键词：角膜上皮损伤高迁移率族蛋白B1 血管活性肠多肽甘草酸二钾 α-葡糖基橙皮苷双脱甲氧基姜黄素

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利用凝血酸、甘草酸二钾和o-伞花烃-5-醇(以下简称IPMP)的止血、消炎和杀菌功效,开发具有深层杀菌功效的专业牙龈护理牙膏,在防止牙龈出血的同时,对引起口腔疾病的根源——牙菌斑中的有害菌,进行针对性的渗透杀灭。同时,为充分提高上述活性成份的功效,特别开发了具有超细腻丰富泡沫的配方,以协助活性成份在刷牙时快速扩散到口腔中各处。该产品经试验验证,配方稳定,活性成分稳定存留,原料符合法规要求,满足批量上市条件。

关键词：牙龈护理牙膏止血渗透杀菌凝血酸甘草酸二钾异丙基甲基苯酚