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甘草酸二钾体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的活性

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中国兽医学报 2013年第2期33卷 282-286页

作者：孙娜赵昕白元生白喜云李宏全山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 山西省生态畜牧产业管理站山西太原030000

利用细胞病变(CPE)抑制试验和MTT法,通过抗病毒试验来评价甘草酸二钾对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞的保护效果,并通过复制抑制、吸附抑制和直接杀灭3个试验探讨了甘草酸二钾体外抑制PRRSV的作用方式。结果表明,在安... 详细信息

利用细胞病变(CPE)抑制试验和MTT法,通过抗病毒试验来评价甘草酸二钾对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞的保护效果,并通过复制抑制、吸附抑制和直接杀灭3个试验探讨了甘草酸二钾体外抑制PRRSV的作用方式。结果表明,在安全浓度范围内,甘草酸二钾能够显著抑制CPE的产生(抑制率≥100%)。在直接杀灭和复制抑制试验中均表现出较高的抑制率,但在吸附试验中却没有阻断病毒对细胞的吸附,初步推测甘草酸二钾可干扰PRRSV的复制或可直接将其灭活,或两种作用同时存在。说明在体外试验中甘草酸二钾具有良好抗PRRSV活性,可以作为潜在的抗病毒试剂供进一步研究使用。

关键词：甘草酸二钾 PRRSV Marc-145

甘草酸二钾通过调节巨噬细胞极化促进皮肤修复

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日用化学工业（中英文） 2024年第11期54卷 1355-1361页

作者：王学文刘慧王倩杨素珍刘菲山东福瑞达生物股份有限公司山东济南250101

为研究甘草酸二钾促进皮肤修复的作用机理及其与炎症反应的关系,用不同质量分数的甘草酸二钾处理LPS诱导的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)炎症模型,通过流式细胞术、免疫荧光和ELISA的方法研究不同关键指标的变化。通过用甘草酸二钾和甘草... 详细信息

为研究甘草酸二钾促进皮肤修复的作用机理及其与炎症反应的关系,用不同质量分数的甘草酸二钾处理LPS诱导的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)炎症模型,通过流式细胞术、免疫荧光和ELISA的方法研究不同关键指标的变化。通过用甘草酸二钾和甘草酸二钾处理的RAW264.7细胞的培养液作为刺激物,处理人永生化角质形成细胞(HaCaT)细胞划痕模型,研究甘草酸二钾对皮肤修复作用的机制。结果显示,经不同质量分数的甘草酸二钾处理的RAW264.7细胞炎症模型,细胞膜上TLR2的表达降低,CD163的表达增加;RAW264.7细胞内的ROS水平降低;上清液中的NO,TNF-α和IL-6的含量显著降低,IL-4和IL-10的含量显著升高;用0.125%(w/%)甘草酸二钾处理的RAW264.7细胞的培养液作用于HaCaT细胞24 h,观察到HaCaT细胞迁移能力显著增强,然而甘草酸二钾直接作用于HaCaT细胞不能显著促进细胞迁移能力。综上,甘草酸二钾能够通过改善LPS诱导的RAW264.7细胞M1极化,调节炎症因子的分泌,达到促进HaCaT细胞迁移、促进皮肤修复的作用。

关键词：甘草酸二钾巨噬细胞极化皮肤修复

甘草酸二钾体外抗鸡传染性法氏囊炎病毒的作用机制

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中国兽医科学 2012年第6期42卷 642-646页

作者：宋美琴牛丽白元生孙耀贵李宏全山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 山西省生态畜牧产业管理站山西太原030001

利用鸡胚成纤维细胞(CEF)体外培养系统,通过观察细胞病变(CPE)和用MTT法测定细胞活力这两种方法来评价甘草酸二钾体外抑制鸡传染性法氏囊炎病毒(IBDV)对CEF的感染作用,并通过甘草酸二钾对病毒复制、吸附的阻断作用测定试验及直接灭活病... 详细信息

利用鸡胚成纤维细胞(CEF)体外培养系统,通过观察细胞病变(CPE)和用MTT法测定细胞活力这两种方法来评价甘草酸二钾体外抑制鸡传染性法氏囊炎病毒(IBDV)对CEF的感染作用,并通过甘草酸二钾对病毒复制、吸附的阻断作用测定试验及直接灭活病毒测定试验,初步探讨了甘草酸二钾的抗病毒机制。结果显示,甘草酸二钾在安全浓度范围内对病毒感染细胞的抑制率达到70%以上,EC50为663.2±268.4μg/mL,SI>4.52;在阻断病毒复制、直接灭活病毒的试验中,甘草酸二钾显示了较强的抗病毒能力,但在阻断病毒吸附试验中却没有作用,推测其抗病毒机制可能是干扰了病毒的复制和直接使病毒灭活。提示,甘草酸二钾能够作为预防及治疗传染性法氏囊炎的药物或先导化合物。

关键词：甘草酸二钾鸡传染性法氏囊炎病毒抑制率体外试验

甘草酸二钾—木犀草素前体胶束用于肝损伤治疗的有效性及其机制研究

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甘草酸二钾—木犀草素前体胶束用于肝损伤治疗的有效性及其机制研...

作者：王军青岛科技大学

学位级别：硕士

对乙酰氨基酚是临床上使用最多的解热镇痛药之一,过量使用它会引起严重的药物性肝损伤,但目前只有一种解毒剂N-乙酰半胱氨酸被批准用于临床,但这种解毒剂生物利用度较低,且只在肝损伤发生的初期有效。因此,开发一种安全、有效的治疗药... 详细信息

对乙酰氨基酚是临床上使用最多的解热镇痛药之一,过量使用它会引起严重的药物性肝损伤,但目前只有一种解毒剂N-乙酰半胱氨酸被批准用于临床,但这种解毒剂生物利用度较低,且只在肝损伤发生的初期有效。因此,开发一种安全、有效的治疗药物具有一定的临床意义。本研究将制备甘草酸二钾-木犀草素前体胶束,评价其体内吸收;并以小鼠对乙酰氨基酚诱导的肝损伤为模型,探究甘草酸二钾-木犀草素前体胶束对小鼠药物性肝损伤的药理作用,以及对肝脏中高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group B1,HMGB1)及信号通路下游因子晚期糖基化终产物受体(Receptor of Advanced Glycation Endproducts,RAGE)表达的影响。使用溶剂蒸发法建立甘草酸二钾-木犀草素前体胶束,以包封率为指标优化处方,对其固体及溶液进行表征,评价储存稳定性;使用鸡胚尿囊膜实验及溶血实验评价甘草酸二钾-木犀草素前体胶束的安全性。结果显示甘草酸二钾-木犀草素前体胶束水化后的平均粒径为30.32±0.12 nm,多分散性指数为0.138±0.024,Zeta电位为-27.0±0.5 m V。甘草酸二钾-木犀草素前体胶束的包封率为99.16±0.90%。前体胶束溶液无溶血现象,鸡胚尿囊膜实验无出血、凝血现象,安全性良好。使用透析袋法评价甘草酸二钾-木犀草素的体外释放;使用高效液相色谱测定大鼠口服甘草酸二钾-木犀草素前体胶束后的血浆及组织中的药物浓度,并使用DAS软件2.1.1版本计算药物代谢动力学参数。评价甘草酸二钾-木犀草素的口服生物利用度。结果显示甘草酸二钾-木犀草素前体胶束的溶解度是单独木犀草素溶解度的12304.36倍,在24小时,甘草酸二钾-木犀草素前体胶束释放量79.75±5.21%;与木犀草素相比甘草酸二钾-木犀草素前体胶束的相对口服生物利用度达到了171.72%;甘草酸二钾-木犀草素前体胶束在各个组织各时间点的吸收量均高于单独的木犀草素。使用对乙酰氨基酚构建小鼠肝损伤模型。给药完成后,观察肝脏外观;对肝脏及脾脏进行称重,计算肝指数及脾指数;使用试剂盒测定小鼠血清中ALT和AST水平;石蜡切片H&E染色观察小鼠肝脏的病理变化;使用试剂盒测定小鼠肝脏中SOD及MDA水平;ELISA检测小鼠肝脏中TNF-α、IL-6、NF-κB等炎症因子的含量;利用Western Blot检测HMGB1、RAGE蛋白的表达情况。结果显示小鼠腹腔注射对乙酰氨基酚后,肝脏有明显充血、水肿现象;血清ALT、AST水平上升。经过甘草酸二钾-木犀草素前体胶束处理的组,血清ALT、AST水平恢复至正常水平(与健康对照组相比,P>0.05),肝脏、脾脏无明显水肿、充血,肝脏中的炎症因子及氧化应激水平下降。此外,HMGB1/RAGE两种蛋白的表达均显著降低(与PBS相比,P甘草酸二钾-木犀草素前体胶束能够明显提高木犀草素的口服生物利用度,并且能够通过抑制氧化应激以及炎性细胞因子有效缓解对乙酰氨基酚引起的肝损伤。

关键词：肝损伤 HMGB1 甘草酸二钾木犀草素前体胶束

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甘草酸二钾在牙膏中的抑菌作用

日用化学工业 2017年第9期47卷 522-525页

作者：陈钢许海燕骆朋南昌大学食品科学学院江西南昌330038 江西诚志日化有限公司江西南昌330013

测试了甘草酸二钾对牙龈卟啉单胞菌的最小抑菌浓度,并研究了含0.2%甘草酸二钾的牙膏对牙龈卟啉单胞菌的抑菌作用及对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响。实验结果表明,甘草酸二钾对牙龈卟啉单胞菌具有抑制作用,最小抑菌浓度为1.875 g/L;含0.2... 详细信息

测试了甘草酸二钾对牙龈卟啉单胞菌的最小抑菌浓度,并研究了含0.2%甘草酸二钾的牙膏对牙龈卟啉单胞菌的抑菌作用及对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响。实验结果表明,甘草酸二钾对牙龈卟啉单胞菌具有抑制作用,最小抑菌浓度为1.875 g/L;含0.2%甘草酸二钾的牙膏具有抑制牙龈卟啉单胞菌的作用,抑菌环直径为20.5 mm;在二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抗炎模型上,含0.2%甘草酸二钾的牙膏具有超过醋酸氟轻松软膏的效果。

关键词：牙膏甘草酸二钾牙龈卟啉单胞菌最小抑菌浓度抑菌环抗炎

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甘草酸二钾应用于牙膏及其抗炎抑菌功能研究

甘草酸二钾应用于牙膏及其抗炎抑菌功能研究

作者：许海燕南昌大学

学位级别：硕士

在牙周疾病中,牙龈炎和牙龈出血发生率较高。日常清洁护理作为预防口腔疾病的重要而有效的手段,正确刷牙可以提高口腔的健康程度。当前牙膏的功效由单纯的清洁发展到多种辅助治疗功能,为了达到抗菌消炎作用,在牙膏中会加入某些活性成分... 详细信息

在牙周疾病中,牙龈炎和牙龈出血发生率较高。日常清洁护理作为预防口腔疾病的重要而有效的手段,正确刷牙可以提高口腔的健康程度。当前牙膏的功效由单纯的清洁发展到多种辅助治疗功能,为了达到抗菌消炎作用,在牙膏中会加入某些活性成分,以达到减少菌斑、抑菌、减轻炎症的作用,对局部原因引起的牙龈出血、牙周炎等有一定的辅助疗效。寻找安全并有抗炎活性的功效成分应用于牙膏中很有必要。牙膏抗牙龈炎功效研究方法有临床试验评价、微生物试验评价、动物试验评价三种常用的方法。在临床试验之前应用,采用微生物试验评价和动物试验评价二种方法相结合,以提高产品研究工作的效率,并减低临床试验成本。微生物试验评价方面,最常见的方法是测试牙膏对特定致病菌的抑菌率试验,本研究选择牙周病龈下菌斑的优势致病菌-牙龈卟啉单胞菌作为牙龈炎典型致病菌进行抑菌实验。对于体外模拟的动物实验,选择二甲苯致小鼠耳肿胀炎症模型来预判有效成分的抗炎效果。本研究将甘草酸二钾应用于牙膏中并展开实验。实验测试了甘草酸二钾对牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis)的最小抑菌浓度,并研究了含甘草酸二钾的牙膏对牙龈卟啉单胞菌的抑菌作用及对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响。实验结果表明,甘草酸二钾对牙龈卟啉单胞菌具有抑制作用,最小抑菌浓度达到1.875 g/L;含量为0.2%甘草酸二钾的牙膏也具有抑制牙龈卟啉单胞菌的效果,抑菌环直径是20.5 mm;二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抗炎模型实验中,以醋酸氟轻松软膏和市售公认效果好的护龈牙膏为阳性对照品,含量为0.2%甘草酸二钾的牙膏具有超过二个阳性对照品的效果。最后对含甘草酸二钾的牙膏采用高效液相色谱法对其浓度进行分析检验,可以稳定检出。结论,本研究证明了含甘草酸二钾的牙膏对于口腔致炎典型病原菌牙龈卟啉单胞菌的抑菌作用和对二甲苯致小鼠耳廓肿胀率的降低,通过体外实验反应该牙膏具有抗牙龈炎的功效。

关键词：牙膏甘草酸二钾牙龈卟啉单胞菌最小抑菌浓度抑菌环抗炎模型含量检测

甘草酸二钾抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）及其分子机制研究

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甘草酸二钾抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）及其分子机制研究

作者：王治维山西农业大学

学位级别：硕士

目的：检测甘草酸二钾(Dipotassium Glycyrrhizinate,DG)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)N基因的合成和N蛋白表达的影响，以及对宿主细胞中多聚腺苷酸结合蛋白(poly(A)-binding protein, PABP)、多聚胞嘧啶结合蛋白1(poly(C)-binding protein, PCBP1)、多聚胞嘧啶结合蛋白2(poly(C)-binding protein, PCBP2) mRNA表达量的影响,初探DG抗病毒作用的机制。方法：采用荧光定量PCR技术检测不同浓度的DG对PRRSVN基因合成的影响,筛选出DG的最佳药物浓度;最佳药物浓度下,在4、14、20、36和52h五个不同时间点上检测DG对PRRSV N基因合成的影响。同时通过Western blot和间接免疫荧光试验研究DG在不同浓度下对PRRSV N蛋白表达的影响。另外,通过相对荧光定量PCR检测DG对宿主细胞蛋白PABP、PCBP1、PCBP2mRNA表达量的影响,初步分析DG的抗病毒机制。结果：1.荧光定量PCR结果显示DG能够抑砖PRRSV N基因的合成，且呈剂量依赖性。在4mg/ml、2mg/ml和1mg/ml浓度下DG对N基因合成的抑制效果高于利巴韦林。进一步研究表明利巴韦林在4h时对N基因的合成有显著抑制作用,但从4h到52h呈下降趋势;而DG则从14h开始到54h,有着持续抑制作用。 2Western blot与间接免疫荧光试验结果显示DG对PRRSVN蛋白的表达有抑制作用,且呈剂量依赖性,在4mg/ml、2mg/ml和1mg/ml不同浓度下DG对N蛋白表达的抑制水平高于利巴韦林对照组。 3.相对荧光定量PCR结果显示,病毒组与细胞对照组相比,PABP、PCBP1和PCBP2的mRNA表达量均下降。DG处理组与细胞对照组相比,PABP、PCBP1的mRNA表达量下降：PCBP2的mRNA表达量上升。DG处理组与病毒组相比较,PABP mRNA表达量基本一致;PCBP1mRNA表达量下降;PCBP2mRNA表达量上升。利巴韦林组与其他三组相比较,PABP、PCBP1和PCBP2mRNA表达量水平均有所提高。结论： ***通过抑制JPRRSVN基因合成和N蛋白的表达,影响了PRRSV的复制。 ***可以下调PCBP1的mRNA水平,说明药物可以通过抑制PCBP1的mRNA表达,进而起到抗病毒的作用。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒甘草酸二钾抗病毒 N蛋白 PABP PCBP1 PCBP2

甘草酸二钾修饰型纳米脂质体促进角膜吸收的实验研究

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甘草酸二钾修饰型纳米脂质体促进角膜吸收的实验研究

作者：崔凤华济南大学

学位级别：硕士

目的:以香豆素-6(Cou-6)为模型药物制备甘草酸二钾修饰型纳米脂质体(纳米柔性脂质体),研究甘草酸二钾修饰型纳米脂质体促进药物细胞摄取(细胞水平)和角膜吸收(动物水平)作用及其机制,为纳米柔性脂质体这一新型纳米药物递送系统在眼科药... 详细信息

目的:以香豆素-6(Cou-6)为模型药物制备甘草酸二钾修饰型纳米脂质体(纳米柔性脂质体),研究甘草酸二钾修饰型纳米脂质体促进药物细胞摄取(细胞水平)和角膜吸收(动物水平)作用及其机制,为纳米柔性脂质体这一新型纳米药物递送系统在眼科药物递送中的应用提供研究基础与理论依据。方法:1.载Cou-6纳米脂质体及纳米柔性脂质体的制备及其理化性质的研究:用薄膜分散法制备Cou-6纳米脂质体及纳米柔性脂质体,用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定脂质体的包封率,用透射电镜(transmission electron microscop,TEM)观察两种纳米脂质体的形态,用激光粒度分析仪测定纳米脂质体的平均粒径、多分散性以及zeta电位,用薄膜挤压法测定两种纳米脂质体的柔变性,并对两者的理化指标进行比较。2.体内安全性评价:选用滴眼液常用防腐剂苯扎溴铵作为对照、以人角膜上皮细胞(Human corneal epithelial cells,HCECs)为体外细胞模型,MTT法检测甘草酸二钾、纳米脂质体以及纳米柔性脂质体的细胞毒性对角膜上皮细胞增殖产生的影响。3.纳米柔性脂质体的细胞摄取机制:培养HCECs,分别加入Cou-6溶液,载Cou-6的纳米脂质体溶液及纳米柔性脂质体溶液,观察不同时间点细胞摄取量。采用抑制剂或4℃条件下预处理细胞,检测纳米脂质体与纳米柔性脂质体的细胞摄取机制,激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscopy,CLSM)分析比较两种脂质体细胞摄取机制的异同。4.动物实验检测角膜吸收:测定纳米脂质体及纳米柔性脂质体制剂点眼后不同时间点兔和小鼠的角膜以及兔房水中Cou-6的含量(HPLC法),CLSM下观察角膜内荧光,分析比较两种脂质体眼表给药后的吸收差异。5.甘草酸二钾和纳米柔性脂质体的抗炎活性:以临床上常用的非甾体抗炎类药普拉洛芬滴眼液和糖皮质激素类地塞米松滴眼液为阳性对照,以兔眼表给予花生四烯酸溶液建立眼局部炎性模型,评价甘草酸二钾和纳米柔性脂质体的抗炎活性。结果:1.纳米脂质体和纳米柔性脂质体对模型药物cou-6均具有高包封率,粒子外观观察显示两种脂质体均呈均一圆形,粒径均一,多分散系数一致,但甘草酸二钾修饰后使zeta电位升高。在透射电镜高放大倍数下(x150k)可观察到纳米柔性脂质体粒子边缘呈皱缩状,而纳米脂质体边缘平滑,提示纳米柔性脂质体脂质双分子层具有一定的柔变性。柔变性测定结果证实纳米柔性脂质体具更强的柔变性。***的细胞毒性实验显示甘草酸二钾只有在高浓度或长时间细胞孵育时才有一定的细胞毒性,毒性具有时间和浓度依赖性,两种纳米脂质体孵育1h,均未检测到细胞毒性。3.体外hcecs的摄取实验显示:cou-6组和纳米脂质体组在细胞摄取5min即可达到饱和,且纳米脂质体组细胞摄取显著优于cou-6组,而纳米柔性脂质体则呈现出一定的时间依赖性,孵育5min到孵育60min,细胞摄取显著增加,不同时间点纳米柔性脂质体摄取水平均优于纳米脂质体组。在能量依赖性实验中,低温孵育(4℃)或叠氮化钠条件下对纳米脂质体的细胞摄取产生明显影响,预处理30min分别减少了20.47%和23.10%,而纳米柔性脂质体组无明显降低,说明纳米脂质体细胞摄取主要为依赖能量的主动转运摄取。加入不同胞吞抑制剂预处理30min后发现氯丙嗪对纳米脂质体细胞摄取的抑制效应最明显,其次是高渗蔗糖和甲基-β-环糊精(methyl-β-cyclodextrin,mβcd),而纳米柔性脂质体的细胞摄取受mβcd影响最明显,高渗蔗糖较纳米脂质体组抑制效应弱。clsm观察显示,纳米脂质体与hcecs共孵育后在胞质内显现为点状荧光,而纳米柔性脂质体在胞浆和细胞核中均观察到均一分散的弥散型荧光。4.两种纳米脂质体点眼后兔和小鼠房水及角膜中cou-6的浓度显示:纳米柔性脂质体组不同时间点角膜中cou-6浓度均显著高于纳米脂质体组,且角膜多次给药后的clsm照片显示,纳米柔性脂质体组相比于纳米脂质体组具有更强的角膜渗透性,但只有纳米柔性脂质体组在部分取样点房水样品中检测到cou-6。5.纳米脂质体、8.56mg/ml甘草酸二钾和相同浓度甘草酸二钾修饰的纳米柔性脂质体均未检测到抗炎活性。结论:甘草酸二钾修饰型纳米脂质体柔变性好,眼局部给药安全性高,甘草酸二钾修饰后改变了其细胞摄取机制,显著促进模型药物Cou-6的体外细胞摄取和体内角膜渗透能力,有望成为一种眼表疾病治疗的新型药物载体。

关键词：纳米脂质体甘草酸二钾摄取内化角膜

汤原温泉水联合甘草酸二钾抗炎舒敏功效的研究

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日用化学工业 2021年第5期51卷 433-437,442页

作者：乔武贾霆涵陆静贺来健贝亲母婴用品(上海)有限公司上海201799

利用角质形成细胞和3D重组人表皮模型构建炎症和过敏模型,验证汤原温泉水(HW)联合甘草酸二钾(DG)的抗炎和舒敏功效。细胞活力实验结果显示DG安全作用浓度为100?μmol/L,HW使用浓度为1%。抗炎方面,1%HW联合100?μmol/L DG对炎症因子复合... 详细信息

利用角质形成细胞和3D重组人表皮模型构建炎症和过敏模型,验证汤原温泉水(HW)联合甘草酸二钾(DG)的抗炎和舒敏功效。细胞活力实验结果显示DG安全作用浓度为100?μmol/L,HW使用浓度为1%。抗炎方面,1%HW联合100?μmol/L DG对炎症因子复合物诱导活化的NF-κB信号通路抑制率为56%。在炎症因子复合物诱导的重组人表皮模型中,HW联合DG有效降低白介素1α(IL-1α)和白介素6 (IL-6)分泌水平。舒敏方面,HW联合DG能够显著降低血管内皮生长因子(VEGF)分泌水平并下调辣椒素受体(TRPV1)与环氧合酶(COX-2) mRNA表达。

关键词：人重组表皮模型汤原温泉水甘草酸二钾抗炎舒敏