检索结果-南通市图书馆

药学学报 2023年第6期58卷 1619-1628页

作者：杨婷婷王冬李文豪石玉松李荣生马文建戴住波张学礼天津科技大学生物工程学院天津300457 中国科学院天津工业生物技术研究所天津300308 中国科学院系统微生物工程重点实验室天津300308

瓦伦烯是一种具有柑橘气味的倍半萜类化合物,常被用于化妆品和食品添加剂,以及工业合成诺卡酮。本研究拟用合成生物学技术创建酿酒酵母细胞工厂发酵生产瓦伦烯。首先,在底盘细胞YTT-T5中引入北美金柏来源的瓦伦烯合酶(Cn VS),成功获得... 详细信息

瓦伦烯是一种具有柑橘气味的倍半萜类化合物,常被用于化妆品和食品添加剂,以及工业合成诺卡酮。本研究拟用合成生物学技术创建酿酒酵母细胞工厂发酵生产瓦伦烯。首先,在底盘细胞YTT-T5中引入北美金柏来源的瓦伦烯合酶(Cn VS),成功获得可生产1.1 mg·L^(-1)瓦伦烯的工程菌VAL-01;采用蛋白质融合技术,不同植物来源的瓦伦烯合酶筛选,并调整了关键基因拷贝数后,瓦伦烯产量提升至436.4 mg·L^(-1)。进一步工作中,删除转录因子ROX1,瓦伦烯的产量提高了17.4%。最后,对半乳糖诱导系统进行调控,并过表达多药耐药性调控因子PDR3和调控内质网大小转录因子INO2,所得工程菌株VAL^(-1)0经高密度发酵能生产2 798.6 mg·L^(-1)瓦伦烯(产量是初始菌株的2 500倍),为瓦伦烯绿色生产提供了基础。

关键词：合成生物学酿酒酵母倍半萜瓦伦烯

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

创建酿酒酵母细胞工厂发酵生产芳香精油瓦伦烯

创建酿酒酵母细胞工厂发酵生产芳香精油瓦伦烯

引用

作者：杨婷婷天津科技大学

学位级别：硕士

瓦伦烯（valencene）是一种与柑橘气味类似的倍半萜类化合物,主要存在于柑橘属植物中,常被用做化妆品和食品的添加剂。此外瓦伦烯的下游产物诺卡酮具有与葡萄类似的香味,被广泛应用于化妆品、食品、芳香治疗、驱蚊杀虫等领域。目前瓦伦... 详细信息

瓦伦烯（valencene）是一种与柑橘气味类似的倍半萜类化合物,主要存在于柑橘属植物中,常被用做化妆品和食品的添加剂。此外瓦伦烯的下游产物诺卡酮具有与葡萄类似的香味,被广泛应用于化妆品、食品、芳香治疗、驱蚊杀虫等领域。目前瓦伦烯的主要来源是通过橘子精油蒸馏获得。这种从原植物中提取天然产物的方法的产率低,无法满足市场需求,且植物源供给不稳定,容易受到天气等因素的影响。随着合成生物学的发展,构建微生物细胞工厂生产天然产物的技术日渐成熟,为瓦伦烯的生产提供了新的方式。本研究首先在酿酒酵母中构建了瓦伦烯异源合成途径:在强化了MVA途径并弱化了ERG20基因表达的萜类底盘菌株YTT-T5中引入北美金柏（Callitropsis nootkatensis）来源的Cn VS基因,构建了菌株VAL-01,其能够异源合成瓦伦烯,验证了Cn VS基因的活性。之后利用蛋白质融合技术将代谢途径中相邻酶Sm FPS和Cn VS进行融合后得到工程菌VAL-02,在诱导培养基中发酵6 d可生产344.2±17.6 mg/L的瓦伦烯,较VAL-01提高了343.2倍。对瓦伦烯合酶的来源进行筛选并调整限速酶拷贝数获得的工程菌株VAL-05,在诱导培养基中发酵6 d可生产436.4±35.6 mg/L的瓦伦烯。在进一步工作中,敲除调控因子ROX1使瓦伦烯合成的通量进一步增加17%。为了避免半乳糖等昂贵诱导剂的使用,研究改造了半乳糖诱导系统相关基因表达,获得菌株VAL-09,该菌株能以葡萄糖为发酵碳源发酵生产259.3±1.9 mg/L的瓦伦烯。为了测试瓦伦烯工程菌的发酵性能及提高工程菌的耐受性,在修复菌株VAL-09营养缺失标记基因的同时,过表达PDR3,t HMG1和INO2等功能模块,最终构建出菌株VAL-10在5L发酵罐中瓦伦烯的产量达到2798.6±66.3 mg/L,较VAL-01产量提高了2500倍。最后,为进一步提高CnVS的活性,本研究通过构建Cn VS突变库筛选到两个Cn VS突变体,分别使瓦伦烯产量提高了83.6%和207.2%,测序结果显示其氨基酸突变分别V135I/G510R/F545S和D158N/I588T。研究为创建微生物细工厂高效发酵生产瓦伦烯以及倍半萜类化合物提供了基础。

关键词：合成生物学倍半萜化合物酿酒酵母瓦伦烯

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

脐橙果实特征香气物质瓦伦烯合成酶基因CsTPS1启动子的互作因子筛选

脐橙果实特征香气物质瓦伦烯合成酶基因CsTPS1启动子的互作因子筛...

引用

作者：胡晓利浙江工商大学

学位级别：硕士

柑橘是世界上重要的经济作物之一,果实香气是柑橘风味品质的重要特征。柑橘果实香气物质以萜类化合物为主。不同种类柑橘果实具有独特的特征香气物质,其原因可能是果实中香气物质在种类和含量方面存在差异。近年来,关于柑橘果实中大规... 详细信息

柑橘是世界上重要的经济作物之一,果实香气是柑橘风味品质的重要特征。柑橘果实香气物质以萜类化合物为主。不同种类柑橘果实具有独特的特征香气物质,其原因可能是果实中香气物质在种类和含量方面存在差异。近年来,关于柑橘果实中大规模资源评价、香气物质成分分析及结构基因功能鉴定等的研究较为丰富,但对特征香气物质及其关键合成酶基因的调控仍需进一步研究。本文利用电子鼻（Electronic nose,E-nose）技术结合主成分分析（Principal component analysis,PCA）、线性判别分析（Linear discriminant analysis,LDA）,顶空固相微萃取（Headspace-solid phase microextration,HS-SPME）联合气相色谱-质谱（Gas chromatography mass spectrometer,GC-MS）技术对发育阶段和外源乙烯处理后的‘纽荷尔’脐橙果实香气物质,特别是特征香气物质瓦伦烯的变化规律进行研究。进一步利用基因表达验证特征香气物质瓦伦烯和瓦伦烯合成酶基因CsTPS1的表达变化。最后,基于CsTPS1启动子构建诱饵载体,利用酵母单杂交技术对柑橘c DNA文库进行筛选,以期筛选出与‘纽荷尔’脐橙果实特征香气物质瓦伦烯合成相关的转录因子,从而为研究特征香气物质瓦伦烯的合成调控机制提供科学依据。主要研究结果如下:（1）‘纽荷尔’脐橙果实在不同发育阶段鉴别出58种挥发性香气物质,包括单萜烯9种,倍半萜烯24种,单萜衍生物14种,倍半萜衍生物3种,其他化合物8种。倍半萜烯类化合物虽占比不大,但与其他四类香气物质相比,其含量在转色期后增加显著。进一步分析不同发育阶段倍半萜烯类香气物质成分的含量变化,结果显示,脐橙果实特征香气物质瓦伦烯的含量同样在转色期后显著增加。在脐橙果实发育过程中,特征香气物质瓦伦烯含量与瓦伦烯合成酶基因CsTPS1表达量变化趋势一致,二者在发育过程中呈现正相关关系。（2）对转色期‘纽荷尔’脐橙果实进行乙烯(1000 mg·L,1 min)处理,从果皮样品中鉴别出64种挥发性香气物质,包括单萜烯12种,倍半萜烯20种,单萜衍生物18种,倍半萜衍生物1种,其他挥发性物质13种。分析对照组和乙烯处理组脐橙果实倍半萜烯类化合物含量的变化,发现乙烯处理可提高特征香气物质瓦伦烯的含量。同时,乙烯处理可促进瓦伦烯合成酶CsTPS1的表达,并且与瓦伦烯含量呈现正相关关系。（3）克隆CsTPS1启动子序列并构建脐橙c DNA文库。通过酵母单杂交技术,筛选阳性转化子用于测序,测序结果经NCBI、Plant TFDB和柑橘基因组数据库等比对后,最终分析整理得到3类共13个候选转录因子,包括b HLH家族转录因子Cit UNE1、Cit UNE2、Cit UNE3、Cit UNE4、Cit UNE5;MYB家族转录因子Cit MYB1、Cit MYB2、Cit MYB3、Cit MYB4、Cit MYB5、Cit MYB6;GARS家族转录因子Cit SCL1、Cit SCL13。（4）酵母单杂点对点验证结果表明,转录因子Cit UNE1、Cit MYB2、Cit MYB4、Cit MYB5可以结合至CsTPS1启动子。基因表达分析表明,Cit UNE1和Cit MYB2基因表达量与特征香气物质瓦伦烯含量和瓦伦烯合成酶CsTPS1表达呈现负相关性,Cit MYB4和Cit MYB5基因表达量与瓦伦烯合成酶CsTPS1表达呈现正相关性。

关键词：柑橘香气瓦伦烯 CsTPS1 酵母单杂交转录调控

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：