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瑞香狼毒提取物对山楂叶螨的生物活性及酶活性影响

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林业科学 2003年第1期39卷 98-102页

作者：曹挥刘素琪赵莉蔺师光禄曾鑫年山西农业大学植保系太谷030801 华南农业大学昆虫毒理室广州510642

瑞香狼毒的氯仿、石油醚、甲醇提取物对果树重要害螨山楂叶螨有很好的内吸和触杀活性 ;对氯仿提取物处理后的成螨体内几种重要酶系活性测定发现 ,在内吸处理中 ,其对蛋白酶、谷胱甘肽 S 转移酶 ,酯酶同功酶有不同程度的激活作用 ;在触... 详细信息

瑞香狼毒的氯仿、石油醚、甲醇提取物对果树重要害螨山楂叶螨有很好的内吸和触杀活性 ;对氯仿提取物处理后的成螨体内几种重要酶系活性测定发现 ,在内吸处理中 ,其对蛋白酶、谷胱甘肽 S 转移酶 ,酯酶同功酶有不同程度的激活作用 ;在触杀处理中 ,对蛋白酶、谷胱甘肽 S 转移酶影响不明显 ,对酯酶同功酶有一定的抑制作用 ;研究表明 ,瑞香狼毒可以有效杀死山楂叶螨 ,是一种很有利用价值的杀虫植物。

关键词：瑞香狼毒提取物山楂叶螨生物活性酶活性植物性杀虫剂

瑞香狼毒提取物调控自噬抗乳腺癌多药耐药的研究

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瑞香狼毒提取物调控自噬抗乳腺癌多药耐药的研究

作者：崔羲和中国中医科学院

学位级别：硕士

研究目的:乳腺癌是当前女性群体中发病率、死亡率高,预后较差的恶性肿瘤,化疗是临床乳腺癌常用疗法,但长期以来都面临多药耐药问题。自噬激活导致的凋亡抵抗为多药耐药产生的重要原因之一;此外,乳腺癌微环境中含量丰富的脂肪细胞同样具... 详细信息

研究目的:乳腺癌是当前女性群体中发病率、死亡率高,预后较差的恶性肿瘤,化疗是临床乳腺癌常用疗法,但长期以来都面临多药耐药问题。自噬激活导致的凋亡抵抗为多药耐药产生的重要原因之一;此外,乳腺癌微环境中含量丰富的脂肪细胞同样具有激活乳腺癌细胞自噬和增强乳腺癌细胞耐药性的作用。因此,本研究将基于乳腺癌单细胞培养以及乳腺癌细胞与脂肪细胞的共培养模型,研究瑞香狼毒提取物(LD)对乳腺癌细胞自噬相关过程的调控以及多药耐药的影响,同时对相关作用机制进行初步探索。研究方法:针对乳腺癌单细胞模型,采用MTT法检测阿霉素(ADR)和LD对两种乳腺癌化疗敏感细胞株及其对应的阿霉素耐药株存活率的影响,计算IC50及耐药因子;DAPI染色检测LD对耐药细胞凋亡特征的影响;annexin-V-pi双染法检测LD对两乳腺癌耐药细胞株凋亡的影响;western blot检测LD对两乳腺癌耐药细胞株细胞凋亡相关蛋白caspase-8、cleaved caspase-8、caspase-3、cleaved caspase-3 以及自噬相关蛋白mTOR、p-mTOR、p62、LC3表达水平的影响;MDC染色检测LD对耐药细胞自噬小体的影响;LC3免疫荧光检测LD对耐药细胞LC3表达水平的影响;GFP-LC3B-mcherry重组腺病毒转染检测LD对耐药细胞自噬过程的影响;试剂盒检测LD对敏感耐药细胞上清葡萄糖及乳酸、ATP含量的影响;最后采用自噬抑制剂氯喹(CQ)对LD的药效和作用机制进行正向验证。针对脂肪细胞与乳腺癌细胞的共培养模型,采用MTT法检测ADR和LD对乳腺癌敏感及耐药细胞存活率的影响,流式细胞术检测LD对耐药细胞凋亡的影响。Western blot检测LD对敏感及耐药细胞自噬相关蛋白p62、LC3B表达水平的影响;油红O染色检测LD对MDA/ADR细胞脂滴的影响;bodipy荧光与LC3免疫荧光的共定位检测LD对耐药细胞脂滴自噬的影响;试剂盒检测LD对上清乳酸、葡萄糖以及脂肪酸含量的影响;最后,RT-PCR检测LD对共培养体系中脂肪细胞分化标志物FABP4及炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α转录水平的影响。针对乳腺癌移植瘤模型,将乳腺癌耐药细胞接种于裸鼠背部皮下作为对照组,接种于腹股沟脂肪垫作为模型组以模拟脂肪含量丰富的乳腺微环境,在此基础上通过阿霉素给药研究两移植瘤的耐药性差异,LD给药研究其对两移植瘤的抑制作用,并通过western blot检测肿瘤组织中自噬蛋白LC3、p62的表达水平。研究结果:针对乳腺癌单细胞模型的研究中,MTT结果显示ADR对于两乳腺癌耐药株均具有较高的IC50值,耐药因子分别为58.21和14.20;LD能够显著抑制乳腺癌敏感及耐药细胞的增殖过程,且其作用于两耐药细胞株的IC50值更低,耐药因子分别为0.53和0.51。DAPI染色结果显示,LD能够使耐药细胞出现核变形、裂解等凋亡特征;流式结果显示,各浓度组LD均可显著增高乳腺癌耐药细胞的凋亡比例。Western blot结果显示,LD能够显著提高两乳腺癌耐药株cleaved caspase-3/caspase-3 和 cleaved caspase-8/caspase-8 比值;显著降低两细胞 p-mTOR/mTOR比例,上调LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比例,升高p62表达水平。MDC染色及LC3免疫荧光结果均显示LD能够使耐药细胞的阳性荧光区域增加。GFP-LC3B-mcherry转染结果显示,LD能够显著增加耐药细胞黄色荧光斑点的数量。上清能量代谢产物检测结果显示,LD能够显著降低两乳腺癌耐药细胞株上清中乳酸及ATP的含量,显著升高上清葡萄糖的含量。CQ的正向验证结果表明,LD与CQ在抑制乳腺癌耐药细胞增殖,调控自噬蛋白p62和LC3表达水平的变化以及促进凋亡均具有相同的作用趋势。针对共培养模型中的研究中,MTT结果显示,过继培养及共培养组乳腺癌敏感及耐药细胞存活率均显著上升,ADR作用后共培养组的存活率显著高于对照组,LD则能够显著降低两模型中乳腺癌细胞的存活率。流式细胞术结果显示,与对照组阿霉素处理后相比,共培养组阿霉素处理后凋亡率显著降低,LD则显著升高模型组乳腺癌细胞的凋亡比例。Western blot结果显示共培养可显著降低敏感及耐药细胞p62的表达水平,升高LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值,LD处理后,p62水平及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值相比对照组显著升高;共培养同时给药的油红O染色结果显示LD能够显著减少乳腺癌耐药细胞中脂滴数目,共培养后给药则显示LD能够显著增加乳腺癌耐药细胞中的脂滴数目。Bodipy与LC3荧光共定位结果显示,与对照组相比共培养组自噬小体和脂滴特异性荧光均显著增强,LD与CQ作用后两种荧光强度均进一步增强。能量代谢检测结果

关键词：乳腺癌多药耐药瑞香狼毒提取物自噬脂肪细胞

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瑞香狼毒提取物抗实验性癫痫筛选研究

山西医药杂志 2004年第12期33卷 1026-1027页

作者：张美妮刘玉玺王明正孙晓飞山西医科大学第一医院 030001 山西医科大学山西医科大学药学院

目的　对瑞香狼毒六种提取物 (依次为瑞香狼毒水、生离物、丙酮、石油醚、乙醚、乙醇提取物 )进行药效学及毒性比较研究 ,筛选出一种高效低毒的抗癫痫化合物 ,便于临床前机制探讨。方法　采用动物三种惊厥模型 ,测定瑞香狼毒六种提取物... 详细信息

目的　对瑞香狼毒六种提取物 (依次为瑞香狼毒水、生离物、丙酮、石油醚、乙醚、乙醇提取物 )进行药效学及毒性比较研究 ,筛选出一种高效低毒的抗癫痫化合物 ,便于临床前机制探讨。方法　采用动物三种惊厥模型 ,测定瑞香狼毒六种提取物抗实验性癫痫半数有效量 (ED50 )。计算其半数致死量 (L D50 )。结果　瑞香狼毒提取物～ ,即丙酮、石油醚、乙醚、乙醇四种提取物对小鼠最大电休克发作实验 (MES)、戊四唑惊厥实验(MET)和电刺激大鼠皮层惊厥阈值 (TL S)模型均具有较强的对抗作用。而其中丙酮提取物毒性较低 ,治疗指数高达 14 .9。结论　瑞香狼毒丙酮提取物是一种抗惊厥作用较强而毒性小的有希望的抗癫痫化合物。

关键词：癫痫实验性惊厥瑞香狼毒提取物毒性瑞香狼毒电休克性比筛选动物

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瑞香狼毒根提取物对菜粉蝶幼虫的触杀作用

华中师范大学学报(自然科学版) 2000年第4期34卷 460-462页

作者：张国洲陈于年王亚维徐汉虹华南农业大学! 广州510642 湖北农学院!湖北荆州 434103

采用点滴法就瑞香狼毒(Stellera chameajasme L.)根乙醇提取物(简称SCEE)对菜粉蝶(Pieris rapae L.)不同虫态的触杀作用进行了测定;采用波特喷雾法就SCEE对菜粉蝶幼虫的毒杀作用的进行了测定;采用注射法就SCEE对菜粉蝶5龄幼虫的毒杀作... 详细信息

采用点滴法就瑞香狼毒(Stellera chameajasme L.)根乙醇提取物(简称SCEE)对菜粉蝶(Pieris rapae L.)不同虫态的触杀作用进行了测定;采用波特喷雾法就SCEE对菜粉蝶幼虫的毒杀作用的进行了测定;采用注射法就SCEE对菜粉蝶5龄幼虫的毒杀作用进行了测定.结果表明: SCEE对菜粉蝶卵?幼虫?预蛹和蛹的触杀作用差; SCEE对菜粉蝶幼虫的毒杀作用较强(波特喷雾法);SCEE对菜粉蝶5龄幼虫的毒杀作用强(注射法).

关键词：瑞香狼毒提取物菜粉蝶触杀作用

瑞香狼毒提取物逆转人肝癌耐药细胞多药耐药的实验研究

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中国中医药科技 2004年第4期11卷 223-223页

作者：马健李永华黑龙江中医药大学附属第一医院哈尔滨150040

1实验材料实验动物:Balb/c小鼠40只,体重18g～22g,SPF级,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供.瑞香狼毒水提物(SCLA)的制备:将瑞香狼毒(由内蒙医药公司提供,经鉴定为瑞香科狼毒)200g加水400mL,煮沸20min2次,上清液混合后过滤、浓缩,制... 详细信息

1实验材料实验动物:Balb/c小鼠40只,体重18g～22g,SPF级,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供.瑞香狼毒水提物(SCLA)的制备:将瑞香狼毒(由内蒙医药公司提供,经鉴定为瑞香科狼毒)200g加水400mL,煮沸20min2次,上清液混合后过滤、浓缩,制成口服液,每毫升含生药1.0g.细胞系:人肝癌细胞系Bel-7402引自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库.主要试剂及仪器:酶联免疫检测仪,南京华东电子管厂产品.

关键词：瑞香狼毒提取物肝癌耐药细胞多药耐药实验方法

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瑞香狼毒根提取物对四种蔬菜害虫的生物活性

湖北农学院学报 2000年第2期20卷 117-119页

作者：张国洲王亚维徐汉虹赵善欢华南农业大学!广东广州510642 湖北农学院!湖北荆州434103

应用叶碟法就瑞香狼毒 (StellerachameajasmeL .)根乙醇提取物 (简称SCEE)对4种重要蔬菜害虫的拒食率、LC50 和处理后 7d的校正死亡率进行了测定。结果表明 ,SCEE对菜粉蝶、桃蚜的生物活性很强 ,对斜纹夜蛾和小菜蛾的生物活性较弱

关键词：生物活性瑞香狼毒提取物斜纹夜蛾桃蚜小菜蛾菜粉蝶

瑞香狼毒和坡柳提取物对小菜粉蝶幼虫的拒食活性测定

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云南农业大学学报 2003年第4期18卷 354-357页

作者：杨美林周天雄顾芳云南农业大学植物保护学院云南昆明650201

瑞香狼毒乙醇提取物对小菜粉蝶4龄幼虫24h选择拒食作用的拒食中浓度(AFC50)为219.6mg/L;完全拒食作用的AFC50为1246.4mg/L;坡柳乙醇提取物对小菜粉蝶4龄幼虫24h选择拒食作用的AFC50为691.6mg/L,完全拒食作用的AFC50为398.0mg/L.

关键词：瑞香狼毒提取物坡柳提取物小菜粉蝶幼虫拒食活性拒食中浓度拒食剂驱避剂杀虫剂

瑞香狼毒通过Nrf2抗三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞多药耐药的研究

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中国中药杂志 2024年第8期49卷 2222-2229页

作者：曾蕊王晓萱崔羲和杨庆朱晓新王娅杰中国中医科学院中药研究所北京100700

该研究将探讨瑞香狼毒提取物(SCL)抑制乳腺癌多药耐药的作用及机制。实验以人三阴性乳腺癌细胞亲本株MDA-MB-231,及其阿霉素耐药细胞株MDA-MB-231/ADR为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;DAPI染色和Annexin-V/Pi凋亡双染检测细... 详细信息

该研究将探讨瑞香狼毒提取物(SCL)抑制乳腺癌多药耐药的作用及机制。实验以人三阴性乳腺癌细胞亲本株MDA-MB-231,及其阿霉素耐药细胞株MDA-MB-231/ADR为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;DAPI染色和Annexin-V/Pi凋亡双染检测细胞凋亡,Western blot(WB)检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬酶(caspase)-9、caspase-3的表达水平,免疫荧光染色观察Nrf2细胞内分布,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平。实验结果显示SCL的耐药因子是0.69,对应地,阿霉素和紫杉醇的耐药因子分别是8.40、16.36;DAPI染色结果显示SCL能够导致乳腺癌细胞核皱缩、碎裂;Annexin-V/Pi凋亡双染显示,在中、高剂量SCL的作用下,耐药细胞的平均凋亡率分别为32.64%、50.29%;WB检测结果提示:SCL能够明显降低抗凋亡蛋白Bcl-2、caspase-9和caspase-3表达水平,明显升高促凋亡蛋白Bax表达水平,进一步研究发现,SCL能够显著促进Keap1的表达,并明显抑制Nrf2和HO-1的表达,同时能够明显减少Nrf2的入核表达水平;相应地,流式检测细胞内ROS水平明显升高。综上所述,瑞香狼毒能够显著抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231多药耐药细胞的增殖,引起细胞凋亡,其机制与抑制Keap1/Nrf2信号通路,导致耐药细胞内ROS累积,并增加凋亡相关蛋白的表达有关。

关键词：瑞香狼毒提取物乳腺癌多药耐药凋亡 Nrf2 抗氧化