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仑伐替尼通过下调IGF1R/Mek/Erk信号通路治疗瑞戈非尼耐药的肝细胞癌

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中华肿瘤杂志 2023年第6期45卷 490-498页

作者：张菁匡淑雯黄宁张嘉峻刘梅王黎明国家癌症中心、国家肿瘤临床医学研究中心、中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肝胆外科北京100021 中南大学湘雅医院肿瘤科长沙410008 国家癌症中心、国家肿瘤临床医学研究中心、中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院国家重点实验室细胞生物学及分子生物学研究室北京100021

目的探讨仑伐替尼对瑞戈非尼耐药肝癌细胞的治疗疗效及其作用机制。方法采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和克隆形成实验观察仑伐替尼对肝癌细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测仑伐替尼处理后瑞戈非尼耐药肝细胞癌细胞的凋亡情况,Western blo... 详细信息

目的探讨仑伐替尼对瑞戈非尼耐药肝癌细胞的治疗疗效及其作用机制。方法采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和克隆形成实验观察仑伐替尼对肝癌细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测仑伐替尼处理后瑞戈非尼耐药肝细胞癌细胞的凋亡情况,Western blot和免疫组化染色检测相关蛋白表达水平变化,小鼠皮下成瘤实验观察仑伐替尼对瑞戈非尼耐药肝癌细胞体内成瘤能力的抑制效果。结果CCK-8和克隆形成实验显示,仑伐替尼能够抑制肝癌瑞戈非尼耐药细胞的增殖能力;仑伐替尼组HepG2、SMMC7721和瑞戈非尼耐药的HepG2、SMMC7721细胞克隆数[分别为(120.67±11.06)个、(53.00±11.14)个、(55.00±9.54)个和(78.67±14.64)个]均低于对照组[分别为(478.00±24.52)个、(566.00±27.87)个、(333.67±7.02)个和(210.00±12.77)个,均P尼能够促进肝癌瑞戈非尼耐药细胞凋亡,仑伐替尼组HepG2、SMMC7721和瑞戈非尼耐药的HepG2、SMMC7721细胞凋亡率[分别为(12.30±0.70)%、(9.83±0.38)%、(15.90±1.32)%和(10.60±0.00)%]均高于对照组[分别为(7.50±0.87)%、(5.00±1.21)%、(8.10±1.61)%和(7.05±0.78)%,均P尼处理后凋亡相关蛋白比值提示细胞凋亡能力增加。动物实验显示仑伐替尼治疗能够在体内抑制肝癌瑞戈非尼耐药细胞的生长。免疫组化及Western blot结果显示,仑伐替尼能够下调瑞戈非尼耐药细胞中异常活化的IGF1R/Mek/Erk信号通路。结论仑伐替尼能够逆转肝细胞癌瑞戈非尼耐药,其机制可能是通过下调IGF1R/Mek/Erk信号通路实现。

关键词：肝肿瘤瑞戈非尼仑伐替尼耐药 IGF1R/Mek/Erk信号通路

瑞戈非尼对肝癌细胞凋亡及琥珀酸脱氢酶D表达的影响

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医药导报 2022年第12期41卷 1753-1761页

作者：吴亚菲刁文婧周鹤鸣李琴上海交通大学附属第一人民医院临床药学科上海200080

目的探讨瑞戈非尼对肝癌细胞凋亡及对琥珀酸脱氢酶D(SDHD)表达水平的影响,分析SDHD对肝癌细胞增殖及瑞戈非尼药物作用的影响。方法通过流式细胞术观察瑞戈非尼对肝癌细胞凋亡的影响,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹... 详细信息

目的探讨瑞戈非尼对肝癌细胞凋亡及对琥珀酸脱氢酶D(SDHD)表达水平的影响,分析SDHD对肝癌细胞增殖及瑞戈非尼药物作用的影响。方法通过流式细胞术观察瑞戈非尼对肝癌细胞凋亡的影响,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)观察瑞戈非尼对SDHD表达的影响。通过CCK-8实验及Edu实验检测SDHD对肝癌细胞增殖的影响,流式细胞术分析SDHD对瑞戈非尼药物作用的影响。通过Western blotting检测SDHD对AKT信号通路的影响,流式细胞术分析AKT信号通路抑制剂MK2206对SDHD促瑞戈非尼作用下细胞凋亡的影响。结果瑞戈非尼促进肝癌细胞凋亡,促进SDHD表达上调(P瑞戈非尼药物作用下的凋亡率(P瑞戈非尼可诱发肝癌细胞凋亡,促进SDHD表达上调;SDHD参与调控肝癌细胞增殖及瑞戈非尼药物作用,提示SDHD可能是肝癌治疗的新靶点。

关键词：瑞戈非尼琥珀酸脱氢酶D 肝癌增殖 AKT信号通路

瑞戈非尼单药或联合PD-1抑制剂治疗MSS/pMMR型转移性结直肠癌的疗效和安全性对比

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郑州大学学报（医学版） 2023年第4期58卷 524-528页

作者：安天棋宗红周丽丽赵瑞华郑州大学第一附属医院肿瘤内科郑州450052

目的:探讨瑞戈非尼联合PD-1抑制剂三线及以上治疗微卫星稳定/无错配修复缺陷型(MSS/pMMR型)转移性结直肠癌的疗效和安全性。方法:收集2018年4月至2022年11月在郑州大学第一附属医院肿瘤内科就诊并接受瑞戈非尼治疗(n=52,单药组)或瑞戈... 详细信息

目的:探讨瑞戈非尼联合PD-1抑制剂三线及以上治疗微卫星稳定/无错配修复缺陷型(MSS/pMMR型)转移性结直肠癌的疗效和安全性。方法:收集2018年4月至2022年11月在郑州大学第一附属医院肿瘤内科就诊并接受瑞戈非尼治疗(n=52,单药组)或瑞戈非尼联合PD-1抑制剂治疗(n=64,联合组)的MSS/pMMR型转移性结直肠癌患者的资料,比较2组疗效及不良反应。结果:单药组的客观缓解率和疾病控制率分别为3.8%和69.2%,无疾病进展期和总生存期(T_(75),T_(25))分别为3.9(2.1,6.3)个月和16.7(9.1,36.6)个月,联合组以上指标分别为4.7%和70.3%,3.0(1.9,7.0)个月和14.6(6.2,26.7)个月,2组间以上指标差异均无统计学意义(P>0.05)。联合组甲状腺功能减退和心肌酶增高的发生率(15.6%和21.9%)均高于单药组(0.0%和5.8%,P瑞戈非尼联合PD-1抑制剂三线及以上治疗MSS/pMMR型转移性结直肠癌的效果与瑞戈非尼单药治疗效果类似,且增加了部分不良反应。

关键词：转移性结直肠癌瑞戈非尼 PD-1抑制剂疗效安全性

瑞戈非尼通过miR-122调控人肝癌SMMC-7721细胞的增殖和凋亡

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中国肿瘤生物治疗杂志 2021年第8期28卷 796-802页

作者：陈巍韩峥邹艳丽黄莎莎田霞武汉市第三医院消化内科湖北武汉430062

目的:探究瑞戈非尼(regorafenib,Rego)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法:将SMMC-7721细胞分为对照组及Rego组,分别用0、10μmol/L Rego处理48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,qPCR检测细胞中miR-122的表... 详细信息

目的:探究瑞戈非尼(regorafenib,Rego)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法:将SMMC-7721细胞分为对照组及Rego组,分别用0、10μmol/L Rego处理48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,qPCR检测细胞中miR-122的表达。采用脂质体转染的方法将合成的hsa-miR-122-5p模拟物转染SMMC-7721细胞构建miR-122过表达的overExp-miR-122细胞,并将细胞分为对照组、Rego组、overExp-NC组、overExp-NC+Rego组、overExp-miR-122组及overExp-miR-122+Rego组,采用MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率、WB法检测细胞中Bcl2、cleaved caspase-3、RAS、RAF1、p-ERK1蛋白表达水平。结果:与对照组相比,Rego处理后细胞凋亡率显著升高(P<0.05),且miR-122表达量显著上升(P<0.01);与overExp-NC组比较,overExp-miR-122组细胞增殖抑制率、凋亡率和cleaved caspase-3表达均显著升高(均P<0.01),RAS蛋白表达显著下降(P<0.05),Bcl2、RAF、p-ERK1蛋白表达均显著下降(均P<0.01);与overExp-miR-122组相比,overExp-miR-122+Rego组细胞中各检测指标变化进一步显著增加(P<0.01)。结论:Rego可抑制SMMC-7721细胞增殖、促进凋亡,其作用可能与调控miR-122、凋亡相关因子的表达和抑制RAS/RAF/ERK信号通路有关。

关键词：肝癌 SMMC-7721细胞瑞戈非尼 miR-122 凋亡增殖 RAS/RAF/ERK信号通路

瑞戈非尼通过抑制Wnt信号通路调控肝癌进展的分子机制

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中国老年学杂志 2022年第7期42卷 1722-1726页

作者：陈建南吴进盛于莉余华军儋州市人民医院药剂科海南儋州571700 海南医学院第一附属医院肿瘤姑息治疗科

目的探讨瑞戈非尼对肝脏肿瘤生长的影响及其抑制肝癌细胞增殖的分子机制。方法通过二乙基亚硝胺(DEN)模拟肝癌模型及瑞戈非尼药物处理,将c57BL/6小鼠分为对照组,瑞戈非尼处理组,肝癌模型组,肝癌瑞戈非尼处理组。检测小鼠体重的变化,比... 详细信息

目的探讨瑞戈非尼对肝脏肿瘤生长的影响及其抑制肝癌细胞增殖的分子机制。方法通过二乙基亚硝胺(DEN)模拟肝癌模型及瑞戈非尼药物处理,将c57BL/6小鼠分为对照组,瑞戈非尼处理组,肝癌模型组,肝癌瑞戈非尼处理组。检测小鼠体重的变化,比较各组小鼠肿瘤相关指标包括肝脏肿瘤数量,肿瘤最大直径及最大肿瘤体积。苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏组织结构变化。Realtime PCR检测Wnt/β-catenin信号通路下游分子G1/S-特异性周期蛋白(cyclin)D1和基质金属蛋白酶(MMP)9的表达水平,免疫组织化学法检测β-catenin的亚细胞定位,最后利用CO-IP技术检测小鼠肝脏中糖原合成酶激酶(GSK)-3β和β-catenin的结合水平。结果与肝癌模型组相比,瑞戈非尼处理可逆转肝癌组小鼠体重的下降,下调肝脏肿瘤数量,肿瘤最大直径及最大肿瘤体积(P瑞戈非尼处理后的肝癌组织体积变小,癌细胞形状较肝癌模型组略规则。CO-IP及免疫组织化学结果显示,瑞戈非尼主要通过促进GSK-3β和β-catenin的蛋白相互作用,促进β-catenin降解复合体的形成,抑制β-catenin的核转移,逆转肝癌组织中cyclinD1、MMP9的高表达(P瑞戈非尼主要通过促进GSK-3β和β-catenin的蛋白相互作用,抑制肝脏癌细胞核内β-catenin的累积,从而抑制肝脏癌细胞的增殖和侵袭。

关键词：瑞戈非尼肝细胞癌 Wnt/β-catenin信号通路

瑞戈非尼协同抗PD-L1抗体增强肝细胞癌治疗效果及其机制研究

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瑞戈非尼协同抗PD-L1抗体增强肝细胞癌治疗效果及其机制研究

作者：刘俊杰华中科技大学

学位级别：硕士

目的:抗程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD-1)/程序性死亡配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)抗体等免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICIs)已广泛应用于基础和临床研究。尽管ICIs具有一定的抗肿瘤作用,但由于耐药性的存在,ICIs对大多数肿瘤缺乏长期疗效。肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的治疗虽然已经取得了长足的进步,然而在许多国家其发病率和死亡率仍然在持续增加。所以目前临床上急需可以有效提高抗PD-1/PD-L1治疗效果的方法。瑞戈非尼作为一种酪氨酸激酶受体抑制剂,除了发挥抑制肿瘤生长和促进肿瘤细胞凋亡的作用之外,还具有免疫调节的作用,可以从多个方面改善抑制性的肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME),但其在增强HCC免疫治疗效果方面的机制仍有待进一步探索。因此,本研究旨在探索瑞戈非尼联合抗PD-L1抗体在体内治疗HCC的抗肿瘤效果以及具体的分子机制。方法:为了探索瑞戈非尼联合抗PD-L1抗体治疗HCC的效果和机制,采用Hep1-6肝细胞癌原位和皮下瘤模型研究小鼠体内的抗肿瘤活性。同时利用流式细胞术、免疫组织化学和免疫荧光等技术分析联合治疗对TME的影响。通过蛋白质免疫印记实验(western blot,WB)、实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)、RNA-seq测定瑞戈非尼处理后巨噬细胞的极化改变以及PD-L1表达的变化。结果:在本研究中,瑞戈非尼和抗PD-L1抗体联合治疗表现出显著的协同抗HCC作用。这些作用包括抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤血管正常化、增加肿瘤中免疫细胞的浸润和激活,以及促进巨噬细胞从M2向M1方向的极化。此外,我们的研究结果还显示,瑞戈非尼处理巨噬细胞后能够上调巨噬细胞上PD-L1的表达。结论:瑞戈非尼联合抗PD-L1抗体可以增加HCC的治疗效果,并进一步激活肿瘤微环境。瑞戈非尼增强抗PD-L1抗体治疗的疗效的可能机制为增加抗肿瘤免疫细胞的浸润和激活以及促进巨噬细胞向抗肿瘤表型极化。因此,在临床实践中,瑞戈非尼协同抗PD-L1抗体治疗策略有望成为HCC的候选治疗方案。

关键词：肝细胞癌瑞戈非尼 PD-L1 免疫治疗靶向治疗联合治疗

瑞戈非尼调节ERK信号通路影响LX-2细胞增殖激活和凋亡的研究

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瑞戈非尼调节ERK信号通路影响LX-2细胞增殖激活和凋亡的研究

作者：尚佳明河北医科大学

学位级别：硕士

目的:探究瑞戈非尼对LX-2细胞增殖、激活和凋亡的影响,期待为临床防治肝纤维化提供新的思路。方法:将LX-2细胞系分为:细胞空白组(Control),10ng/m LTGFβ1激活组(TGFβ1),TGFβ1激活组+低剂量瑞戈非尼组(5umol/L)(TGFβ1+RL),TGFβ1激活... 详细信息

目的:探究瑞戈非尼对LX-2细胞增殖、激活和凋亡的影响,期待为临床防治肝纤维化提供新的思路。方法:将LX-2细胞系分为:细胞空白组(Control),10ng/m LTGFβ1激活组(TGFβ1),TGFβ1激活组+低剂量瑞戈非尼组(5umol/L)(TGFβ1+RL),TGFβ1激活组+高剂量瑞戈非尼组(10umol/L)(TGFβ1+RH),研究其增殖、迁移、纤维化以及凋亡指标。应用SPSS软件对两组肝纤维化指标进行统计学分析。结果:1.细胞迁移实验:迁移细胞数TGFβ1较Control显著增加(*P<0.05)、TGFβ1+RL较TGFβ1显著增减少(**P<0.01)、TGFβ1+RH较TGFβ1+RL显著增减少(*P<0.05)、TGFβ1+RH较TGFβ1显著增减少(**P<0.01)、TGFβ1+RH较Control显著增减少(***P<0.001)。2.细胞划痕实验:各组愈合率:TGFβ1较Control显著增加(*P<0.05)、TGFβ1+RL较TGFβ1显著增减少(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较TGFβ1+RL显著增减少(****P<0.0001)、TGFβ1+RL较Control显著增减少(**P<0.01)、TGFβ1+RH较TGFβ1显著增减少(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较Control显著增减少(****P<0.0001)。3.流式细胞凋亡实验:凋亡率:TGFβ1+RL较TGFβ1显著增加(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较TGFβ1+RL显著增加(****P<0.0001)、TGFβ1+RL较Control显著增加(***P<0.001)、TGFβ1+RH较TGFβ1显著增加(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较Control显著增加(****P<0.0001)。4.m RNA表达:α-SMA:TGFβ1较Control显著增加(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较TGFβ1+RL显著减少(*P<0.05)、TGFβ1+RL较Control显著增加(**P<0.01)、TGFβ1+RH较TGFβ1显著减少(***P<0.001)。COL1A1:TGFβ1较Control显著增加(***P<0.001)、TGFβ1+RL较TGFβ1显著减少(*P<0.05)、TGFβ1+RL较Control显著增加(*P<0.05)、TGFβ1+RH较TGFβ1显著减少(**P<0.01)。5.蛋白表达:α-SMA:TGFβ1较Control显著增加(****P<0.0001)、TGFβ1+RL较TGFβ1显著减少(**P<0.01)、TGFβ1+RH较TGFβ1+RL显著减少(**P<0.01)、TGFβ1+RL较Control显著增加(***P<0.001)、TGFβ1+RH较TGFβ1组显著减少(****P<0.0001)。Col1A1:TGFβ1较Control显著增加(****P<0.0001)、TGFβ1+RL较TGFβ1显著减少(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较TGFβ1+RL显著减少(***P<0.001)、TGFβ1+RL较Control显著增加(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较TGFβ1显著减少(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较Control显著增加(*P<0.05)。BAX表达:TGFβ1+RL较TGFβ1显著增加(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较TGFβ1+RL显著增加(***P<0.001)、TGFβ1+RL较Control显著增加(***P<0.001)、TGFβ1+RH较TGFB1显著增加(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较Control显著增加(****P<0.0001)。BCL-2表达:TGFβ1较Control显著增加(**P<0.01)、TGFβ1+RL较TGFβ1显著减少(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较TGFβ1+RL显著减少(**P<0.01)、TGFβ1+RL较Control显著增加(**P<0.01)、TGFβ1+RH较TGFB1显著减少(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较Control显著减少(****P<0.0001)。Cleaved caspase3表达:TGFβ1较Control显著减少(***P<0.001)、TGFβ1+RL较TGFβ1显著增加(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较TGFβ1+RL显著增加(***P<0.001)、TGFβ1+RL较Control显著增加(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较TGFβ1显著增加(****P<0.0001)、TGFβ1+RH较Control显著增加(****P<0.0001)。p-ERK/ERK比值的变化:TGFβ1较Cont

关键词：瑞戈非尼肝纤维化 LX-2细胞肝细胞癌

瑞戈非尼后线治疗转移性结直肠癌的真实世界研究

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瑞戈非尼后线治疗转移性结直肠癌的真实世界研究

作者：张秀丽河南大学

学位级别：硕士

背景和目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的发病率和死亡率逐年上升,已成为消化系统最常见的恶性肿瘤。转移是CRC相关死亡的主要原因。目前,转移性结直肠癌(metastatic colorectal cancer,mCRC)后线(三线及三线后)治疗的方案有限。... 详细信息

背景和目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的发病率和死亡率逐年上升,已成为消化系统最常见的恶性肿瘤。转移是CRC相关死亡的主要原因。目前,转移性结直肠癌(metastatic colorectal cancer,mCRC)后线(三线及三线后)治疗的方案有限。瑞戈非尼是一种口服小分子多激酶抑制剂,能够有效抑制参与肿瘤血管生成、肿瘤发生、肿瘤转移、肿瘤免疫的多个蛋白激酶,已被证实可改善难治性mCRC患者的无进展生存期(progression free survival,PFS)和总生存期(overall survival,OS)。然而,瑞戈非尼及其不同的联合用药策略在真实世界中的证据是有限的。白蛋白与碱性磷酸酶比值(albumin to alkaline phosphatase ratio,AAPR)是一种新的预后指数,并且在多种癌症中具有显著的预后价值。因此,本研究旨在探讨真实世界中瑞戈非尼后线治疗mCRC的疗效及安全性,对比分析瑞戈非尼不同联合用药策略的疗效,探索影响瑞戈非尼预后的因素。方法:本研究分析了2018年12月-2022年1月在河南省人民医院接受瑞戈非尼作为后线治疗方案且符合纳入和排除标准的mCRC患者,并收集其临床特征资料及瑞戈非尼相关用药资料。根据瑞戈非尼的联合用药方案,将患者分为瑞戈非尼单药治疗组(单药组)、瑞戈非尼联合免疫组(免疫组)、瑞戈非尼联合化疗组(化疗组)。主要终点指标为OS,次要终点为PFS、疾病控制率(disease control rate,DCR)。应用SPSS 21.0软件进行统计分析。使用Pearsonc检验或Fisher精确检验比较各组之间的临床特征、DCR及不良反应;使用Kaplan–Meier法绘制生存曲线并进行单因素分析,用log-rank检验进行组间差异比较;使用Cox比例风险回归模型进行多因素分析。所有检验都是双侧的,P瑞戈非尼三个治疗队列中,单药组36例,免疫组38例,化疗组11例,m OS分别为8.2个月(95%CI:5.6–10.8)、10.3个月(95%CI:5.0–15.6)和13.8个月(95%CI:2.1–25.4),差异无统计学意义(P=0.162);m PFS分别为2.8个月(95%CI:1.2–4.4)、3.4个月(95%CI:2.5–4.3)和3.1个月(95%CI:1.6–4.6),差异无统计学意义(P=0.791)。DCR分别为25%、52.6%、27.3%,差异有统计学意义(c=6.592,P=0.037)。两两比较结果显示,免疫组的DCR高于单药组,差异有统计学意义(c=5.923,P=0.01535U/L、治疗前白蛋白与碱性磷酸酶比值(AAPR)≤0.42均与较短的OS相关(P值均0.05)。5、全部患者中任何级别的不良反应发生率为77.6%,其中,常见的不良反应有手足综合征17例(21.2%)、食欲改变13例(15.3%)、乏力10例(11.8%)、转氨酶异常10例(11.8%)。3-4级不良反应发生率为10.6%。6、单药组、免疫组和化疗组中任何级别不良反应发生率分别为75%、76.3%和100%,差异无统计学意义(P=0.212)。三组中3-4级不良反应的发生率分别为11.1%、10.5%和0,差异无统计学意义(P=0.766)。结论:1、本研究显示真实世界中瑞戈非尼后线治疗mCRC安全有效。2、瑞戈非尼联合免疫组DCR优于单药组,同时瑞戈非尼联合免疫或化疗较瑞戈非尼单药具有一定的生存获益趋势,但需要扩大样本量进一步对比不同联合策略的疗效。3

关键词：结直肠肿瘤瑞戈非尼真实世界疗效预后

瑞戈非尼通过抑制AKT磷酸化诱导胃肠道肿瘤相关成纤维细胞的凋亡

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瑞戈非尼通过抑制AKT磷酸化诱导胃肠道肿瘤相关成纤维细胞的凋亡

作者：张洺嘉北京协和医学院

学位级别：硕士

研究背景肿瘤相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblasts,CAFs)是肿瘤微环境的重要组成成分,在肿瘤的发生和进展过程中起到关键作用。CAFs通过分泌多种蛋白质、生长因子和趋化因子,参与肿瘤细胞增殖、肿瘤免疫、肿瘤血管生成和细胞... 详细信息

研究背景肿瘤相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblasts,CAFs)是肿瘤微环境的重要组成成分,在肿瘤的发生和进展过程中起到关键作用。CAFs通过分泌多种蛋白质、生长因子和趋化因子,参与肿瘤细胞增殖、肿瘤免疫、肿瘤血管生成和细胞外基质重塑。瑞戈非尼(Regorafenib)属于多激酶抑制剂家族成员,其通过抑制c-KIT、RET、TIE2、PDGFR和FGFR等各种激酶的活性,能够直接抑制肿瘤的生长,也能够调节肿瘤间质和抑制肿瘤血管生成。研究目的Regorafenib是一种新型的口服多激酶抑制剂,能够有效靶向间质细胞,然而目前关于regorafenib对胃肠道CAFs的研究较少。因此,我们以胃肠道CAFs作为本次研究的重点,探究了 regorafenib对胃肠道CAFs的作用及其潜在的机制。研究方法首先,我们建立了 HCT116单独接种以及HCT116和MSC联合接种的皮下移植裸鼠肿瘤模型,用安慰剂/regorafenib对裸鼠进行治疗,检测regorafenib对间质细胞的影响在肿瘤治疗中的重要性。通过免疫组化染色、TUNEL和多重免疫荧光染色,分析regorafenib在体内对肿瘤增殖和凋亡的影响,包括regorafenib对间质细胞和肿瘤上皮细胞增殖和凋亡的作用。由于间质细胞和肿瘤局部巨噬细胞的浸润密切相关,因此免疫组化染色还研究了 regorafenib对间质细胞以及巨噬细胞浸润的影响。之后,我们用胃肠道肿瘤细胞系来源的外泌体处理间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)获得CAFs体外模型。采用MTS和流式细胞术检测regorafenib对体外胃肠道CAFs增殖和凋亡的影响。最后,探究了 regorafenib诱导CAFs凋亡的分子机制。通过Western blot检测了 regorafenib处理胃肠道CAFs后,细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平,以及AKT的表达和磷酸化水平的改变。研究结果在两个肿瘤模型中,regorafenib治疗前,HCT116和MSC联合接种组的肿瘤生长速度显著高于HCT116单独接种组。Regorafenib治疗抑制了体内肿瘤的生长,且对间质比例高的HCT116+MSC肿瘤治疗效果更显著。Regorafenib在体内能够抑制肿瘤增殖,诱导肿瘤凋亡,regorafenib能够同时靶向肿瘤细胞和间质细胞,减少增殖的间质细胞和肿瘤上皮细胞的数量,增加凋亡的间质细胞和肿瘤上皮细胞的数量。此外,regorafenib通过减少肿瘤组织中CAFs的比例从而影响巨噬细胞的浸润。体外实验结果表明,regorafenib对胃肠道CAFs具有增殖抑制、细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡的作用。Western blot结果表明,regorafenib处理胃肠道CAFs后,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Bax表达上调,并且胃肠道CAFs中AKT磷酸化通路被抑制。研究结论1.与肿瘤细胞单独接种组相比,肿瘤细胞与MSC联合接种组的间质比例显著提高。同时间质细胞比例增加,肿瘤的生长速度显著加快,这证实了 CAFs在促进肿瘤增殖方面的积极作用。Regorafenib具有抗肿瘤活性,且对间质细胞比例高的肿瘤疗效更显著,提示regorafenib对CAFs的杀伤作用在肿瘤治疗中发挥重要作用。2.Regorafenib通过减少肿瘤组织中CAFs 比例从而影响巨噬细胞的浸润。3.Regorafenib能够抑制胃肠道CAFs的增殖,诱导CAFs的凋亡,其诱导胃肠道CAFs凋亡的作用是通过抑制AKT的磷酸化通路。

关键词：瑞戈非尼肿瘤相关成纤维细胞细胞凋亡巨噬细胞浸润