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酸枣仁与理枣仁的研究进展及质量标志物预测分析

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中草药 2019年第19期50卷 4769-4784页

作者：闫艳申晨曦张福生裴香萍杜晨晖秦雪梅山西大学中医药现代研究中心山西太原030006 山西中医药大学中药学院山西太原030619

酸枣仁和理枣仁同为鼠李科枣属植物的干燥成熟种子,具宁心安神、敛汗之功效。酸枣仁是中医临床改善睡眠的首选中药,而理枣仁多作为云南民间习用药材。近年来,随着酸枣仁药用需求不断增加,野生资源萎缩,市场上频频出现理枣仁伪充酸枣仁... 详细信息

酸枣仁和理枣仁同为鼠李科枣属植物的干燥成熟种子,具宁心安神、敛汗之功效。酸枣仁是中医临床改善睡眠的首选中药,而理枣仁多作为云南民间习用药材。近年来,随着酸枣仁药用需求不断增加,野生资源萎缩,市场上频频出现理枣仁伪充酸枣仁的现象。在梳理历代本草和总结现代研究的基础上,从传统功效、化学成分及药理作用等方面比较分析酸枣仁和理枣仁的异同;并基于中药质量标志物(Q-marker)的核心概念与研究方法,从生物合成途径、传统药效、传统药性和体内过程等方面对酸枣仁质量标志物进行预测,为完善酸枣仁质量标准提供理论依据。

关键词：酸枣仁理枣仁差异分析质量标志物质量控制

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酸枣仁与理枣仁鉴别方法研究

中国药业 2024年第1期33卷 68-72页

作者：张艳慧张明童刘丽丽王楠河北省保定市食品药品检验所河北保定071000 甘肃省药品检验研究院·甘肃省中藏药检验检测技术工程实验室·国家药品监督管理局中药材及饮片质量控制重点实验室甘肃兰州730070 河北省石家庄海关技术中心保定业务部河北保定071051

目的建立酸枣仁及常见伪品理枣仁的鉴别方法,为酸枣仁的质量控制和市场监督提供依据。方法对酸枣仁和理枣仁进行性状及显微鉴别,采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定其中6’’’-芥子酰斯皮诺素的含量,色谱柱为Phenomenex ... 详细信息

目的建立酸枣仁及常见伪品理枣仁的鉴别方法,为酸枣仁的质量控制和市场监督提供依据。方法对酸枣仁和理枣仁进行性状及显微鉴别,采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定其中6’’’-芥子酰斯皮诺素的含量,色谱柱为Phenomenex C18柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),流动相为0.1%甲酸-10 mmol/L甲酸铵水溶液-甲醇(梯度洗脱),流速为0.2 mL/min,柱温为30℃,进样量为5μL,离子源为电喷雾离子源,正离子、多反应监测模式扫描,电喷雾电压为3.5 kV,离子源温度为150℃,去溶剂气温度为500℃,扫描范围为50~1 000 amu。结果酸枣仁和理枣仁在性状上外种皮纹理存在差异,在显微特征上外种皮栅状细胞、种皮内表皮细胞存在差异。6’’’-芥子酰斯皮诺素的质量浓度在0.205 2~6.156μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.997 5,n=6),检测限为21.13 pg。酸枣仁和理枣仁样品的精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均低于3.0%(n=6);加样回收率分别为97.01%和97.80%,RSD分别为2.15%和2.09%(n=6)。10批酸枣仁和理枣仁中6’’’-芥子酰斯皮诺素的含量分别为0.23,3.70μg/mL。拟订酸枣仁中掺伪理枣仁限度为5%,样品中6’’’-芥子酰斯皮诺素测得含量大于0.5μg/mL时可视为掺伪理枣仁。结论所建立的方法操作简便、结果准确、重复性和稳定性均良好,可有效鉴别酸枣仁和理枣仁。

关键词：酸枣仁理枣仁超高效液相色谱串联质谱法性状鉴别显微鉴别 6’’’-芥子酰斯皮诺素

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酸枣仁和理枣仁化学成分系统表征及对比研究

酸枣仁和理枣仁化学成分系统表征及对比研究

作者：申晨曦山西大学

学位级别：硕士

选题依据:酸枣仁和理枣仁同为鼠李科枣属植物的干燥成熟种子,具宁心安神、敛汗之功效。酸枣仁是中医临床改善睡眠的首选中药,而理枣仁多作为云南民间习用药材。近年来,随着酸枣仁药用需求不断增加,野生资源萎缩,市场上频频出现酸枣仁和... 详细信息

选题依据:酸枣仁和理枣仁同为鼠李科枣属植物的干燥成熟种子,具宁心安神、敛汗之功效。酸枣仁是中医临床改善睡眠的首选中药,而理枣仁多作为云南民间习用药材。近年来,随着酸枣仁药用需求不断增加,野生资源萎缩,市场上频频出现酸枣仁和理枣仁混用的现象,但由于酸枣仁和理枣仁的物质基础及化学差异尚不明确,两者混用无法保障中药临床用药安全。中药是中华文化的精髓,已有几千年的历史。中药物质基础复杂,包含氨基酸、糖、脂肪酸等初级代谢物以及黄酮、皂苷、生物碱等次级代谢物。因此,寻找和建立适合中药整体性特点及复杂物质体系的中药分析方法尤为重要。近年来,核磁共振技术、气质联用技术、液质联用技术等分析技术蓬勃发展,但各种仪器适合分析的物质不同,单凭一种技术无法满足中药复杂的物质分析,故创新性的开发和建立整合多种平台技术,系统表征中药化学成分,可以推动中药物质基础研究发展。目前,质谱技术可以与多种色谱技术联用,高分辨质谱技术可以串联多种质谱仪,具有高灵敏度、高分辨率、信息量丰富的特点,受到越来越多中药研究学者的青睐,并应用于各种中药分析。植物代谢组学是代谢组学的一个重要分支。核磁共振技术、气质联用技术和液质联用技术都是植物代谢组学中常用的研究测试工具,具有检测时间短、重复性好、可以批量分析等优势。代谢组学技术将获得高通量的数据,而多元统计分析可以从庞大的数据中提取有用信息,去除干扰信息,反映样本分组的整体差异性。综上,采用高分辨质谱技术建立快速识别酸枣仁化学成分的方法,应用多种分析技术平台,基于非靶向植物代谢组学技术,全面分析酸枣仁和理枣仁化学轮廓并进行对比研究,找出两者差异代谢物,并对其代表性成分进行靶向定量分析,为酸枣仁和理枣仁药效物质基础研究提供依据。目的:建立快速、高效、准确的酸枣仁化学成分表征方法;应用建立的成分表征方法,对酸枣仁和理枣仁中成分进行快速鉴定,通过非靶向代谢组学技术比较酸枣仁和理枣仁中初级和次级代谢物;建立LC-MS/MS同时测定9种成分的靶向定量方法,并应用于酸枣仁和理枣仁的质量研究中。方法:1.采用UHPLC-Q-Orbitrap MS分析技术,Full MS/dd ms2数据采集模式,得到酸枣仁的质谱数据。建立酸枣仁化学成分的本地数据库、构建不同类型化合物的理论分子网络,将黄酮类、皂苷类和生物碱类在不同碰撞能量下获得的特征碎片离子,导入CompoundDiscoverer软件Compound Class Scoring模块进行化合物桥接,并与理论分子网络进行匹配,结合化合物二级质谱图实现对酸枣仁中化合物结构的快速识别。2.基于1H NMR、GC-MS及UHPLC-Q-Orbitrap MS技术,结合参考文献和HMDB数据、NIST数据库及酸枣仁化学成分快速识别策略对酸枣仁和理枣仁中氨基酸和糖类、脂肪酸以及次级代谢物进行鉴定。根据主成分分析、正交偏最小二乘判别分析和s-plot分析等化学计量学手段对16批酸枣仁和13批理枣仁进行分析,结合VIP＞1和p＜0.05筛选出酸枣仁和理枣仁的差异代谢物。运用差异代谢物相对峰面积进行相对含量分析。3.采用UPLC-MS/MS同时测定酸枣仁中9种化学成分的方法,分别对标准曲线线性关系、仪器精密度、样品稳定性、重复性、加样回收率进行方法学考察。运用建立的方法对29批酸枣仁和理枣仁样品进行含量测定,并将结果进行主成分分析和偏最小二乘判别分析。结果:1.通过UHPLC-Q-Orbitrap MS分析技术,构建了酸枣仁中化学成分快速识别的分析策略。首先建立了酸枣仁本地数据库,共114个化合物,包含黄酮50个,皂苷36个,生物碱类成分28个。其次基于化合物的结构特征,建立酸枣仁中化学成分的理论分子网络,分别预测144个黄酮、240个生物碱和32个皂苷。靶向分析各类型化合物的裂解规律,分别确定黄酮、生物碱、皂苷各类成分的特征离子。通过与CD软件进行桥接,共匹配到169个化学成分,其中共90个化合物被初步鉴定,分别为64个黄酮类成分、21个生物碱类成分以及5个皂苷类成分。2.采用1H NMR技术,参考文献和数据库,共指认酸枣仁和理枣仁中30个初级代谢物,结合VIP＞1和p＜0.05筛选出亮氨酸,异亮氨酸,丙氨酸,赖氨酸,谷氨酰胺,天冬酰胺,蛋氨酸,胆碱,柠檬酸,乙酸,蔗糖和棉子糖12个初级差异代谢物。根据聚类热图进行相对含量分析发现,酸枣仁中亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、蛋氨酸、胆碱、柠檬酸和乙酸含量较高,而理枣仁中蔗糖和棉籽糖含量较高;通过GC-MS代谢组学技术,结合NIST数据库,共指认脂肪酸类成分28个,结合多元统计分析,VIP＞1和p＜0.05筛选出7个脂肪酸类初级差异代谢物分别为硬脂酸、棕榈酸、花生酸、油酸、山嵛酸、亚油酸和维生素E。其中单不饱和脂肪酸如硬脂酸、棕榈酸、花生酸、油酸和二十二烷酸在理枣仁中的含量明显高于酸枣仁,而多不饱和脂肪酸如亚油酸和维生素E在酸枣仁中

关键词：酸枣仁理枣仁高分辨质谱代谢组学差异代谢物

基于高分辨率熔解曲线技术鉴别酸枣仁及其混伪品理枣仁

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中国药事 2022年第11期36卷 1267-1279页

作者：杨宝李忠华董培智周瑞雪孙丽萍裴晓莎朴晋华山西省检验检测中心(山西省标准计量技术研究院) 太原030000

目的:采用高分辨率熔解曲线技术(HRM)快速鉴别酸枣仁与相关混伪品药材理枣仁及理枣仁杂合品种。方法:采集了14份酸枣仁及10份市售混伪品理枣仁进行样品DNA提取,通过ITS2序列使用NCBI的Primer-Blast设计引物,筛选引物浓度并对采集的样品... 详细信息

目的:采用高分辨率熔解曲线技术(HRM)快速鉴别酸枣仁与相关混伪品药材理枣仁及理枣仁杂合品种。方法:采集了14份酸枣仁及10份市售混伪品理枣仁进行样品DNA提取,通过ITS2序列使用NCBI的Primer-Blast设计引物,筛选引物浓度并对采集的样品进行检测分析。结果:在引物浓度为10μmol·L-1的条件下,向反应体系加入0.3μL引物时,可获得优质的熔解曲线。应用该方法对14批酸枣仁及10批理枣仁均可进行HRM曲线分析鉴别,并且通过该方法能够准确区分理枣仁及理枣仁杂合品种;将理枣仁与理枣仁杂合品粉分别掺入酸枣仁样品中,HRM检测技术最低掺伪检测限为10%。结论:基于HRM技术可实现酸枣仁与其常见混伪品理枣仁、理枣仁杂合品种的准确鉴别,对市场药材的快速检测及质量评估有一定应用前景。

关键词：高分辨率熔解曲线理枣仁 ITS2 酸枣仁分子鉴定

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双重实时荧光PCR法鉴别酸枣仁和理枣仁

农产品加工 2021年第14期 67-71,74页

作者：杨宝郭星郑巍朱殿龙裴社强邓自新张烨李静太原市食品药品检验所山西太原030006 山西省食品药品检验所山西太原030006 大连市检验检测认证技术服务中心辽宁大连116021 山西省食品检验技术研究院山西太原030012

在现有单一物种检测方法的基础上,以ITS2基因作为靶基因片段,设计酸枣仁及伪品理枣仁的特异性引物和Taqman探针,建立一种多重实时荧光PCR检测方法。通过特异性、灵敏度、覆盖度及混合样本检测与传统性状鉴别比较进行方法评估。该方法通... 详细信息

在现有单一物种检测方法的基础上,以ITS2基因作为靶基因片段,设计酸枣仁及伪品理枣仁的特异性引物和Taqman探针,建立一种多重实时荧光PCR检测方法。通过特异性、灵敏度、覆盖度及混合样本检测与传统性状鉴别比较进行方法评估。该方法通过1管PCR反应实现对酸枣仁和伪品理枣仁的同时鉴别,反应时间缩短至2~3 h,方法的特异性好,灵敏度可达到5 pg/反应。基于ITS2区域序列为靶基因建立双重实时荧光PCR检测方法能够成功鉴定酸枣仁及其混伪品理枣仁,为酸枣仁真伪鉴别提供依据。

关键词：酸枣仁理枣仁双重实时荧光 ITS2 混伪品

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酸枣仁、理枣仁及枳椇子的显微鉴别

现代中药研究与实践 2018年第3期32卷 9-12页

作者：王雪杨光周修腾邵爱娟韦颖池秀莲李颖程蒙李晓琳道地药材国家重点实验室(培育基地)中国中医科学院中药资源中心北京100700 北京师范大学经济与资源管理研究院北京100875

目的采用性状鉴别、显微鉴别的方法鉴定酸枣仁及主要伪品理枣仁、枳椇子,为酸枣仁药材的鉴定提供依据。方法采用体视显微镜和石蜡切片法观察种子的外观形态、解剖结构和显微结构并拍照。结果酸枣、理枣仁、枳椇子在表面颜色、纵线纹有... 详细信息

目的采用性状鉴别、显微鉴别的方法鉴定酸枣仁及主要伪品理枣仁、枳椇子,为酸枣仁药材的鉴定提供依据。方法采用体视显微镜和石蜡切片法观察种子的外观形态、解剖结构和显微结构并拍照。结果酸枣、理枣仁、枳椇子在表面颜色、纵线纹有无、种皮质地等特征上有显著差异,可作为三者的性状鉴别特征;种皮栅状细胞大小、光辉带、晶体有无及晶体的种类可作为显微鉴别特征。结论可通过上述鉴别特征区分酸枣仁及其伪品理枣仁和枳椇子,为酸枣仁药材鉴别提供科学依据。

关键词：酸枣仁理枣仁枳椇子显微鉴别性状鉴别