检索结果-南通市图书馆

作者：易忠良承德医学院

学位级别：硕士

缺血性脑血管疾病是严重威胁人类健康的常见疾病之一,在缺血性脑血管疾病发生发展过程中,会发生脑缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI),其严重影响疾病的治疗和预后,因此加强对脑缺血再灌注损伤的病理生理机制及防治措施... 详细信息

缺血性脑血管疾病是严重威胁人类健康的常见疾病之一,在缺血性脑血管疾病发生发展过程中,会发生脑缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI),其严重影响疾病的治疗和预后,因此加强对脑缺血再灌注损伤的病理生理机制及防治措施的研究成为一项重要的医学课题。黄芪是一种被广泛应用于治疗缺血性脑血管病的传统中药,在IRI方面的防治作用日益被重视。环黄芪醇(cycloastragenol,CAG)是黄芪有效部位黄芪甲苷的苷元,在体外实验中被证实有显著的端粒酶激活作用,而端粒酶是一种内源性神经保护措施,在脑缺血再灌注损伤中,过表达的端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)能起到脑保护作用。环黄芪醇对脑缺血再灌注损伤有无保护作用及其机制尚不明确。本研究通过建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型,术前给予环黄芪醇干预,通过检测大鼠神经功能评分和脑梗死灶容积百分比,观察环黄芪醇对大鼠脑缺血再灌注损伤的减轻作用;通过免疫组化和蛋白印迹法测定大鼠脑组织中TERT表达的变化和TUNEL法检测神经元凋亡的情况,探讨环黄芪醇抑制神经元凋亡、提高TERT的表达,从而减轻脑缺血再灌注损伤的分子机制,为环黄芪醇防治脑缺血再灌注损伤提供依据。第一部分环黄芪醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的减轻作用目的:探讨环黄芪醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的减轻作用。方法:1实验对象的分组与处理选取60只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,环黄芪醇低剂量组(2.5 mg/kg/d)、中剂量组(5.0 mg/kg/d)、高剂量组(10mg/kg/d)和血塞通对照组(20 mg/kg/d),每组10只。每天灌胃给药1次,连续7天,第7天给药1h后进行造模,假手术组和模型组给予等体积的0.5%CMC-Na混悬剂。2.局灶性脑缺血再灌注模型的制备采用Zea Longa线栓法略做改良制作大鼠右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2h后拔出线栓,再灌注24h后,进行各项指标的检测。3.大鼠Garcia JH神经功能评分再灌注损伤24h后,采用双盲法,按照Garcia JH大鼠神经功能评分标准,进行神经功能评分。4.大鼠脑梗死灶容积百分比再灌注损伤24h后处死大鼠,断头取脑,经TTC染色,拍照,计算脑梗死灶容积百分比。结果:1.环黄芪醇对大鼠Garcia JH神经功能评分的影响与假手术组相比,模型组大鼠神经功能评分明显降低(P环黄芪醇中、高剂量组的神经功能评分均升高(P环黄芪醇低剂量组与模型组统计无差异(P>0.05)。2.环黄芪醇对大鼠脑梗死灶容积百分比的影响与假手术组相比,模型组大鼠脑梗死灶容积百分比显著升高(P环黄芪醇中、高剂量组、血塞通组脑梗死灶容积百分比降低(P环黄芪醇低剂量组与模型组统计无显著性差异(P>0.05)。小结:环黄芪醇能提高脑缺血再灌注大鼠的神经功能评分,减小脑梗死灶容积百分比。环黄芪醇可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。第二部分环黄芪醇对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡和TERT表达的影响目的:观察环黄芪醇对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡和端粒酶逆转录酶(TERT)表达的影响,探讨环黄芪醇减轻脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法:检测TERT蛋白的表达:将雄性SD大鼠随机分成3组:假手术组、模型组、环黄芪醇组(10mg/kg/d),除假手术组外,其余各组均进行MACO造模,给药和造模方式同第一部分。在脑缺血再灌注24h后,以缺血侧脑皮质,半暗区为主要取材和观察部位,通过免疫组织化学法和蛋白印迹法检测大鼠缺血侧皮质中TERT蛋白的表达。检测神经元凋亡:将雄性SD大鼠随机分成5组:假手术组、模型组、环黄芪醇组(10mg/kg/d)、端粒酶抑制剂叠氮胸苷(ATZ)组(20mg/kg/d)、环黄芪醇(10mg/kg/d)+端粒酶抑制剂(ATZ)组(20mg/kg/d)。给药和造模方式同上,脑缺血再灌注24h后,通过TUNEL染色法检测大鼠缺血侧半暗带区神经元的凋亡指数。结果:1.免疫组化法测定TERT蛋白的表达:与假手术组相比,模型组TERT的表达升高(P环黄芪醇组TERT表达升高(P环黄芪醇组TERT蛋白表达增加(P环黄芪醇组的凋亡指数(AI)均上升(P环黄芪醇组凋亡指数(AI)明显降低(P环黄芪醇组相比,端粒酶抑制剂+环黄芪醇组凋亡

关键词：环黄芪醇脑缺血再灌注端粒酶逆转录酶细胞凋亡

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环黄芪醇调控Keap1/Nrf2通路对t-BHP诱导C2C12成肌细胞氧化损伤的保护作用

环黄芪醇调控Keap1/Nrf2通路对t-BHP诱导C2C12成肌细胞氧化损伤的...

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作者：刘利山西医科大学

学位级别：硕士

目的:肌少症是指随着机体衰老以骨骼肌质量减少、力量减弱为特征的一种慢性退行性疾病。研究表明衰老伴随着活性氧(reactive oxygen species,ROS)持续累积与骨骼肌减少密切相关。本实验采用叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,t-B... 详细信息

目的:肌少症是指随着机体衰老以骨骼肌质量减少、力量减弱为特征的一种慢性退行性疾病。研究表明衰老伴随着活性氧(reactive oxygen species,ROS)持续累积与骨骼肌减少密切相关。本实验采用叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,t-BHP)诱导小鼠C2C12成肌细胞,探究黄芪中的主要成分环黄芪醇(cycloastragenol,CAG)是否对C2C12成肌细胞氧化应激损伤有保护作用,并探讨环黄芪醇对Keap1/Nrf2抗氧化通路的调节机制,为骨骼肌减少相关疾病提供治疗思路。方法:1.体外培养C2C12细胞,采用t-BHP处理C2C12细胞建立细胞氧化应激模型。分别采用0、1、10、25、50、75、100、150、200μmol/L的t-BHP处理C2C12细胞6 h,CCK-8检测细胞活力,确定t-BHP的干预浓度。用0、0.1、0.5、1、5、10、50、100、500μmol/L的环黄芪醇处理C2C12细胞24 h,CCK-8检测细胞活力,确定环黄芪醇的干预浓度。2.将C2C12细胞分为5组:Control组、t-BHP组(100μmol/L t-BHP)、环黄芪醇低剂量组(1μmol/L CAG+100μmol/L t-BHP)、环黄芪醇中剂量组(10μmol/L CAG+100μmol/L t BHP)、环黄芪醇高剂量组(20μmol/L CAG+100μmol/L t-BHP)。CCK-8检测不同浓度的环黄芪醇对t-BHP诱导C2C12细胞氧化损伤的影响;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况;Ed U-488实验检测细胞增殖情况;DCFH-DA荧光探针法测定细胞的ROS水平;生化法检测细胞中MDA、SOD水平;Western blot检测Pax7、Myo D、Keap1、Cyto-Nrf2、Nuclear-Nrf2、HO-1蛋白表达量;细胞免疫荧光检测Nrf2核转位情况。3.敲低Nrf2,C2C12细胞分为6组(t-BHP干预浓度为100μmo/L,环黄芪醇干预浓度为20μmo/L):Control组、t-BHP组、t-BHP+si-NC组、t-BHP+si-Nrf2组、t-BHP+si-Nrf2+CAG组、t-BHP+CAG组。DCFH-DA荧光探针法测定各组细胞ROS水平;Western blot检测Pax7、Myo D、HO-1蛋白表达量。结果:***-8结果显示,小于50μmol/L的t-BHP对C2C12细胞活力无明显影响,大于75μmol/L的t-BHP对C2C12细胞产生明显的细胞毒作用。1-100μmol/L的环黄芪醇处理后,细胞活力显著升高,而500μmol/L的环黄芪醇处理后,会产生明显的细胞毒性,抑制细胞活力。因此最终选用1、10、20μmol/L环黄芪醇处理C2C12细胞24 h,100μmol/L t-BHP处理C2C12细胞6 h,作为后续实验浓度。2.C2C12细胞经t-BHP诱导后,细胞中ROS、MDA表达量升高,SOD表达量减少,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞百分比升高,Ed U阳性增殖细胞减少,增殖相关蛋白Pax7、分化相关蛋白Myo D表达减少。与t-BHP组相比,环黄芪醇处理后能提高C2C12细胞活力,降低胞内ROS和MDA含量,提高SOD活性,Ed U阳性增殖细胞增多,环黄芪醇亦可促进细胞增殖、分化相关蛋白Pax7、Myo D的表达。环黄芪醇可通过抑制Keap1蛋白表达,促进Nrf2与Keap1解偶联后的入核表达,上调下游关键蛋白HO-1的表达。3.敲低Nrf2后,胞内ROS含量增加,HO-1蛋白水平下调,Nrf2/HO-1信号通路被抑制;Pax7、Myo D蛋白表达减少,成肌细胞增殖分化能力下降。结论:环黄芪醇可在C2C12细胞氧化损伤中发挥抗氧化保护作用,其抗氧化机制可能与抑制Keap1的表达、促进Nrf2核转位并上调下游靶分子HO-1表达相关;环黄芪醇还可促进成肌细胞增殖分化相关蛋白的表达,为肌少症的防治提供新的思路。

关键词： t-BHP C2C12成肌细胞环黄芪醇氧化应激 Keap1/Nrf2

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荧光光谱法测定黄芪甲苷及环黄芪醇与牛血清白蛋白相互作用

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中国实验方剂学杂志 2013年第16期19卷 123-127页

作者：罗志强张玉杰孙青魏宝红刘星王雄飞袁瑞娟北京中医药大学中药学院北京100102

目的:采用荧光光谱法研究黄芪甲苷及环黄芪醇与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用机制。方法:固定BSA浓度,依次加入不同浓度的黄芪甲苷或环黄芪醇,扫描其荧光猝灭光谱及同步荧光光谱。结果:黄芪甲苷和环黄芪醇均能对BSA的荧光发生淬灭,猝灭... 详细信息

目的:采用荧光光谱法研究黄芪甲苷及环黄芪醇与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用机制。方法:固定BSA浓度,依次加入不同浓度的黄芪甲苷或环黄芪醇,扫描其荧光猝灭光谱及同步荧光光谱。结果:黄芪甲苷和环黄芪醇均能对BSA的荧光发生淬灭,猝灭类型属于静态猝灭;在293 K下,黄芪甲苷和环黄芪醇与BSA的结合常数分别为1.35×104,8.51×***-1,结合位点数n分别为0.726 4,0.731 2,在310 K温度下,二者与BSA的结合常数均略有下降。二者与BSA的结合过程均属于焓变小于零、熵变大于零、吉布斯自由能小于零的自发过程,与BSA的作用力类型为静电作用为主。同步荧光光谱显示二者均对色氨酸残基构象产生影响,对酪氨酸残基构象影响较小。结论:本实验阐明了黄芪甲苷和环黄芪醇与牛血清白蛋白的作用机制,为其进一步用药提供了理论依据。

关键词：黄芪甲苷环黄芪醇牛血清白蛋白荧光光谱作用机制

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基于网络药理学研究四君子汤和环黄芪醇抗衰老作用机制

基于网络药理学研究四君子汤和环黄芪醇抗衰老作用机制

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作者：袁洋昆明理工大学

学位级别：硕士

目前,人口老龄化已成为中国乃至全世界尤为关注的话题。人口老龄化会带来很多重大的社会问题包括社会劳动力不足,医疗资源紧缺,家庭经济负担沉重等。这一系列问题都源于衰老进程中会伴随着各种与年龄相关慢性非传染性疾病的产生,如神经... 详细信息

目前,人口老龄化已成为中国乃至全世界尤为关注的话题。人口老龄化会带来很多重大的社会问题包括社会劳动力不足,医疗资源紧缺,家庭经济负担沉重等。这一系列问题都源于衰老进程中会伴随着各种与年龄相关慢性非传染性疾病的产生,如神经退行性疾病,心血管疾病,肿瘤等。因此如何健康的衰老已成为全世界所关注的焦点。衰老是指随着年龄的增长人体内在生理机能的逐步下降,进而导致机体组织,器官以及细胞功能的逐渐丧失。在个体衰老的过程中伴随着基因组不稳定,蛋白稳定性下降,端粒损耗,表观遗传改变,线粒体功能紊乱,干细胞耗竭以及细胞间通信改变等衰老相关的一系列特征。由于衰老是一个复杂的,多因素影响的生命过程,单一的学说并不能完全涵盖和阐释衰老的机制,因此单一靶点的抗衰老药物的作用有一定的局限性。我国传统中医药在抗衰老药物的研究中具有独特优势,但由于中药其成分复杂多样,各成分之间存在相互协同的作用,使得中药在抗衰老相关机制方面研究报道的较少。目前传统的中药研究主要以“单一成分-单一靶点-单一途径”的模式为主,这样的研究模式不但没有解决抗衰老单一靶点化合物研究的局限性,也没有体现中药多靶点和多途径的优势。网络药理学是以网络信息学为平台以系统生物学为原理,从整体水平上研究疾病发生和发展的一门新兴学科,其整体性和系统性以及注重药物与靶点以及疾病相互作用的特点与中医药学的研究理念不谋而合。本研究选取具有益气补血功效的中药组方四君子汤和我们前期研究发现的具有清除衰老细胞活性的中药小分子化合物环黄芪醇,采用网络药理学、分子对接以及体内实验验证相结合的方法,系统的研究四君子汤和环黄芪醇抗衰老作用的分子机制,同时也为网络药理学在中药研究中的可行性提供理论基础和科学依据。四君子汤是益气补血的中药组方,其包含人参,茯苓,白术和炙甘草四味中药,前期已有研究通过网络药理学初步分析了四君子汤的抗衰老作用机制,但数据来源单一且缺乏实验验证。因此,为了系统和全面的研究四君子汤的抗衰老作用机制,我们首先通过TCMSP数据库筛选得到131个生物活性成分及249个相关靶标,根据拓扑学分析表明山奈酚和槲皮素是四君子汤复方中重要的化合物。将249个靶标与Genecards等数据库筛选出的24553个衰老相关的靶点制作韦恩图,结果显示四君子汤与衰老之间有235个共同靶点。接下来,利用String数据库构建PPI网络并利用Cytoscape3.7.2软件进行拓扑学分析,根据degree值排序以及靶点在衰老中的作用,结果显示AKT1、STAT3、TP53、RELA、MAPK14和IL6为核心基因。进一步的GO和KEGG富集分析显示四君子汤调控衰老和抗细胞凋亡的生物学过程;且与PI3K/AKT和p38MAPK信号通路有关。同时,借助Auto Dock软件对核心成分(槲皮素和山奈酚)与核心靶点进行分子对接,结果显示四君子汤的两个核心成分与重要靶点的结合活性较好,进一步证明了核心靶点的重要性。在此基础上,通过自然衰老小鼠模型评价四君子汤的抗衰老活性和网络药理学的预测结果。结果表明四君子汤能够提高衰老小鼠毛发的光泽度和骨密度,并下调P53和P21等衰老相关蛋白的表达。WB结果显示四君子汤抑制PI3K/AKT和MAPK信号通路相关蛋白的表达,提示其抗衰老活性可能与上述通路相关,同时也进一步验证了网络药理学的预测结果。我们前期研究发现,从具有“补气诸药之最”的黄芪中提取的单体化合物环黄芪醇(Cycloastragenol,CAG)具有清除衰老细胞和抑制衰老相关分泌表型的作用,其机制可能与下调Bcl-2家族抗凋亡蛋白,抑制p38MAPK/NF-κB和JAK/STAT3信号通路有关。为了进一步研究CAG的抗衰老活性和药理机制,我们首先利用Pubchem以及Swiss Target Prediction数据库经过筛选得到110个相关靶标。将110个靶标与Genecards等数据库筛选出24553个衰老相关的靶点制作韦恩图,得到了108个共有的靶点。接下来,利用String数据库构建了PPI网络并利用Cytoscape3.7.2软件进行拓扑学分析,根据degree值排序显示AKT1、IL6、TP53、STAT3以及MAPK3为核心基因。进一步的GO和KEGG富集分析显示环黄芪醇调控抗细胞凋亡的生物学过程;且与PI3K/AKT、p38MAPK以及STAT3信号通路有关。同时借助Auto Dock软件对CAG与核心靶点进行分子对接,结果显示CAG与重要靶点的结合活性较好,进一步证明了核心靶点的重要性。在此基础上,通过用辐照诱导衰老小鼠模型来评价环黄芪醇的抗衰老活性和网络药理学的预测结果。结果表明CAG能够提高衰老小鼠毛发的光泽度以及改善衰老小鼠焦虑的行为学表现;进一步的组织学分析显示,CAG具有改善小肠微绒毛结构、改善了胫骨的骨密

关键词：衰老四君子汤环黄芪醇网络药理学分子对接实验验证

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黄芪甲苷和环黄芪醇生产工艺的研究

黄芪甲苷和环黄芪醇生产工艺的研究

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作者：王立媛北京化工大学

学位级别：硕士

黄芪药材所含黄芪皂苷种类非常多,能够从黄芪根中分离鉴定出来就的就有数十种。黄芪甲苷(AstragalosideⅣ, AST)是主要有效成分之一。它具有加强免疫力,保护肝脏,清除体内自由基等作用,具有很高的药用价值。环黄芪醇(Cycloastragenol,C... 详细信息

黄芪药材所含黄芪皂苷种类非常多,能够从黄芪根中分离鉴定出来就的就有数十种。黄芪甲苷(AstragalosideⅣ, AST)是主要有效成分之一。它具有加强免疫力,保护肝脏,清除体内自由基等作用,具有很高的药用价值。环黄芪醇(Cycloastragenol,C A)是从豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根中直接提取分离或由黄芪甲苷(Astragaloside IV)的水解得到,被认为是抗衰老的明星分子。本实验从黄芪药材出发,研究黄芪甲苷的生产工艺,并对黄芪甲苷的水解产物环黄芪醇的生产方法做出探究。本课题的目的是建立一种环保经济的黄芪甲苷生产方法,为实现黄芪甲苷的工业化生产打下基础;系统研究环黄芪醇的生产方法,分析黄芪甲苷到环黄芪醇的转化过程,找出最佳生产方法。首先,比较高效液相色谱-蒸发光检测器(HPLC-ELSD)、高效液相色谱-示差折光检测器(HPLC-RI)和硅胶薄层色谱法(TLC)的优劣,并优化检测条件建立黄芪甲苷及环黄芪醇的检测方法。其次,建立黄芪甲苷的生产工艺：优化传统的溶剂提取法,筛选出黄芪甲苷含量高的原料。然后利用绿色木霉对其进行发酵,优化发酵培养基为黄芪粉20g·L-1,葡萄糖10g·L-1,酵母粉5g·L-1, (NH4)2SO4 2.8g·L-1, KH2PO4 4g·L-1, MgSO4·7H2O 1g·L-1, CaCl2 1g·L-1,初始pH值为5.0,优化发酵条件一接种种子液体积比例为1%,温度28℃,转速120 r·min-1,周期6天。筛选出HPD-100大孔吸附树脂,探究最佳分离条件,得到产品的纯度为11%左右,该工艺的产率为95%。利用硅胶柱层析纯化,产品的纯度为86.5%,本步骤的产率为70.8%。利用甲醇重结晶可以得到纯度98%以上的产品,经过质谱鉴定可以确定分离产品为黄芪甲苷。最后,探究环黄芪醇的生产方法：硫酸水解的方法,黄芪甲苷粗提物加入5%的硫酸溶液,料液比1：25,在130℃,水解6h,可得到转化率67%的产品。商品酶酶解的方法,所购买的商品酶中白银赛诺生化有限公司产的p-葡萄糖苷酶效果最好,酶解条件为最适时间为48h,酶活浓度为500 IU·ml底物浓度为50mg·ml-1,但是得到环黄芪醇的转化率仅在10%左右,探究发现抑制因素可能不仅仅是葡萄糖的累积。绿色木霉和炭黑曲霉混菌发酵黄芪药材产环黄芪醇,培养基为黄芪粉20g·L-1,可溶性淀粉10g·L-1,酵母粉5g·L-1, (NH4)2SO42.8g·L-1, KH2PO4 4g·L-1, MgSO4·7H2O 1g·L-1, CaCl21g·L-1,吐温-80体积比例0.5‰,初始pH值为5.0。最适发酵条件接种种子液体积比例为1%,接种绿色木霉,发酵3天后接种炭黑曲霉;开始温度为28℃,接种炭黑曲霉后调为30℃;摇瓶转速120r·min-1,发酵周期8天,此时环黄芪醇的最佳的转换率26%左右。这种方法清洁环保,能耗低,目前的转化率已经超过了商品酶具有较高的发展潜力,但是为了进一步提高转化率,还存在许多待解决的问题值得探究。

关键词：黄芪甲苷绿色木霉分离纯化环黄芪醇炭黑曲霉

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黄芪甲苷和环黄芪醇的体内外代谢研究

黄芪甲苷和环黄芪醇的体内外代谢研究

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作者：刘晓亚北京中医药大学

学位级别：硕士

当今世界各国人口老龄化速度加快,防治衰老、延年益寿就成为人们的迫切需要,探求有效的抗衰老药物成为热点。目前,衰老机理有影响的是端粒学说,若激活端粒酶,可以增加细胞分裂次数,延长寿命。近年研究证实黄芪甲苷(Astragaloside Ⅳ, A... 详细信息

当今世界各国人口老龄化速度加快,防治衰老、延年益寿就成为人们的迫切需要,探求有效的抗衰老药物成为热点。目前,衰老机理有影响的是端粒学说,若激活端粒酶,可以增加细胞分裂次数,延长寿命。近年研究证实黄芪甲苷(Astragaloside Ⅳ, AST)的皂苷元环黄芪醇(Cycloastragenol, CAG)具有显著的端粒酶激活作用,AST也早已证实具有明显的抗衰老活性。二者作为第四代天然保健品和抗衰老药物引起广泛关注,因而对它们的研究也成为热点。目前很多研究证实皂苷类物质在体内可发生糖基水解,代谢产物包括皂苷元作为主要物质进入血液发挥更大的药理作用。AST同为大分子皂苷,其口服生物利用度很低;其在体内吸收代谢转化及真正发挥药效的成分等问题目前尚不清楚。CAG为其皂苷元,二者的理化性质不同,这可能直接导致二者生物利用度的差异,影响体内吸收分布及代谢,继而进一步影响药效作用。因而,本课题对AST及CAG进行体内外代谢转化过程、转化部位及代谢产物研究,明确药效成分。本课题首先对AST和CAG的理化性质进行研究,然后分别探讨二者体内外的代谢特性,明确代谢途径,为新药和保健品合理开发提供实验依据。本论文主要包括三部分：第一部分文献综述对衰老及抗衰老药物和保健品的研究进展,皂苷类药物的体内外代谢转化研究进行概括,对AST及CAG的研究现状进行了归纳和分析。第二部分实验部分AST及CAG的理化性质和二者体内外代谢的研究,包括代谢产物研究、代谢途径分析等。 1AST及CAG理化性质评价对二者的近似溶解度,水中平衡溶解度实验结果显示,二者理化性质不同。 2AST体内外代谢的研究 (1)体内代谢产物分析通过灌胃大鼠AST (40mg·kg-1),收集48h的大鼠尿液及粪便,采用LC-MS/MS检测原型及代谢产物。在大鼠的尿液及粪便中均未检测到原型药物。其中,大鼠尿液中检测到2个代谢产物：A(vivo)1(m/z513)和A(vivo)2(m/z543)。根据多级质谱推测A(vivo)1可能为CAG的异构体或三元开环产物;A(vivo)2可能为甲氧基化代谢产物。大鼠粪便中检测到4个新物质,分别为A(vivo)1’(m/z513), A(vivo)2’(m/z513), A(vivo)3’(m/z543)和A(vivo)4’(m/z511),推测A(vivo)1’可能为CAG:A(vivo)2’、A(vivo)3’与尿液中A(vivo)1、 A(vivo)2一致;A(vivo)4’可能为CAG脱氢氧化产物。 (2)体外代谢特性及代谢产物分析首先考察在人工胃液和人工肠液中的稳定性,可看出AST在人工胃液和肠液反应4h内基本保持稳定;通过AST的离体肠道菌群代谢,发现AST易被水解,发生脱糖基反应,生成CAG-6-O-β-D-葡萄糖苷和CAG。说明AST在肠道内不稳定,可被肠道菌群代谢。大鼠肝脏对AST代谢的实验发现,AST在大鼠肝中几乎不发生代谢,说明口服AST后,几乎无肝脏首关作用。 3CAG体内外代谢的研究 (1)体内代谢产物分析通过灌胃大鼠CAG (40mg·kg-1),收集24h的尿液及粪便,采用LC-MS/MS检测。大鼠尿液中检测到CAG(CO)和7种代谢产物C1-C7,分别为C1(m/z529), C2(m/z529), C3(m/z527), C4(m/z543), C5(m/z485), C6(m/z469)和C7(m/z353)根据多级质谱推测几个代谢物多为氧化和甲基化的代谢产物。大鼠粪便中发现了CAG(CO-1’,C0-2’)和9种代谢产物C1’-C9’,分别为C1’(m/z527), C2’(m/z527), C3’(m/z529), C4’(m/z485), C5’(m/z499), C6’(m/z543), C7’(m/z455), C8’(m/z469)和C9’(m/z453)。CAG的体内代谢产物多为甲基化和氧化代谢产物。 (2)体外肝代谢动力学大鼠肝匀浆中酶促动力学研究,得到最佳温孵时间40min,最佳蛋白浓度2.0mg·mL-1,最佳底物浓度0.05mg·mL-1。计算得到Vmax为6.88×10-5μmoL·(min·mg protein)-1, Km为18.8μmol·L-1。 CAG在大鼠不同组织中代谢比较结果显示,在心、脾、肺、肾中代谢能力较低且远不如在肝中的代谢能力。第三部分结论及讨论 AST在体内易发生生物转化,生成皂苷元CAG;CAG在体内代谢。由此推测AST被肠道菌群转化为药理活性较强的代谢产物,主要通过苷元CAG发挥药效。

关键词：代谢环黄芪醇黄芪甲苷体内体外

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吲哚酰肼类化合物IHZ-1和环黄芪醇在抗肿瘤和抗衰老中的作用和机制初探

吲哚酰肼类化合物IHZ-1和环黄芪醇在抗肿瘤和抗衰老中的作用和机...

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作者：孙曼婷昆明理工大学

学位级别：硕士

原发性肝癌是常见的消化系统肿瘤之一,其发病率和死亡率呈现逐渐上升的趋势,全世界每年约有800000例患者罹患HCC,且预后较差,是死亡率第三高的癌症。目前肝癌的治疗手段包括手术治疗、化学药物治疗、放射治疗等,其中肝癌的药物治疗仍是... 详细信息

原发性肝癌是常见的消化系统肿瘤之一,其发病率和死亡率呈现逐渐上升的趋势,全世界每年约有800000例患者罹患HCC,且预后较差,是死亡率第三高的癌症。目前肝癌的治疗手段包括手术治疗、化学药物治疗、放射治疗等,其中肝癌的药物治疗仍是主要治疗手段之一。目前临床上使用的传统抗肝癌药物最大的缺点是缺乏组织选择性,在体内分布广泛,使其在发挥药效的同时往往产生严重的全身性毒副作用。因此,开发和研究高效低毒的新型抗癌药物已成为肝癌化疗药物研发的重点。我们前期研究发现结构全新的吲哚酰肼类化合物IHZ-1能够通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路以及激活ROS/JNK途径阻断肝癌细胞的周期进程并诱导细胞凋亡。活性氧（ROS）广泛参与细胞的各项生命活动,并在凋亡和自噬的过程中扮演重要角色。研究显示部分诱导癌细胞凋亡的化合物也能诱导癌细胞发生自噬。自噬的双效性体现在低水平的自噬可以作为细胞清除自身受损细胞器的自我保护机制,而超过阈值的高水平自噬能够诱发自噬性细胞死亡。因此,研究IHZ-1上调的ROS能否激活自噬以及自噬发生后对肝癌细胞凋亡的影响,一方面能够进一步阐明IHZ-1的抗肝癌作用机制,另一方面也为部分化疗药物激活自噬后疗效降低的问题提供解决策略。为了研究IHZ-1激活ROS是否诱导了自噬的发生,我们选取Hep G2和Huh7两株肝癌细胞展开深入研究。首先采用吖啶橙染色检测IHZ-1处理后肝癌细胞中酸性细胞器的数量,结果显示5μM和10μM IHZ-1处理后Hep G2细胞中酸性细胞器数量显著提高,但Huh7细胞中的酸性细胞器数量并没有明显的变化。由于酸性细胞器数量对于自噬发生只是一个间接检测指标,为了进一步研究IHZ-1是否诱导肝癌细胞发生自噬,我们采用Real Time-PCR技术检测自噬相关基因的转录水平,结果显示Beclin1、Atg5和ULK1的转录水平在IHZ-1处理后均有不同程度的提高。进一步的研究发现IHZ-1能够诱导转染了GFP-LC3-II质粒的肝癌细胞出现大量的GFP-LC3-II点状聚集,Western Blot的结果也进一步验证了IHZ-1的确上调了LC3-I向LC3-II的转化水平,然而自噬底物P62的表达并未降低,提示IHZ-1激活的自噬流可能并不完整。为了进一步验证IHZ-1是否诱导了完整的自噬流。采用自噬抑制剂氯喹（CQ）与IHZ-1联合处理肝癌细胞,结果显示与氯喹单独处理组相比,联合处理组P62水平下调,以上结果表明IHZ-1在两种肝癌细胞中均激活了自噬且自噬流是完整的。为了进一步研究IHZ-1所诱导的自噬对凋亡的影响,我们采用CQ和IHZ-1联合处理肝癌细胞检测其凋亡水平,结果显示与IHZ-1处理组相比,CQ和IHZ-1共处理组凋亡水平显著提高,说明抑制自噬能够提高IHZ-1对肝癌细胞的促凋亡作用。综上所述,IHZ-1能够增加ROS的累积进而激活肝癌细胞发生自噬,而抑制自噬能够增强IHZ-1对肝癌细胞的促凋亡作用,提示IHZ-1刺激活化的细胞自噬可能是肝癌细胞的自我保护机制。我国已经开始步入老龄化社会,逐渐增加的老年人口及快速老龄化进程导致一系列与年龄有关疾病患病率的增加,比如癌症。近年来研究显示,引起个体衰老的众多因素中,衰老细胞的累积是驱动衰老和衰老相关疾病发生、发展的重要因素。衰老细胞的累积及无法及时清除将造成组织微环境的破坏或将诱发衰老相关疾病,因此清除衰老细胞或许是治疗或缓解与年龄相关疾病的有效手段。在2011年首次报道了在小鼠体内清除衰老细胞可以延长寿命以及延缓衰老相关疾病。同时,进一步的研究发现将衰老细胞注射到年轻小鼠体内能够让正常小鼠的寿命缩短最多35%,而靶向清除这些衰老细胞不但能够延长小鼠寿命,同时可以延缓肿瘤的发生发展,维持组织和器官的功能。然而转基因模型和药物的局限性使清除衰老细胞的策略在生理条件下的应用受到限制。因此,开发靶向清除衰老细胞的抗衰老药物成为该领域的研究热点,其中基于衰老细胞具有高表达抗凋亡家族蛋白的特性,靶向衰老细胞的抗凋亡及促生存通路而开发出了选择性清除衰老细胞的化合物,被称作“senolytics”。意为:裂解衰老细胞的化合物。本课题前期发现中药黄芪中的单体成分环黄芪醇（cycloastragenol,CAG）具有选择性清除衰老细胞和抑制衰老相关分泌表型（senescence-associated secretory phenotype,SASP）的作用,其机制可能通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2而诱导衰老细胞凋亡,同时通过下调磷酸化的P38MAPK/NF-κB、JAK/STAT3蛋白抑制IL-6等SASP的表达,提示CAG可能具有“senolytic”的抗衰老活性。为了进一步研究CAG在体内的“senolytic”活性及抗衰老作用,采用颈背部皮下注射D-ga

关键词： IHZ-1 肝癌自噬环黄芪醇衰老 SASP

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环黄芪醇通过Nrf2/HO-1信号通路在t-BHP诱导的C2C12细胞损伤中的保护作用

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中国细胞生物学学报 2021年第11期43卷 2134-2141页

作者：刘利马蓓蓓李梦俊张晓荣高艳萍山西医科大学研究生学院太原030001 山西医科大学汾阳学院汾阳032200

该文旨在探讨环黄芪醇对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导小鼠C2C12成肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制研究。用不同浓度的环黄芪醇和100 μmol/L t-BHP处理C2C12细胞;采用CCK-8法检测细胞活力;EdU-488实验检测细胞增殖;DCFH-DA荧光探针法... 详细信息

该文旨在探讨环黄芪醇对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导小鼠C2C12成肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制研究。用不同浓度的环黄芪醇和100 μmol/L t-BHP处理C2C12细胞;采用CCK-8法检测细胞活力;EdU-488实验检测细胞增殖;DCFH-DA荧光探针法测定细胞的ROS水平;生化法检测细胞中MDA、SOD水平;Western blot检测PAX7、MYOD、Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达量;细胞免疫荧光检测Nrf2核转位情况。结果显示,与t-BHP组相比,环黄芪醇能提高C2C12细胞活力,降低胞内ROS和MDA含量,提高SOD活性;环黄芪醇亦可促进细胞增殖、分化相关蛋白PAX7、MYOD的表达。环黄芪醇可通过抑制Keap1蛋白表达,促进Nrf2与Keap1解偶联后的入核表达,上调下游关键分子HO-1蛋白的表达。si-Nrf2处理能够抑制Nrf2/HO-1信号通路,提高ROS的生成,抑制环黄芪醇对t-BHP诱导的C2C12氧化损伤的拮抗作用。这提示环黄芪醇可在t-BHP诱导的C2C12细胞氧化损伤中发挥保护作用,其机制可能与抑制Keap1的表达、促进Nrf2的核转位、上调HO-1的表达相关。

关键词：环黄芪醇 t-BHP C2C12细胞氧化应激 Nrf2/HO-1

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环黄芪醇对电压门控钠离子通道的作用研究

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2024年第5期 0164-0169页

作者：单智铭杨豪毅郭伟杰潘云萍蔡松深圳市人民医院广东深圳518020 深圳大学广东深圳518060 深圳市口腔医院广东深圳518022

探讨环黄芪醇治疗神经病理性疼痛的分子机制。方法将环黄芪醇或对照溶剂作用于原代培养的大鼠DRG神经元并进行全细胞膜片钳记录,以直接观察环黄芪醇对NaV通道功能的影响。包括比较环黄芪醇组与对照组电流-电压(IV)曲线、峰电流密度大... 详细信息

探讨环黄芪醇治疗神经病理性疼痛的分子机制。方法将环黄芪醇或对照溶剂作用于原代培养的大鼠DRG神经元并进行全细胞膜片钳记录,以直接观察环黄芪醇对NaV通道功能的影响。包括比较环黄芪醇组与对照组电流-电压(IV)曲线、峰电流密度大小、激活/失活曲线特征。通过电压方案筛选出TTX敏感型NaV电流,探究环黄芪醇对TTX敏感型和不敏感型NaV通道的选择性抑制作用。结果环黄芪醇显著抑制了DRG神经元NaV的电流密度,差异有统计学意义(P环黄芪醇并未改变DRG神经元NaV通道的激活、失活特性。环黄芪醇可能具有选择性抑制TTX不敏感型NaV通道的作用。结论环黄芪醇能够显著抑制DRG神经元NaV通道的电流密度,该发现能够阐明环黄芪醇镇痛作用的潜在分子机制,为环黄芪醇作为镇痛药物的临床转化提供理论依据。

关键词：环黄芪醇神经病理性疼痛电压门控钠离子通道全细胞膜片钳

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环黄芪醇治疗白癜风的作用及机制

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现代生物医学进展 2023年第1期23卷 35-40,46页

作者：吴惠林汪炜张少君葛睿俞文娟金蝉周芳邢倩倩梁艳西安医学院第二附属医院皮肤科陕西西安710038 西安交通大学第二附属医院皮肤病院陕西西安710014 西安交通大学第一附属医院皮肤性病科陕西西安710061

目的:探索环黄芪醇(Cycloastragenol,CAG)对白癜风的治疗作用及机制。方法:将正常人皮肤黑素细胞PIG1分组如下:对照组、H_(2)O_(2)组、10CAG组、50CAG组和100CAG组,分别使用不同浓度(10、50、100μM)的环黄芪醇和250μM的H_(2)O_(2)与P... 详细信息

目的:探索环黄芪醇(Cycloastragenol,CAG)对白癜风的治疗作用及机制。方法:将正常人皮肤黑素细胞PIG1分组如下:对照组、H_(2)O_(2)组、10CAG组、50CAG组和100CAG组,分别使用不同浓度(10、50、100μM)的环黄芪醇和250μM的H_(2)O_(2)与PIG1细胞共培养。通过CCK-8法测定细胞增殖,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,并测定细胞中的黑色素、SOD、CAT和MDA含量。将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和CAG组。通过每天涂抹50 mg 40%的莫诺苯宗乳膏建立白癜风小鼠模型,然后使用50 mg/kg的环黄芪醇治疗小鼠。通过HE染色和Masson-Fontana染色检测皮肤组织中的毛囊和黑色素含量。通过Western blotting检测MITF、TYR、TRP-1、TRP-2、Bax、Bcl-2、p-p38/p38的蛋白表达。结果:与H_(2)O_(2)组相比,50CAG组和100CAG组的细胞活力和黑色素含量均升高,凋亡率均降低,Bax蛋白表达水平均降低,而Bcl-2均升高,SOD和CAT水平均升高,而MDA水平均降低(P环黄芪醇在细胞水平和动物水平上均能促进黑色素合成,对白癜风具有较好的治疗作用,其机制可能与p38信号通路的激活有关。

关键词：环黄芪醇白癜风黑素细胞黑色素 p38信号通路

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