检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

环糊精酶基因在毕赤酵母中的组成型表达

福建农业学报 2017年第1期32卷 82-86页

作者：陈龙军陈济琛林新坚蔡海松福建省农业科学院土壤肥料研究所福建福州350003

为实现环糊精酶在毕赤酵母中的高效表达,以优化合成的环糊精酶基CGT2为基础,构建组成型表达质粒pGAPZαA-CGT2,运用电转化方法将目的基因整合进酵母染色体,构建环糊精酶酵母工程菌X33/pGAPZαA-CGT2,经摇瓶发酵120h后,CGT2活力达0.21 U... 详细信息

为实现环糊精酶在毕赤酵母中的高效表达,以优化合成的环糊精酶基CGT2为基础,构建组成型表达质粒pGAPZαA-CGT2,运用电转化方法将目的基因整合进酵母染色体,构建环糊精酶酵母工程菌X33/pGAPZαA-CGT2,经摇瓶发酵120h后,CGT2活力达0.21 U·mL^(-1);进一步对工程菌进行摇瓶发酵条件优化,确定其最优发酵条件为:pH6.5、28℃、200r·min^(-1)、每24h补加2.5%的甘油,120h后其胞外酶活力达到0.36U·mL^(-1),是优化前的1.7倍,实现了环糊精酶在毕赤酵母中的组成型表达。

关键词：环糊精酶毕赤酵母组成型表达发酵

Thermococcus sp.B1001来源环糊精酶重组表达、性能表征及发酵优化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Thermococcus sp.B1001来源环糊精酶重组表达、性能表征及发酵优化

作者：武权江南大学

学位级别：硕士

麦芽七糖(Maltoheptaose)是由7个葡萄糖基通过α-1,4糖苷键连接而成的直链麦芽寡糖,与麦芽三糖、四糖相比,具有更低渗透压,更高黏度,更好保湿作用,更强成膜性能。此外,麦芽七糖还具有包埋小分子功能,可广泛用于食品、医药、化妆品等领... 详细信息

麦芽七糖(Maltoheptaose)是由7个葡萄糖基通过α-1,4糖苷键连接而成的直链麦芽寡糖,与麦芽三糖、四糖相比,具有更低渗透压,更高黏度,更好保湿作用,更强成膜性能。此外,麦芽七糖还具有包埋小分子功能,可广泛用于食品、医药、化妆品等领域。酶法制备麦芽七糖具有反应条件温和、绿色环保等优点,逐渐成为研究热点。环糊精酶可水解β-环糊精中α-1,4糖苷键,使β-环糊精发生开环反应,从而特异性生成麦芽七糖。本研究通过序列比对分析和蛋白质同源建模,挖掘两种环糊精酶基因在大肠杆菌中进行重组表达及酶学性质研究,并对制备麦芽七糖性能进行表征和条件优化。然后,选取Thermococcus sp.B1001来源的环糊精酶基因tscd在枯草芽孢杆菌中重组表达、纯化和制备麦芽七糖。最后对重组枯草芽孢杆菌摇瓶优化和3-L罐发酵。主要研究结果如下:(1)环糊精酶的基因挖掘、重组表达及酶学性质研究:通过序列分析及不同特异性的环糊精酶特征分析,发现高特异性环糊精酶在序列结构上比一般环糊精酶多一段N’结构域,该区域与酶分子构成完整催化结合凹槽,不需要通过寡聚化就能结合催化环糊精水解,此外,N’结构域限制了淀粉等长链分子的结合,使得环糊精酶对环糊精的水解专一性提高。选取了具有N’结构域的Thermococcus sp.B1001和Thermococcus litoralis来源环糊精酶基因在大肠杆菌中克隆表达,热处理和镍柱纯化后纯酶比活分别为1208.04 U·mg和409.06 U·mg,最适温度均为为90℃,最适pH分别为5.5和6.0,在90℃下的半衰期分别为120 min和60 min,在pH 8.0和6.5条件下稳定性最好。在α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、可溶性淀粉和普鲁兰多糖5种底物中,两种酶TsCDase和TlCDase对环糊精都有很好的特异性,最适底物分别为β-环糊精和γ-环糊精,而对可溶性淀粉和普鲁兰多糖均没有水解活力。(2)TsCDase制备麦芽七糖性能表征和条件优化:通过加酶量,反应时间,初始pH,底物浓度等优化,确定最适酶转化条件:以80 g·Lβ-环糊精为底物,反应温度为90℃,反应pH为5.5-6.0,Ts CDase加酶量为25 U·g底物,反应时间为4 h时,麦芽七糖得率为81.19%和85.95%,七糖占产物麦芽寡糖的比例为95.24%和92.92%。(3)环糊精酶基因tscd在枯草芽孢杆菌中重组表达、纯化与应用:构建了重组菌*** WS9/pUB110-tscd,摇瓶发酵24 h后测得胞内酶活为5.9 U·m L,SDS-PAGE结果显示在大于66 kDa处有对应条带,表明来源于环糊精酶基因tscd在枯草芽孢杆菌中成功表达。环糊精酶纯化后的比活为637.95 U·mg,低于大肠杆菌表达的环糊精酶。以80 g·Lβ-环糊精,反应温度为90℃,反应pH为5.5,加酶量为25 U·g底物,反应4 h时,麦芽七糖得率为82.33%,七糖占产物麦芽寡糖比例为94.55%,与大肠杆菌的酶转化结果基本一致。(4)重组枯草芽孢杆菌发酵条件优化:摇瓶优化后最优培养基为安琪玉米浆10 g·L,酵母浸膏10 g·L,甘油5 g·L,Mg1 mmol·L,KHPO·3HO 16.43 g·L,KHPO 2.31g·L,该条件下重组酶活力达到13.93 U·mL。以摇瓶优化结果为基础,重组菌3-L发酵罐产酶,当补料培养基中的碳源为400 g·L葡萄糖,氮源为50 g·L安琪玉米浆和50g·L酵母浸膏,发酵70 h后,酶活达到最高,即总酶活为481.75 U·m L,胞内酶活为390.83 U·mL,胞外酶活为90.92 U·m L,约为摇瓶优化结果的34.58倍。

关键词：环糊精酶麦芽七糖枯草芽孢杆菌发酵优化

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

类芽孢杆菌A11环糊精酶的纯化和表征

中国医药工业杂志 2005年第2期36卷 83-83页

作者：龚家玮

嗜热菌Thermus ***-1的分离和淀粉酶基因的克隆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2004年第3期20卷 434-436页

作者：熊鹏钧文建军国家海洋局第三海洋研究所海洋生物工程重点实验室厦门361005

从西藏热泉水样分离得到一株嗜热菌 (YBJ 1) ,其 16SrDNA(15 11bp)序列与栖热菌 (ThermusscotoductusITI 2 5 2T)的同源性为 98%。通过PCR技术将Thermussp .YBJ 1的淀粉酶基因 (amyT)全长开放阅读框克隆到T载体。分析表明 ,amyT的ORF全... 详细信息

从西藏热泉水样分离得到一株嗜热菌 (YBJ 1) ,其 16SrDNA(15 11bp)序列与栖热菌 (ThermusscotoductusITI 2 5 2T)的同源性为 98%。通过PCR技术将Thermussp .YBJ 1的淀粉酶基因 (amyT)全长开放阅读框克隆到T载体。分析表明 ,amyT的ORF全长为 176 7bp ,编码 5 88个氨基酸。推导的氨基酸序列与嗜热脂肪芽孢杆菌的阿尔法环糊精酶 (Bacillusstearothermophilusalpha cyclodextrinase)和栖热菌Thermussp .IM6 5 0 1的麦芽糖淀粉酶 (Thermussp .IM6 5 0 1maltogenicamylase)分别有 99%和 96 %的同源性 ,与嗜热脂肪芽孢杆菌的新普鲁兰酶 (neopullulanase)的同源性为81%。

关键词：嗜热菌麦芽糖淀粉酶环糊精酶新普鲁兰酶

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

嗜热菌——工业用酶的新来源

中国生物工程杂志 2003年第7期23卷 67-71页

作者：李淑彬陆广欣林如妹蔡文德邬进杰华南师范大学生命科学学院广州510631

综述了嗜热菌和极端嗜热菌产生的热稳定性的淀粉酶、纤维素酶、环糊精酶、木聚糖酶、几丁质酶、葡萄糖异构酶、蛋白酶等的研究进展及其在食品、化工、环保等方面的应用前景。

关键词：嗜热菌工业用酶淀粉酶纤维素酶环糊精酶