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环状RNA CDR1as促进小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化和成血管相关基因表达

口腔疾病防治 2022年第6期30卷 390-397页

作者：杨玮哲韩祥祯郑美洁周琦琪何惠宇新疆医科大学第一附属医院(附属口腔医院)口腔修复科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐830054 新疆维吾尔自治区口腔医学研究所新疆维吾尔自治区乌鲁木齐830011

目的探讨环状rna小脑变性相关蛋白1的反义转录物(antisense to the cerebellar degeneration-related protein 1 transcript,cdr1as)在Balb/C小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中过表达与低表达后对其成骨和成血管相关基因的影响。方法体外培养及鉴定BMSCs,将含过表达与沉默circrna cdr1as基因的慢病毒(lentiviruses,LV)载体及对照组慢病毒分别转染至小鼠BMSCs并筛选稳定的细胞株,分为circrna cdr1as过表达组、过表达对照组、circrna cdr1as低表达组和低表达对照组。各组成骨诱导14、21 d后分别进行茜素红染色和碱性磷酸酶染色;qRT-PCR检测目的基因circrna cdr1as、成骨分化特异标志物碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Runt相关基因2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨桥素(osteopontin,OPN)、锌指结构转录因子(osterix,OSX)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen-I,COL-1),以及成血管特异标志物血管内皮生长因子(vascular endothelial grown factor,VEGF)、血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)的mrna表达水平。结果茜素红和ALP染色均显示:过表达实验组钙沉淀和ALP染色区域多于过表达对照组;而低表达实验组钙沉淀和ALP染色区域少于低表达对照组,随着成骨诱导天数的增加,各组的钙沉淀和ALP染色面积也增大。qRT-PCR结果显示:过表达实验组BMSCs中circrna cdr1as、ALP、RUNX2、OCN、OPN、OSX、COL-1、VEGF和Ang-1的mrna表达水平显著升高(Prna cdr1as、ALP、RUNX2、OCN、OPN、OSX、COL-1、VEGF和Ang-1的m rna表达水平显著降低(Prna cdr1as基因可促进BMSCs的成骨分化及血管生成的能力;低表达circrna cdr1as基因可抑制BMSCs的成骨分化及血管生成的能力。

关键词：骨环状RNA CDR1as 基因沉默小鼠骨髓间充质干细胞 Runt相关基因2 Ⅰ型胶原蛋白血管内皮生长因子成骨分化骨组织工程

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环状RNA CDR1as靶向抑制微小rna-135a-5p调控人肺动脉平滑肌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

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中华实验外科杂志 2023年第4期40卷 686-691页

作者：张岩伟魏志潘郑家永胡小松付庆林河南省人民医院阜外华中心血管病医院郑州大学人民医院心血管外科郑州451464 郑州大学第一附属医院心血管外二科郑州450052

目的探讨环状rna小脑变性相关蛋白1反义转录物(circcdr1as)对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法体外培养HPASMC,缺氧诱导后干扰circcdr1as表达、抑制或过表达微小rna-135a-5p(miR-135a-5p)以及过表达Janu... 详细信息

目的探讨环状rna小脑变性相关蛋白1反义转录物(circcdr1as)对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法体外培养HPASMC,缺氧诱导后干扰circcdr1as表达、抑制或过表达微小rna-135a-5p(miR-135a-5p)以及过表达Janus激酶2(JAK2)。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中circcdr1as、miR-135a-5p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中JAK2、信号转导和转录激活因子3(STAT3)蛋白表达。组间差异比较采用t检验。结果缺氧组circcdr1as表达水平和磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2、磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3比值高于常氧组(1.98±0.07比1.01±0.05、0.62±0.06比0.18±0.04、0.56±0.05比0.15±0.03),miR-135a-5p表达水平低于常氧组(0.52±0.05比1.00±0.04),差异有统计学意义(t=27.620、14.946、17.223、18.362,Pcdr1as组circcdr1as表达水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值和细胞活力、迁移细胞数、侵袭细胞数低于si-NC组(0.41±0.05比1.02±0.06、0.41±0.05比0.61±0.05、0.38±0.03比0.54±0.04、0.42±0.04比0.73±0.06、75.64±17.95比145.38±26.42、68.96±16.82比121.05±24.80),miR-135a-5p表达水平高于si-NC组(1.73±0.06比1.03±0.05),差异有统计学意义(t=19.131、6.928、7.838、10.530、5.348、4.258、21.954,Pcdr1as通过靶向抑制miR-135a-5p表达激活JAK2/STAT3信号通路,促进缺氧诱导的HPASMC增殖、迁移和侵袭。

关键词：环状RNA CDR1as 微小rna-135a-5p Janus激酶2 信号转导和转录激活因子3 人肺动脉平滑肌细胞

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环状RNA CDR1as对小鼠骨髓间充质干细胞成骨及成血管性能的影响研究

环状RNA CDR1as对小鼠骨髓间充质干细胞成骨及成血管性能的影响研...

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作者：杨玮哲新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:通过使用过表达与沉默后的环状rna小脑变性相关蛋白1的反义转录物(circ rna cdr1as)对Balb/C小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行干预,分析成骨分化和血管化相关因子的表达变化,探讨其在体外实验中成骨及成血管影响机制。方法:Balb/C... 详细信息

目的:通过使用过表达与沉默后的环状rna小脑变性相关蛋白1的反义转录物(circ rna cdr1as)对Balb/C小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行干预,分析成骨分化和血管化相关因子的表达变化,探讨其在体外实验中成骨及成血管影响机制。方法:Balb/C小鼠体外获取BMSCs,验证BMSCs表型抗原及多向分化能力,预实验确定慢病毒(LV)转染BMSCs最佳滴度,分别将适宜滴度的过表达与低表达的circ rna cdr1as慢病毒(LV)转染至小鼠骨髓间充质干细胞并筛选稳定的细胞株。实验分组:将细胞分为circ rna cdr1as过表达组、过表达对照组、circ rna cdr1as低表达组和低表达对照组。通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测慢病毒转染效率;CCK-8法检验慢病毒感染BMSCs后的细胞增殖活性。4组细胞成骨诱导14d、21d,分别进行茜素红和碱性磷酸酶染色;RT-PCR检测目的基因circ rna cdr1as、成骨分化及成血管特异标志物ALP、Runx2、OCN、OPN、OSX、COL-1、VEGF、Ang-1的m rna表达水平。结果:(1)流式细胞术鉴定小鼠BMSCs表面标原CD29阳性表达(93.1%),CD31阳性表达(2.4%);(2)流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测显示,慢病毒转染后绿色荧光蛋白(EGFP)表达无明显差异;(3)CCK-8结果显示,过表达对照组细胞增殖活性小于circ rna cdr1as过表达组,而circ rna cdr1as低表达实验组细胞增殖活性小于其对照组;(4)茜素红碱性和磷酸酶染色显示,过表达实验组钙盐沉积区域大于过表达对照组与低表达实验组,随着成骨诱导天数的增加,各组钙盐沉积区域也增大。(5)RT-PCR结果显示:过表达实验组BMSCs中circ rna cdr1as、ALP、Runx2、OCN、OPN、OSX、COL-1、VEGF和Ang-1的m rna表达水平显著升高(Prna cdr1as、ALP、Runx2、OCN、OPN、OSX、COL-1、VEGF和Ang-1的m rna表达水平显著降低(Prna cdr1as基因可调控BMSCs的成骨分化及血管化的能力。

关键词：环状RNA CDR1as 小鼠骨髓间充质干细胞 Runt相关基因2 血管内皮生长因子成骨分化

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急性心肌梗死中环状RNA CDR1as位点筛选的研究

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大医生 2024年第2期9卷 46-49页

作者：唐赛赛孙秀梅王海凤许梦婷林浩李文勇山东中医药高等专科学校山东烟台264199 滨州医学院烟台附属医院检验科山东烟台264100 滨州医学院烟台附属医院肿瘤科山东烟台264100

目的探讨PubMed筛选文献、千人基金组计划(1 000 genomes project)、Haploview软件联合应用于筛选与心肌梗死相关的单核苷酸多态性的文献的可行性。方法使用PubMed网站检索并确定心血管疾病相关基因,1 000 genomes project网站检索中... 详细信息

目的探讨PubMed筛选文献、千人基金组计划(1 000 genomes project)、Haploview软件联合应用于筛选与心肌梗死相关的单核苷酸多态性的文献的可行性。方法使用PubMed网站检索并确定心血管疾病相关基因,1 000 genomes project网站检索中国汉族人群cdr1as基因的单核苷酸多态性(SNP)数据。应用Haploview软件以最小等位基因频率(MAF)>0.05、r2> 0.8作为筛选标签SNPs指标。结果 cdr1as基因41个SNPs位点筛选出3个检测位点,分别为rs12688274、rs5907638、rs76284232。结论通过PubMed、千人基因组计划和Haploview联合使用可实现标签SNPs筛选,值得进一步探究。

关键词：环状RNA CDR1as 心肌梗死位点筛选

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