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RNA干扰环指蛋白2基因抑制胰腺癌细胞系PANC-1增殖和迁移

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基础医学与临床 2018年第1期38卷 74-79页

作者：吴银芳孙晓东郑宇黄东胜浙江中医药大学第二临床医学院浙江杭州310053 杭州医学院附属浙江省人民医院肝胆胰外科浙江杭州310014

目的研究沉默环指蛋白2(RNF2)基因对人胰腺癌细胞系PANC-1增殖、迁移、周期和凋亡的影响及可能机制。方法用siRNA-RNF2转染PANC-1细胞沉默RNF2表达,同时设立转染无义序列(siRNA-NC)的空转染组及不进行任何处理的空白对照组(mock)。荧光... 详细信息

目的研究沉默环指蛋白2(RNF2)基因对人胰腺癌细胞系PANC-1增殖、迁移、周期和凋亡的影响及可能机制。方法用siRNA-RNF2转染PANC-1细胞沉默RNF2表达,同时设立转染无义序列(siRNA-NC)的空转染组及不进行任何处理的空白对照组(mock)。荧光定量PCR检测RNF2 mRNA表达;Western blot检测RNF2和p53表达;MTS实验和划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力;流式细胞计量术检测细胞转染率、凋亡率和细胞周期。结果相比正常胰腺导管上皮细胞,RNF2在胰腺癌细胞系中高表达(P2的PANC-1细胞与阴性对照组比较,RNF2 mRNA及蛋白表达下调;细胞增殖被抑制(P2/M期细胞比例则降低(P2显著下调PANC-1细胞中p53蛋白的表达。结论 siRNA-RNF2特异性下调胰腺癌细胞RNF2表达,显著抑制细胞增殖和迁移,结果提示RNF2可能成为胰腺癌基因治疗的一个新靶点。

关键词：环指蛋白2 胰腺癌生长抑制 p53

焦炉工多环芳烃代谢物与DNA氧化损伤及环指蛋白2基因表达关系

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中国职业医学 2018年第1期45卷 7-11页

作者：刘艳丽张红杰潘宝龙张慧涛牛莹莹傅晔杨瑾山西医科大学公共卫生学院山西太原030001

目的探讨焦炉工多环芳烃(PAH)代谢物与DNA氧化损伤及周围血环指蛋白2(RING2)基因表达的关系。方法采用判断抽样方法,选择某焦化厂497名焦炉工为接触组,以同厂175名水处理工人为对照组。采用高效液相色谱法检测2组人群尿中1-羟基芘、2-... 详细信息

目的探讨焦炉工多环芳烃(PAH)代谢物与DNA氧化损伤及周围血环指蛋白2(RING2)基因表达的关系。方法采用判断抽样方法,选择某焦化厂497名焦炉工为接触组,以同厂175名水处理工人为对照组。采用高效液相色谱法检测2组人群尿中1-羟基芘、2-羟基萘、2-羟基芴、9-羟基菲和8-羟基脱氧鸟苷水平,采用逆转录聚合酶链式反应法测定其全血中RING2基因的表达量。结果接触组人群1-羟基芘、2-羟基萘、2-羟基芴、9-羟基菲水平和RING2 mRNA相对表达水平均高于对照组(P2-羟基萘、2-羟基芴和9-羟基菲等因素后,1-羟基芘水平越高,RING2高表达的风险越高(P2高表达者8-OHd G浓度均高于RING2低表达者(P2高表达的风险增高,DNA氧化损伤程度加重。

关键词：多环芳烃代谢物 DNA氧化损伤 1-羟基芘 8-羟基脱氧鸟苷环指蛋白2

食管癌组织中FOXM1和RNF2表达与临床病理参数及预后的相关性分析

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标记免疫分析与临床 2024年第6期31卷 1068-1073,1124页

作者：贾亚松彭小乐姚文杰葛广林北京市平谷区医院心胸外科北京101200

目的探讨食管癌组织中叉头盒蛋白M1(FOXM1)和环指蛋白2(RNF2)表达与临床病理参数及预后的相关性。方法选取我院2018年1月至2019年12月期间收治的120例食管癌患者作为研究对象,收集术中切除的食管癌组织标本及癌旁组织标本。另选取45例... 详细信息

目的探讨食管癌组织中叉头盒蛋白M1(FOXM1)和环指蛋白2(RNF2)表达与临床病理参数及预后的相关性。方法选取我院2018年1月至2019年12月期间收治的120例食管癌患者作为研究对象,收集术中切除的食管癌组织标本及癌旁组织标本。另选取45例食管癌患者并收集术中切除的食管癌组织标本作为验证组。检测食管癌组织及癌旁组织中FOXM1和RNF2的表达水平,分析二者相关性及其与患者预后状态的关系,并探讨影响食管癌患者预后状态的影响因素。结果食管癌组织中FOXM1和RNF2表达水平均高于癌旁组织(P2表达水平呈正相关(r=0.625,P2高表达组TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、发生淋巴结转移、浸润深度为深层的食管癌患者所占比例高于FOXM1低表达组及RNF2低表达组(P2低表达的食管癌患者其3年生存率(47.45%、48.33%)明显高于FOXM1高表达和RNF2高表达者(27.87%、26.67%)( χ^(2)=4.302、6.009,P=0.038、0.014);TNM分期、淋巴结转移、浸润深度、FOXM1及RNF2是食管癌患者死亡的危险因素(P2高表达组发生淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、浸润深度为深层的患者所占比例分别高于FOXM1低表达组和RNF2低表达组(P2低表达组(P2在食管癌患者癌组织中的表达水平与其临床病理特征及3年生存率有关。

关键词：食管癌叉头盒蛋白M1 环指蛋白2 临床病理特征预后

应用酵母双杂交系统筛选细胞珠蛋白相互作用蛋白

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应用酵母双杂交系统筛选细胞珠蛋白相互作用蛋白

作者：李昕南方医科大学

学位级别：硕士

细胞珠蛋白(CYGB)是日本科学家在十几年前对纤维化的肝脏进行蛋白质组学分析时首次发现的一种球蛋白,最早被命名为星状激活蛋白(Stellate Activating Protein)。与其他球蛋白家族成员一样,CYGB具有与呼吸和压力相关的一些活性。CYGB参... 详细信息

细胞珠蛋白(CYGB)是日本科学家在十几年前对纤维化的肝脏进行蛋白质组学分析时首次发现的一种球蛋白,最早被命名为星状激活蛋白(Stellate Activating Protein)。与其他球蛋白家族成员一样,CYGB具有与呼吸和压力相关的一些活性。CYGB参与氧的贮存、运输和传感,具有末端氧化酶和一氧化氮双加氧酶活性,还具有清除活性氧(ROS)的功能。据报道,CYGB还具有良好的细胞保护作用,它可以保护细胞使其免遭ROS/RNS的损伤,在低氧和氧化应激的不良环境中有效地保护细胞,抑制DNA损伤。CYGB与多种疾病的发生发展相关,如肝脏、肾脏、胰腺等组织器官的纤维化,青光眼,胃管反流以及一些神经退行性疾病。近年来,肿瘤相关的CYGB研究成为又一研究热点,CYGB很可能像E-钙黏蛋白一样具有两面性,在一些癌症中发挥抑癌基因的作用,在一些癌症中又具有原癌基因的特性。CYGB具有多种生物学功能,本课题组的前期研究结果表明重组人源细胞珠蛋白可以有效逆转大鼠肝纤维化和动脉粥样硬化,CYGB与癌症的关联性也是当前的研究热点。但是CYGB的作用靶点还未知,其作用的分子机制、参与的信号分子通路都不甚明了。因此,本研究通过酵母双杂交系统筛选Mate & PlateTM Library-Universal Human (Normalized)人源标准化cDNA文库,寻找与CYGB相互作用的蛋白,为进一步研究CYGB的功能机制奠定基础。本研究通过酵母双杂交筛选出17个与CYGB相互作用的蛋白,环指蛋白2(RNF2)是其中之一。我们通过酵母回复性杂交实验和免疫共沉淀实验进一步验证CYGB与RNF2之间的相互作用。环指蛋白2(RNF2)属于多梳家族,是多梳抑制复合物1(PRC1)中的一员。RNF2可以介导组蛋白H2A的泛素化,因此RNF2在多梳结构介导的基因抑制中发挥重要作用。RNF2作为PRC1家族的一员,在胃癌、结肠癌、淋巴癌等多种癌症中高表达。RNF2具有原癌基因的活性,敲除RNF2的HeLa细胞形态会发生改变,细胞增殖也会受到抑制。RNF2是一种E3连接酶,与P53具有直接的相互作用,在人结肠癌HCT1 16细胞系中它可以以p53为靶点通过蛋白酶体途径,促进p53的降解,从而影响P53下游基因的表达水平,以调节细胞周期和细胞凋亡。据此,我们推测CYGB与RNF2之间的相互作用很可能与肿瘤的发生发展具有一定的关联性。本研究共分为四章：第一章是CYGB酵母诱饵表达载体的构建、表达与自毒性、自激活检测;第二章应用酵母双杂交系统在Mate & PlateTM Library-Universal Human (Normalized)人源标准化cDNA文库中筛选细胞珠蛋白的相互作用蛋白;第三章是通过酵母回复性杂交实验和免疫共沉淀实验验证CYGB与RNF2的相互作用;第四章过表达CYGB诱导人结肠癌HCT116细胞中RNF2及其相关基因的mRNA水平变化的检测。第一章,以pET28a-CYGB质粒为模板通过PCR扩增得到CYGB编码序列,将其酶切后连接至pGBKT7酵母表达质粒,酶切、PCR与测序鉴定其阳性克隆;随后将重组质粒pGBKT7-CYGB转化入Y2H Gold酵母菌株,通过Western-blot检测BD-CYGB-MYC融合蛋白在Y2H Gold酵母菌株中的表达;分别将pGBKT7-CYGB质粒和pGBKT7质粒小规模转化入酵母感受态细胞,转化产物分别涂布于SD/-Trp平板,以检测诱饵蛋白是否会对Y2H Gold酵母菌株产生自毒性;同时将pGBKT7-CYGB转化产物涂布于SD/-Trp/X-α-Gal和SD/-Trp/X-α-Gal/AbA平板,以检测诱饵蛋白是否会自激活报告基因。实验结果显示,将CYGB基因克隆到了pGBKT7酵母表达质粒,经PCR、双酶切和测序鉴定,成功构建了pGBKT7-CYGB重组表达载体：用抗MYC抗体对表达产物进行Western-blot鉴定,转化空载体pGBKT7的Y2H Gold酵母菌株表达大小为20kDa左右的BD-MYC载体蛋白,转化重组质粒pGBKT7-CYGB的Y2H Gold酵母菌株表达的蛋白分子量大小为42kDa左右,CYGB的理论分子量为21kDa左右,与对照相比,符合预期。说明pGBKT7-CYGB重组质粒在Y2H Gold酵母菌株中成功表达BD-CYGB-MYC融合蛋白;在SD/-Trp平板上,酵母转化子Y2HGold-pGBKT7-CYGB和Y2H Gold-pGBKT7生长速度和菌落大小及数目基本没有差别,证明CYGB诱饵蛋白对Y2H Gold酵母细胞无毒性作用;在SD/-Trp/X-α-Gal平板上含诱饵质粒的酵母菌落未变蓝,SD/-Trp/X-α-Q-Gal/AbA平板上无菌落长出,证明该诱饵质粒无自激活活性。实验结果表明,pGBKT7-CYGB酵母诱饵表达载体构建成功,可以用于

关键词：细胞珠蛋白相互作用蛋白酵母双杂交系统环指蛋白2 免疫共沉淀 qPCR

白头翁皂苷A通过调控miR-24-3p/RNF2的表达影响乳腺癌细胞增殖及放射敏感性

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中国病理生理杂志 2020年第5期36卷 865-870页

作者：邹晓静郝燕燕胡一迪谢燊侠白薇温州市中医院检验科浙江温州325000 温州市中医院甲乳外科浙江温州325000

目的:探讨白头翁皂苷A对乳腺癌细胞增殖及放射敏感性的影响及其作用机制。方法:用浓度为0、5、10、15和20 mg/L的白头翁皂苷A作用于人乳腺癌MCF-7细胞,并转染微小RNA-24-3p(miR-24-3p)过表达载体或抑制表达载体。用MTT法检测细胞活力的... 详细信息

目的:探讨白头翁皂苷A对乳腺癌细胞增殖及放射敏感性的影响及其作用机制。方法:用浓度为0、5、10、15和20 mg/L的白头翁皂苷A作用于人乳腺癌MCF-7细胞,并转染微小RNA-24-3p(miR-24-3p)过表达载体或抑制表达载体。用MTT法检测细胞活力的变化;集落形成实验检测细胞放射敏感性;RT-qPCR分析miR-24-3p和环指蛋白2(RNF2)的mRNA表达水平;Western blot检测RNF2的蛋白表达;萤光素酶报告基因实验检测miR-24-3p和RNF2的靶向关系。结果:与对照组(0 mg/L)相比,5、10、15和20 mg/L的白头翁皂苷A组MCF-7细胞的增殖抑制率显著升高(P2表达水平显著降低(P24-3p靶向负调控RNF2。白头翁皂苷A和miR-24-3p同时处理的MCF-7细胞经射线照射后,存活曲线下移;抑制miR-24-3p表达可逆转白头翁皂苷A对MCF-7细胞的增殖抑制和放射增敏作用。结论:白头翁皂苷A可能通过miR-24-3p/RNF2影响乳腺癌细胞的增殖和放射敏感性。

关键词：白头翁皂苷A 微小RNA-24-3p 环指蛋白2 乳腺癌放射敏感性

结直肠癌组织中环指蛋白2的表达及其临床意义

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中华生物医学工程杂志 2020年第1期26卷 26-30页

作者：贾楠宋哲陈宝胜程进生沧州市中心医院普外二科河北沧州061001 沧州市献县人民医院河北沧州062250

目的检测结直肠癌组织中环指蛋白2(RNF2)的表达,探讨其与临床病理特征的关系。方法收集2017年5月至2019年5月沧州市中心医院行手术切除并经病理证实的84例结直肠癌患者的肿瘤组织和癌旁组织。实时定量PCR检测其中25对肿瘤组织及癌旁组... 详细信息

目的检测结直肠癌组织中环指蛋白2(RNF2)的表达,探讨其与临床病理特征的关系。方法收集2017年5月至2019年5月沧州市中心医院行手术切除并经病理证实的84例结直肠癌患者的肿瘤组织和癌旁组织。实时定量PCR检测其中25对肿瘤组织及癌旁组织样本RNF2 mRNA的表达;免疫组化法检测所有样本中RNF2蛋白表达,并分析RNF2表达与临床病理特征的关系。结果免疫组化显示RNF2主要表达于结直肠癌组织细胞核内,其在结直肠癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁组织(P2表达与结直肠癌患者肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移有关(均P0.05)。实时定量PCR显示结直肠癌组织RNF2 mRNA相对表达量显著高于癌旁组织(P2在结直肠癌组织中高表达,可能参与结直肠癌的发生发展。

关键词：结直肠癌环指蛋白2 免疫组织化学实时定量PCR

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乳腺癌中RNF2的表达及其临床意义

临床与实验病理学杂志 2017年第3期33卷 237-240页

作者：李庆吴正升沈玉君冯利杰沈玉先安徽医科大学病理学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院生物药物研究所合肥230032

目的观察RNF2在乳腺病变组织及乳腺上皮细胞系中的表达,探讨其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。方法运用免疫组化En Vision两步法检测21例乳腺良性病变组织和112例乳腺癌组织中RNF2蛋白的表达,分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。... 详细信息

目的观察RNF2在乳腺病变组织及乳腺上皮细胞系中的表达,探讨其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。方法运用免疫组化En Vision两步法检测21例乳腺良性病变组织和112例乳腺癌组织中RNF2蛋白的表达,分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。应用qRT-PCR法检测2株乳腺正常上皮细胞系和5株乳腺癌细胞系中RNF2基因的表达。结果乳腺癌组织中RNF2蛋白表达水平与乳腺良性病变组织相比显著升高(P2表达情况无显著相关(P均>0.05);乳腺癌细胞系RNF2 mRNA水平亦高于乳腺良性上皮细胞系(P2在乳腺癌组织中高表达,可作为乳腺癌治疗的潜在靶点。

关键词：乳腺肿瘤环指蛋白2 免疫组织化学 qRT-PCR

RNF2基因在喉癌组织及细胞中的表达情况研究

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医学综述 2018年第14期24卷 2886-2889,2895页

作者：刘建敏曹蜀炜张萌张华勇德阳市人民医院耳鼻咽喉头颈外科四川德阳618000 中山大学肿瘤防治中心头颈外科广州510086

目的研究环指蛋白2(RNF2)基因在喉癌组织及细胞中的表达情况。方法收集3对临床喉癌及癌旁的组织标本,分别应用免疫组织化学和荧光实时定量聚合酶链反应法分别检测RNF2基因在喉癌及癌旁组织中的表达情况。应用小分子干扰RNA(siRNA)干扰... 详细信息

目的研究环指蛋白2(RNF2)基因在喉癌组织及细胞中的表达情况。方法收集3对临床喉癌及癌旁的组织标本,分别应用免疫组织化学和荧光实时定量聚合酶链反应法分别检测RNF2基因在喉癌及癌旁组织中的表达情况。应用小分子干扰RNA(siRNA)干扰技术敲除RNF2基因表达后,用细胞克隆实验研究敲除RNF2表达对喉癌细胞Hep-2的细胞克隆形成能力的影响。结果免疫组织化学结果显示,RNF2在喉癌组织中的表达呈强阳性,而在癌旁组织中呈阴性或弱阳性;Western blot实验结果显示,喉癌组织中RNF2蛋白含量显著高于癌旁组织;同时,荧光实时定量聚合酶链反应法结果显示喉癌组织RNF2 mRNA水平显著高于癌旁组织(P2表达后,喉癌细胞的克隆数目明显减少(P2在喉癌组织表达升高,其高表达可促进喉癌细胞增殖。

关键词：喉癌环指蛋白2 增殖

RNF2基因对胰腺癌PANC-1细胞增殖和迁移的影响

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RNF2基因对胰腺癌PANC-1细胞增殖和迁移的影响