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金属离子对植物乳杆菌RS66CD生物膜形成及环境耐受性的影响

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食品与发酵工业 2019年第21期45卷 46-52页

作者：赵佳伟敖晓琳蔡义民刘书亮陈安均万胡徐飞王帆何金阳四川农业大学食品学院四川雅安625014 日本国际农林水产研究中心日本茨城305-8686 四川李记乐宝食品有限公司四川眉山620030

筛选出对植物乳杆菌RS66CD生物膜形成促进效果最显著的金属离子,确定生物膜形成最适培养条件,探究生物膜形成后对温度、pH、盐浓度和胆盐的耐受性。在培养基里添加Na+、Mn^2+、Ca^2+、Mg^2+和Fe^3+5种金属离子后,利用96孔法及扫描电镜... 详细信息

筛选出对植物乳杆菌RS66CD生物膜形成促进效果最显著的金属离子,确定生物膜形成最适培养条件,探究生物膜形成后对温度、pH、盐浓度和胆盐的耐受性。在培养基里添加Na+、Mn^2+、Ca^2+、Mg^2+和Fe^3+5种金属离子后,利用96孔法及扫描电镜测定生物膜形成量,选出最佳金属离子。对其添加量、培养温度和培养时间下生物膜形成的规律进行研究,确定了生物膜形成的最适条件。结果表明,Na+对生物膜形成具有明显促进效果。在NaCl质量浓度为53 g/L,40℃培养24 h时,生物膜的形成量最大。形成生物膜后的菌株对温度、pH、盐浓度和胆盐的耐受性均有明显提升。Na+可以促进植物乳杆菌生物膜的形成,在工业生产中,可以通过形成生物膜,使微生物在不良环境中保持活性。

关键词：生物膜金属离子植物乳杆菌环境耐受性

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饲用鸡源芽孢杆菌的鉴定及环境耐受性研究

中国家禽 2014年第6期36卷 18-21,31页

作者：杨家军许月英章薇陈胜安徽省农业科学院畜牧兽医研究所安徽合肥230031

为开发饲用芽孢杆菌用于鸡的生产,从放养的淮南麻黄鸡盲肠内分离了2个菌株,用酵母浸出粉胨葡萄糖培养基分离并纯化,采用常规生化试验、16 S rDNA鉴定为芽孢杆菌。模拟胃肠道内环境研究其耐盐、耐人工胃液和耐胆盐能力显示,这2株芽孢杆... 详细信息

为开发饲用芽孢杆菌用于鸡的生产,从放养的淮南麻黄鸡盲肠内分离了2个菌株,用酵母浸出粉胨葡萄糖培养基分离并纯化,采用常规生化试验、16 S rDNA鉴定为芽孢杆菌。模拟胃肠道内环境研究其耐盐、耐人工胃液和耐胆盐能力显示,这2株芽孢杆菌具有较好的耐盐、耐人工胃液和胆盐能力,可耐过机体胃肠道内环境。耐热性研究表明,这2株芽孢杆菌均能在85℃条件下生长。结果表明所分离的芽孢杆菌可以在肠道内生存,具有耐热性,有利于工业化生产。

关键词：芽孢杆菌分离鉴定环境耐受性

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柔性薄膜太阳电池封装及环境耐受性研究

电源技术 2016年第3期40卷 600-603页

作者：曹娜娜陈萌炯叶晓军上海空间电源研究所上海200245

封装材料的选择和封装工艺的确定对柔性薄膜太阳电池在空间的应用非常重要。封装材料采用改性的硅氧烷系列胶水和高透过率含氟薄膜材料,封装工艺采用涂覆方式和覆膜方式相结合,并利用封装设备有效控制涂层厚度及其均匀性。对封装后的柔... 详细信息

封装材料的选择和封装工艺的确定对柔性薄膜太阳电池在空间的应用非常重要。封装材料采用改性的硅氧烷系列胶水和高透过率含氟薄膜材料,封装工艺采用涂覆方式和覆膜方式相结合,并利用封装设备有效控制涂层厚度及其均匀性。对封装后的柔性薄膜太阳电池进行一系列环境模拟实验,发现实验后太阳电池性能衰减较小,具有良好的环境耐受性。

关键词：封装材料封装工艺环境耐受性

单核细胞增生李斯特菌InlC基因缺失株的构建及其毒力和环境耐受性的研究

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单核细胞增生李斯特菌InlC基因缺失株的构建及其毒力和环境耐受性...

作者：袁兆尤石河子大学

学位级别：硕士

单核细胞增生李斯特菌(listeria monocytogenes,LM)是一种常见的食源性致病菌,可以引起人类的李斯特菌病。此菌是一种兼性胞内寄生的革兰氏阳性菌,可以引起孕畜(妇)流产和脑膜炎等疾病,是对人畜具有较大危害的人兽共患病病原。LM是短小... 详细信息

单核细胞增生李斯特菌(listeria monocytogenes,LM)是一种常见的食源性致病菌,可以引起人类的李斯特菌病。此菌是一种兼性胞内寄生的革兰氏阳性菌,可以引起孕畜(妇)流产和脑膜炎等疾病,是对人畜具有较大危害的人兽共患病病原。LM是短小的无芽胞杆菌,常呈V字形或成对排列,属微需氧菌,对营养要求不高,在普通培养基上能生长,耐碱、耐盐、耐热。该菌生长温度一般为30-38℃,但在4℃条件下仍能生长繁殖,其最低生长温度为0.1-0.4℃。根据菌体和鞭毛抗原成分,其中致病血清型有1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b,而以4b型引起发病较多。LM是典型的胞内寄生菌,不仅可以在吞噬细胞内生长,也能在上皮细胞和肝细胞内生长,可以通过损伤的黏膜经神经末梢的鞘膜侵犯中枢神经系统。该菌编码与胞内寄生生活循环有关的毒力基因有2簇,分别为李斯特菌毒力岛1(LIPI-1)和李斯特菌毒力岛2(LIPI-2)。LIPI—1有6个基因,两侧分别为prs和ldh位点,从prs下游开始,依次为转录活化因子编码基因prfA、plcA、hly、mpl、actA、plcB。LIPI-2又称为内化素小岛,内化素是指一个富含亮氨酸重复序列的蛋白质家族,分为2个亚族,亚族1的代表是由InlAB基因编码的InlA和InlB多肽,亚族2是由相对分子质量较小(250000000)的蛋白质组成,原形来自LM的InlC。鉴于此,本研究构建了LM90SB2-△InlC基因缺失株,并开展了缺失株毒力和环境耐受性研究,探讨了LM的Inl C因子在其毒力和环境耐受性方面的调控作用,为LM弱毒疫苗的研发提供了科学依据。主要研究内容和结果如下:1、LM90SB2-△InlC基因缺失株的构建与分子鉴定:首先,在NCBI网站上查找出InlC基因序列,设计出用于基因缺失的上、下游同源臂引物;然后,以LM90SB2DNA为模板,利用PCR技术扩增出InlC基因两侧的上游同源臂和下游同源臂;接着运用基因重叠PCR(SOE-PCR)技术分两步将扩增出的上、下游同源臂融合,获得InlC基因缺失片段;然后将InlC基因缺失片段插入到穿梭载体PKSV7中,构建重组穿梭质粒pKSV7-△Inl C。将pKSV7-△InlC电转化到LM90SB2中,用检测引物(L1、L4)对电转后的菌株和传代培养的菌株进行PCR鉴定及测序分析。结果筛选得到可以扩增出1910bp和1026bp两条目的片段的阳性转化子;对阳性转化子在氯霉素压力41℃条件下传代培养30代,获得具有氯霉素抗性的单交换重组株;然后再在氯霉素压力41℃条件下继续传代培养至108代,得到只能扩增出1026bp一条目的片段无氯霉素抗性的双交换基因重组缺失株LM90SB2-△InlC;用新设计的旁侧引物检测只能检测到一条长度为1480bp的条带;继续在无氯霉素压力37℃条件下传代培养30代,LM90SB2-△InlC无返祖现象,说明该缺失株具有遗传稳定性。2、LM90SB2-△InlC基因缺失株对毒力的影响:通过小鼠半数致死量(LD50)、肝、脾、脑载菌量、溶血试验、鼠脑微血管内皮细胞粘附、侵袭和胞内增殖试验分析缺失株LM90SB2-△InlC和野毒株LM90SB2在毒力上的差异。结果显示:LM90SB2-△InlC的LD50为107CFU,LM90SB2的LD50为104.5CFU,LM90SB2-△InlC的LD50是野毒株的102.5倍(P环境耐受性的影响:为了检测缺失株在环境耐受性方面的变化,通过人工模拟不同温度,不同pH的应激环境,分析了LM90SB2-△InlC缺失株和野毒株LM90SB2在环境耐受性的差异。试验结果表明:与野毒株LM90SB2相比,LM90SB2-△Inl C对温度和pH的环境应激耐受力几乎没有变化,提示在温度、pH的应激过程中可能不需要InlC的参与。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 InlC 基因缺失株电转化毒力环境耐受性

单核细胞增生李斯特菌RsbV基因缺失株的构建及其毒力和环境耐受性的研究

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单核细胞增生李斯特菌RsbV基因缺失株的构建及其毒力和环境耐受性...

作者：张再超石河子大学

学位级别：硕士

单核细胞增生李斯特菌(listeriamonocytogenes,LM)是一种兼性胞内寄生的革兰氏阳性菌，可以引起孕畜(妇)流产和脑膜炎等疾病，是对人畜具有较大危害的人兽共患病病原。该菌广泛存在于水和土壤等自然环境中，具有很强的环境适应能力，可... 详细信息

单核细胞增生李斯特菌(listeriamonocytogenes,LM)是一种兼性胞内寄生的革兰氏阳性菌，可以引起孕畜(妇)流产和脑膜炎等疾病，是对人畜具有较大危害的人兽共患病病原。该菌广泛存在于水和土壤等自然环境中，具有很强的环境适应能力，可在酸性、高盐和低温等多种复杂环境压力下生存，这也是近年来“李斯特菌病”高发的重要原因。免疫接种是预防动物传染病发生的重要手段，但是灭活苗免疫对李斯特菌病效果不佳，所以研发LM弱毒疫苗具有重要的意义。 LM可穿越宿主的主要生理屏障(肠屏障、血脑屏障和胎盘屏障)，侵入机体后能在专职和非专职吞噬细胞(如上皮细胞、肝细胞及成纤维细胞等)中繁殖和寄生，其胞内寄生和细胞间扩散需要特定毒力因子的参与。LM不仅毒力基因众多，调节机制也非常复杂，存在着多级调控系统。现有的研究表明，LM的毒力主要受到正调节因子PrfA、应答调控因子VirR和环境应激因子SigmaB因子的调控。SigmaB操纵子可以编码RsbR,RsbS,RsbT,RsbU,RsbV,RsbW,SigmaB和RsbX共8个因子，其中SigmaB因子对PrfA、inlA、inlB和LLO等主要毒力因子具有调控作用，然而关于RsbV因子在LM毒力和环境耐受性调控方面的作用尚不清楚。鉴于此，本研究构建了LMRsbV基因缺失株，并开展了缺失株毒力、免疫原性和环境耐受性研究，探讨了LM的RsbV因子在其毒力和环境耐受性方面的调控作用，为LM弱毒疫苗的研发提供了科学依据。主要研究内容和结果如下： 1、LMRsbV基因缺失株的构建与分子鉴定：利用PCR技术扩增出RsbV基因两侧的上游同源臂和下游同源臂，然后运用基因重叠PCR(SOE-PCR)技术获得RsbV基因缺失片段。将RsbV基因缺失片段插入到穿梭载体PKSV7中，构建重组穿梭质粒pKSV7-△RsbV。将pKSV7-△RsbV电转化到LM-XS5中，用检测引物对电转后的菌株和传代培养的菌株进行PCR鉴定和测序分析。结果筛选得到可以扩增出807bp和479bp两条目的片段的阳性转化子;对阳性转化子在氯霉素压力42℃条件下传代培养15代，获得具有氯霉素抗性的单交换重组株;然后再在无氯霉素压力42℃条件下传代培养15代，得到只能扩增出479bp一条目的片段无氯霉素抗性的双交换基因重组缺失株LM-△RsbV;继续在无氯霉素压力37℃条件下传达培养20代，LM-△RsbV无毒力返祖现象，说明该菌具有遗传稳定性。 2、RsbV基因缺失对LM毒力和免疫原性的影响：通过人工感染小鼠后，通过LD、肝脾载菌量、毒力基因转录水平的检测和巨噬细胞RAW264.7侵染实验分析了缺失株LM-△RsbV和野毒株LM-XS5在毒力上的差异;通过小鼠免疫攻毒实验，研究了LM-△RsbV对小鼠的免疫保护效果。结果显示LM-△RsbV的LD为10CFU，LM-XS5的LD为10CFU，LM-△RsbV的LD是野毒株的10倍(P性，具有作为弱毒疫苗的潜力。 3、RsbV基因缺失对LM环境耐受性的影响：为了检测缺失株在环境压力耐受性方面的变化，通过人工模拟了高温、低温、高盐、酸性、表面活性剂和酒精压力等应激环境，分析了LM-△RsbV缺失株和野毒株LM-XS5在环境耐受性上的差异。实验结果表明：与野毒株LM-XS5相比，LM-△RsbV在低温、渗透压、酒精和酸性环境中的生长速度变慢，应激耐受力降低，而对表面活性剂Triton-X-100的应激耐受力没有变化，提示在低温、渗透压、酒精压力和酸性等应激过程中需要RsbV参与。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 RsbV 基因缺失株毒力环境耐受性

rnc基因调节变异链球菌环境耐受性及其机制研究

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口腔疾病防治 2018年第8期26卷 504-507页

作者：张茹雷蕾杨英明胡涛首都医科大学附属北京口腔医院牙体牙髓科北京100050 四川大学华西口腔医院口腔预防科口腔疾病研究国家重点实验室四川成都610041

目的 rnc基因敲除后,观察变异链球菌的耐酸、耐氧化、耐高渗透压性能的改变及其可能的调节机制。方法通过长链PCR连接诱变技术,构建rnc基因缺失突变株,分别对比突变菌株与野生菌株对氧化环境、酸性环境及高渗透压环境的耐受能力;采用rea... 详细信息

目的 rnc基因敲除后,观察变异链球菌的耐酸、耐氧化、耐高渗透压性能的改变及其可能的调节机制。方法通过长链PCR连接诱变技术,构建rnc基因缺失突变株,分别对比突变菌株与野生菌株对氧化环境、酸性环境及高渗透压环境的耐受能力;采用real-time RT-PCR验证rnc缺失后变异链球菌环境耐受相关基因的转录水平表达变化。结果 rnc基因缺失后,变异链球菌的耐酸性(c2=13.464,P=0.001)及耐氧化性(c2=4.505,P=0.048)较野生菌株显著下降,但耐高渗透压性显著增加(c2=11.971,P=0.001)。环境耐受相关基因lux S与rop A的表达水平显著下调(P环境耐受相关基因的表达,降低了变异链球菌耐酸、耐氧化能力,增强了对高渗透压的耐受能力。

关键词：变异链球菌 rnc基因耐酸性氧化应激环境耐受性

大曲中高产糖化酶菌株的筛选及环境耐受性分析

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山西农业大学学报（自然科学版） 2016年第10期36卷 740-744页

作者：张琳张也王如福霍乃蕊山西农业大学食品科学与工程学院山西太谷030801 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

[目的]分离适应酿造环境的高产糖化酶大曲土著菌株,用于大曲强化,以减少山西老陈醋酿造过程中的大曲用量,提高原料利用率并改善醋品品质。[方法]以酒精发酵24h的酒醅为样品,用Martin培养基对大曲中的霉菌进行分离,分别以透明圈和酶活大... 详细信息

[目的]分离适应酿造环境的高产糖化酶大曲土著菌株,用于大曲强化,以减少山西老陈醋酿造过程中的大曲用量,提高原料利用率并改善醋品品质。[方法]以酒精发酵24h的酒醅为样品,用Martin培养基对大曲中的霉菌进行分离,分别以透明圈和酶活大小进行初筛和复筛获得高产糖化酶菌株,以生长量为指标进行环境耐受性分析。[结果]初筛获得的10株产糖化酶菌株中M2、M5、M6、M8、M15的产酶能力（U·mL-1）高于公认的糖化酶高产菌株AS3.4309（M0）,依次为M6（3912.08（32.1）〉M5（1413.16（13.92）〉M8（1233.63（71.07）〉M15（1152.47（21.96）〉M2（923.86（22.42）〉M0（828.88（22.23）。环境耐受性分析结果表明,5株霉菌均能耐受6%的乙醇浓度,在pH3.5生长良好,有的甚至能耐受pH2.0,在15~30℃范围内均可生长。[结论]获得的5株霉菌,不仅产糖化酶能力高于公认且应用广泛的AS3.4309,还能耐受山西老陈醋的整个酿造过程。

关键词：山西老陈醋酒醅高产糖化酶菌株环境耐受性

乳酸利用菌的环境耐受性及对模拟白酒固体发酵的影响

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酿酒科技 2009年第9期 38-40页

作者：镇达姚惟琦陈茂彬发酵工程省部共建教育部重点实验室湖北工业大学生物工程学院湖北武汉430068

从发酵过程中的窖池分离数十株乳酸利用菌,选取6株检测其在有氧及缺氧条件下的乳酸盐浓度、有机酸浓度、乙醇浓度耐受性及在混合碳源条件下对利用乳酸盐的影响,显示降乳菌对有关环境因素具有一定的耐受性。模拟厌氧固体发酵显示大部分... 详细信息

从发酵过程中的窖池分离数十株乳酸利用菌,选取6株检测其在有氧及缺氧条件下的乳酸盐浓度、有机酸浓度、乙醇浓度耐受性及在混合碳源条件下对利用乳酸盐的影响,显示降乳菌对有关环境因素具有一定的耐受性。模拟厌氧固体发酵显示大部分菌株降乳效果达到25%～50%,对乙酸等有机酸水平影响少,而对乙醇含量具有一定影响。

关键词：微生物环境耐受性模拟发酵浓香型白酒

软硬段配比对聚醚-MDI型聚氨酯弹性体力学性能及环境耐受性影响

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合成材料老化与应用 2022年第3期51卷 5-9页

作者：陆刚帅长庚刘吟松胡晓阳杨雪海军工程大学振动与噪声研究所船舶振动与噪声重点实验室湖北武汉430033

为研究软硬段配比对聚氨酯弹性体的力学性能及其环境耐受性影响研究,选择了聚醚-二苯基甲烷-4,4’-二异氰酸酯(MDI)型聚氨酯弹性体为研究对象,通过对其软硬段配方的调整制备了系列聚氨酯弹性体,同时对包含力学性能在内的综合环境耐受性... 详细信息

为研究软硬段配比对聚氨酯弹性体的力学性能及其环境耐受性影响研究,选择了聚醚-二苯基甲烷-4,4’-二异氰酸酯(MDI)型聚氨酯弹性体为研究对象,通过对其软硬段配方的调整制备了系列聚氨酯弹性体,同时对包含力学性能在内的综合环境耐受性进行了研究,为应用于极端工况下的聚氨酯介电弹性体的基体优选提供参考。

关键词：软硬段聚氨酯弹性体力学性能环境耐受性

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