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玉米纹枯病菌全长cDNA文库的构建与鉴定

植物病理学报 2014年第6期44卷 603-608页

作者：孔婷婷高增贵张硕王敏周艳波王小皙沈阳农业大学植物免疫研究所沈阳110866

以玉米纹枯病菌菌丝为材料,利用In-Fusion SMARTer TM c DNA Lib Construction Kit构建玉米纹枯病菌全长c DNA文库。文库质量鉴定结果表明,文库滴度为1.2×106pfu·m L-1,重组率为99.2%,插入片段平均长度大于1.0 kb。随机挑取400个白色... 详细信息

以玉米纹枯病菌菌丝为材料,利用In-Fusion SMARTer TM c DNA Lib Construction Kit构建玉米纹枯病菌全长c DNA文库。文库质量鉴定结果表明,文库滴度为1.2×106pfu·m L-1,重组率为99.2%,插入片段平均长度大于1.0 kb。随机挑取400个白色克隆进行测序,共获得329个高质量EST序列,经聚类拼接后得到250条unique EST,包括36条contigs和214条singletons。在Gen Bank进行Blastn与Blastx同源比对,有227条EST与已知核酸或蛋白有不同程度的同源性,占全部EST的90.8%,其余23条无任何同源性,占9.2%。

关键词：玉米纹枯病菌 cDNA文库表达序列标签(EST)

玉米纹枯病菌细胞核纯化与原生质体转化的探讨

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植物病理学报 2014年第3期44卷 265-275页

作者：张眉周善跃陈旭君李宝笃郭泽建青岛农业大学农学与植物保护学院青岛266109 山东省植物病虫害综合防控重点实验室青岛266109 中国农业大学农学与生物技术学院北京100193

引起玉米纹枯病的立枯丝核菌(Rhizoctonia solani K(u|¨)hn)多为多核杂核真菌,也难以通过有性态使其细胞核进行单一化。利用原生质体再生的方法对单核玉米纹枯病菌JN的细胞核进行同核纯化,比较从单个原生质体再生菌获得的rDNAITS序列,... 详细信息

引起玉米纹枯病的立枯丝核菌(Rhizoctonia solani K(u|¨)hn)多为多核杂核真菌,也难以通过有性态使其细胞核进行单一化。利用原生质体再生的方法对单核玉米纹枯病菌JN的细胞核进行同核纯化,比较从单个原生质体再生菌获得的rDNAITS序列,发现序列间存在差异,说明其细胞核没有达到预期纯化的效果。继而扩增了双核和多核玉米纹枯病菌的rDNAITS序列,发现它们自身的rDNA-ITS序列也存在差异,因此认为立枯丝核菌的这种rDNA-ITS序列的差异可能是长期未经过有性阶段的结果且与其细胞核数目无关。使用转化丝状真菌的载体转化纹枯菌未获得稳定的转化子,进而对载体进行了改造,用纹枯菌(AG-3)actin基因的启动子和终止子控制潮霉素基因构建了载体pRsA。利用PEG介导的原生质体转化方法,实现了对单核纹枯菌的转化,PCR验证得到3个转化子。但在PDA培养基连续继代5代后,转化子的潮霉素抗性消失。结果对改进纹枯菌的转化方法有借鉴意义。

关键词：玉米纹枯病菌原生质体 PEG介导的转化

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玉米纹枯病菌的分子检测

玉米科学 2019年第6期27卷 181-185页

作者：刘震傅俊范桑立君陈良宇李德全沈阳农业大学植物保护学院沈阳110866 铁岭市农业科学院玉米研究所辽宁铁岭112616

近年来随着气候的变化和玉米种植密度的加大,玉米纹枯病发生日益严重,该病株残体残留在田土表面土层较浅的区域进行越冬。为准确诊断玉米纹枯病,根据玉米主要病害玉米大斑病、玉米弯孢菌叶斑病、玉米灰斑病rDNA的ITS区间序列差别,设计合... 详细信息

近年来随着气候的变化和玉米种植密度的加大,玉米纹枯病发生日益严重,该病株残体残留在田土表面土层较浅的区域进行越冬。为准确诊断玉米纹枯病,根据玉米主要病害玉米大斑病、玉米弯孢菌叶斑病、玉米灰斑病rDNA的ITS区间序列差别,设计合成1对特异性扩增引物(LZ-F+LZ-R)用于玉米纹枯病检测。该引物能从玉米纹枯病菌扩增到特异性的分子片段,说明设计的特异性引物可以用来检测玉米纹枯病菌。采集田间玉米纹枯病、玉米大斑病、玉米弯孢菌叶斑病、玉米灰斑病病株样本进行病原菌分离,同时提取其病原菌和土壤总DNA,利用上述引物进行扩增。结果表明,只有以R.solani基因组DNA为模板通过反应体系在PCR仪中进行扩增最终能扩增出1条460 bp左右清晰的特异性条带,其他菌株均无特异性条带。利用该特异性引物只能从受到该病害侵染的发病组织DNA中扩增出特异性条带,对照及健康玉米植株均无扩增条带。接种该病原菌的土壤DNA也扩增出相应的特异性条带,表明特异性引物LZ-F/LZ-R可用于玉米纹枯病菌的分子检测和早期诊断。

关键词：玉米玉米纹枯病菌分子检测引物设计

玉米纹枯病菌（Rhizoctonia Solani AG-1-IA）β-1，4-内切纤维素酶的分离纯化、基因的克隆与表达及功能研究

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玉米纹枯病菌（Rhizoctonia Solani AG-1-IA）β-1，4-内切纤维素...

作者：崔福浩山东农业大学

学位级别：硕士

纤维素能被千百种真菌、细菌和放线菌等微生物降解,纤维素酶是生物降解过程中很重要的一组酶,β-1,4-内切纤维素酶是其中必不可少的一类酶,在纤维素的水解过程中随机切割纤维素多糖链内部的无定型区,产生不同长度的寡糖和新链末端。玉... 详细信息

纤维素能被千百种真菌、细菌和放线菌等微生物降解,纤维素酶是生物降解过程中很重要的一组酶,β-1,4-内切纤维素酶是其中必不可少的一类酶,在纤维素的水解过程中随机切割纤维素多糖链内部的无定型区,产生不同长度的寡糖和新链末端。玉米纹枯病已成为我国玉米主产区的一种重要病害,其危害日趋严重。立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)是玉米纹枯病的主要致病菌,在活体上可以产生多种胞壁降解酶,以多聚半乳糖醛酸酶(PG)、聚甲基半乳糖醛酸酶(PMG)和纤维素酶为主。从田间分离的立枯丝核菌(R. solani AG-1-IA)致病力强。在该菌中未见有β-1,4-内切纤维素酶分离纯化、基因克隆、表达及功能研究的报道。立枯丝核菌在改良的Marcus培养基中产生β-1,4-内切纤维素酶,通过硫酸铵沉淀、Phenyl-Sepharose疏水柱层析、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析等步骤获得了电泳纯的β-1,4-内切纤维素酶。SDS-PAGE确认纯化的酶蛋白分子量约为61.1kDa,最适反应pH值为4.0,最适反应温度为45℃,接种实验表明其对玉米叶片可以产生伤害作用。根据第12家族糖苷水解酶氨基酸保守区设计引物,克隆到了R.solani的一个β-1,4-内切纤维素酶新基因EGIII,并扩增到了该基因的DNA序列,长1067bp,包含三个内含子区域。该基因的cDNA和DNA序列在GenBank中的登录号分别为FJ550135和FJ538292。将EGIII与真核表达载体pPIC9K进行体外连接,构建了重组表达载体pPIC9K/eg,用限制性内切酶Sal I线性化后转化巴斯德毕赤酵母获得了酵母工程菌PGS-D,蛋白表达量达0.51mg/mL,其最适反应pH为4.0,最适反应温度为55℃,接种实验表明其可以杀死植物细胞。

关键词：玉米纹枯病菌 β-1,4-内切纤维素酶纯化 cDNA克隆表达

山东省玉米纹枯病菌对噻呋酰胺的敏感性及其抗性突变体的生物学性状

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农药学学报 2018年第6期20卷 735-742页

作者：尚佃龙姜兴印刘玉孙秀英李向东张吉旺山东农业大学植物保护学院山东泰安271018 山东省农药毒理与应用技术重点实验室山东泰安271018 山东农业大学农学院山东泰安271018

为明确山东省玉米纹枯病菌对噻呋酰胺的敏感性及其抗药性风险,采用菌丝生长速率法分别测定了采自山东泰安、临沂、潍坊、莱芜、日照及青岛6个地区的102株玉米纹枯病菌对噻呋酰胺的敏感性。结果表明:其EC50值分布范围为0.010~0.194μg/mL... 详细信息

为明确山东省玉米纹枯病菌对噻呋酰胺的敏感性及其抗药性风险,采用菌丝生长速率法分别测定了采自山东泰安、临沂、潍坊、莱芜、日照及青岛6个地区的102株玉米纹枯病菌对噻呋酰胺的敏感性。结果表明:其EC50值分布范围为0.010~0.194μg/mL,平均EC50值为(0.086±0.004)μg/mL,且敏感性呈连续单峰曲线分布。通过紫外诱导与药剂驯化的方法各获得5株耐药性菌株(TA3-X2、TA17-X6、LY8-3、QD14-Y7和WF6-A2)和1株抗性突变体(QD2-Y4),其抗性水平在6.46~20.08倍之间,突变频率分别为0.87%和0.52%。对抗性突变体生物学性状的研究表明,紫外诱导获得的5株耐药性菌株其耐药性不能稳定遗传,而经药剂驯化获得的1株抗性突变体QD2-Y4的抗药性可稳定遗传;耐药性菌株TA3-X2的菌丝生长速率高于亲本菌株,其余菌株与亲本菌株差异不明显;5株耐药性菌株和1株抗性突变体的菌丝干重和菌核干重均低于亲本菌株;TA3-X2、WF6-A2及QD2-Y4的致病力低于亲本菌株,TA17-X6、LY8-3及QD14-Y7的致病力与亲本菌株无明显差异。交互抗性测定表明,噻呋酰胺抗性突变体与戊唑醇、丙环唑、咯菌腈、井冈霉素、苯醚甲环唑和多菌灵之间均无交互抗性,与啶酰菌胺和氟唑菌苯胺之间则存在交互抗性。研究表明,山东省6个地区的玉米纹枯病菌对噻呋酰胺比较敏感,推测噻呋酰胺可作为防治玉米纹枯病的理想候选药剂。

关键词：玉米纹枯病菌噻呋酰胺啶酰菌胺敏感性诱导抗性生物学性状交互抗性

解淀粉芽孢杆菌gfj-4发酵上清液及其混剂对玉米纹枯病菌的抑制活性

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江苏农业学报 2017年第6期33卷 1249-1256页

作者：段海明程红余利黄伟东余海兵安徽科技学院农学院安徽凤阳233100

为探究解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)gfj-4发酵上清液及其与化学杀菌剂的混配剂对玉米纹枯病菌(Rhizoctonia solani)的抑制活性以及发酵上清液对温度和紫外线的稳定性,采用菌丝生长速率法对发酵上清液和新型混剂的抑菌活... 详细信息

为探究解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)gfj-4发酵上清液及其与化学杀菌剂的混配剂对玉米纹枯病菌(Rhizoctonia solani)的抑制活性以及发酵上清液对温度和紫外线的稳定性,采用菌丝生长速率法对发酵上清液和新型混剂的抑菌活性进行了测定。结果表明,当解淀粉芽孢杆菌发酵上清液的浓度从40.0μl/ml增至100.0μl/ml时发酵上清液对玉米纹枯病菌的抑制率从40.6%增至84.9%,发酵上清液对玉米纹枯病菌的有效中浓度(EC50)为50.7μl/ml(R2=0.95)。发酵上清液的抑菌活性在60℃以下基本保持稳定,但经80℃以上温度处理后抑菌活性物质部分发生热分解,121℃高温高压处理15 min后其抑菌活性下降至61.4%;随着紫外线照射时间的增加,发酵上清液对病菌的抑制活性逐渐下降,紫外线照射时间为30 min时其对玉米纹枯病菌的抑制活性降至74.3%,但30 min后下降速率趋缓。发酵上清液对化学杀菌剂氟吡菌胺具有普遍的增效作用,其中以2∶8(发酵上清液与化学杀菌剂的体积比)的比例混配毒性比率最高,为1.34;发酵上清液与苯醚甲环唑以6∶4、7∶3和8∶2混配表现为增效作用,其余则表现为相加作用;发酵上清液与戊唑醇混配表现为相加作用;发酵上清液与咪鲜胺、腈菌唑混配部分配比表现为相加作用,部分配比则表现为拮抗作用。然而,发酵上清液与三唑酮、丙森锌、福美双混配则主要表现为拮抗作用。

关键词：解淀粉芽孢杆菌玉米纹枯病菌发酵上清液化学杀菌剂混配

河南主栽玉米和小麦品种对玉米纹枯病菌的抗性鉴定

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种子 2011年第8期30卷 89-91页

作者：刘起丽张建新徐瑞富杨蕊河南科技学院资源与环境学院河南新乡453003 河南师范大学生命科学学院河南新乡453007

收集了河南主栽的20个小麦品种、20个玉米品种,分别接种玉米纹枯病菌进行抗病性鉴定研究。结果表明,未发现对玉米纹枯病免疫的小麦、玉米品种。不同玉米品种、小麦品种对玉米纹枯病的抗性程度不同:不同玉米品种对玉米纹枯病抗性不存在... 详细信息

收集了河南主栽的20个小麦品种、20个玉米品种,分别接种玉米纹枯病菌进行抗病性鉴定研究。结果表明,未发现对玉米纹枯病免疫的小麦、玉米品种。不同玉米品种、小麦品种对玉米纹枯病的抗性程度不同:不同玉米品种对玉米纹枯病抗性不存在显著差异,相对抗病指数介于0～0.72之间;无高抗品种;中抗类型占品种总量25%;中感类型占25%;高感类型占50%。供试小麦品种抗病性较好,其中国育3号平均发病率最低,只有20.56%,与西农889、徐麦856、新乡9718等12个品种比较,不存在对纹枯病抗性的显著差异,平均发病率均低于40%。

关键词：主栽玉米和小麦品种玉米纹枯病菌抗性鉴定

武夷菌素对玉米纹枯病菌Rhizoctonia solani生长发育的影响

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西南大学学报（自然科学版） 2016年第1期38卷 9-13页

作者：余洋丁俊杰陆慧慧毕朝位谭万忠西南大学植物保护学院重庆400715

玉米纹枯病近年来已成为我国很多玉米主产区最重要的病害,而武夷菌素(wuyiencin)是来源于不吸水链霉Streptomyces ahygroscopicus var.wuyiensis的一种微生物源类杀菌剂.本研究测试了武夷菌素对玉米纹枯病菌生长发育的影响,结果表明在... 详细信息

玉米纹枯病近年来已成为我国很多玉米主产区最重要的病害,而武夷菌素(wuyiencin)是来源于不吸水链霉Streptomyces ahygroscopicus var.wuyiensis的一种微生物源类杀菌剂.本研究测试了武夷菌素对玉米纹枯病菌生长发育的影响,结果表明在含有武夷菌素的PDA培养基上,玉米纹枯病菌生长缓慢,菌丝分支致密且部分菌丝尖端出现原生质体渗透;菌丝致病力下降.随着武夷菌素质量浓度的增高,菌丝受抑制程度加重,在培养后期,菌株形成的菌核数量和质量均显著下降.当武夷菌素质量浓度为50 mg/L时,玉米纹枯病菌菌落直径减少75%以上,菌丝致病力降低达99%,形成的菌核数量和质量分别降低67%和61%.武夷菌素可显著抑制玉米纹枯病菌的生长发育,在玉米纹枯病的控制中具有重要的应用潜力.武夷菌素对田间玉米纹枯病的有效防治有待进一步研究.

关键词：武夷菌素玉米纹枯病菌菌丝生长菌核形成病害控制

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不同碳、氮素营养对玉米纹枯病菌生长的影响

安徽技术师范学院学报 2004年第6期18卷 18-21页

作者：王波孙大川吕蝉娟安徽技术师范学院农学系安徽凤阳233100

本文研究了不同碳、氮源对玉米纹枯病菌(Rhizoctonia solani)生长的影响。结果表明:最适宜玉米纹枯病菌生长的碳、氮素营养是淀粉、天门冬酰氨,其次是蔗糖、亚硝酸钠及硝酸铵,而此菌对乳糖、鼠李糖及组氨酸、半胱酰氨、硫酸铵的利用能... 详细信息

本文研究了不同碳、氮源对玉米纹枯病菌(Rhizoctonia solani)生长的影响。结果表明:最适宜玉米纹枯病菌生长的碳、氮素营养是淀粉、天门冬酰氨,其次是蔗糖、亚硝酸钠及硝酸铵,而此菌对乳糖、鼠李糖及组氨酸、半胱酰氨、硫酸铵的利用能力较差。

关键词：玉米纹枯病菌碳源氮源