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玉米抗氧化肽的分离纯化与结构鉴定及其完整吸收研究

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玉米抗氧化肽的分离纯化与结构鉴定及其完整吸收研究

作者：姜源吉林大学

学位级别：硕士

本研究隶属于吉林省科技发展计划项目-《规模化利用玉米蛋白粉加工系列活性肽产品的生产关键技术研究》(20150204032NY)。本研究以玉米蛋白粉为研究对象,对玉米蛋白粉进行酶解得到玉米抗氧化肽,对玉米抗氧化肽进行分离纯化与结构鉴定,... 详细信息

本研究隶属于吉林省科技发展计划项目-《规模化利用玉米蛋白粉加工系列活性肽产品的生产关键技术研究》(20150204032NY)。本研究以玉米蛋白粉为研究对象,对玉米蛋白粉进行酶解得到玉米抗氧化肽,对玉米抗氧化肽进行分离纯化与结构鉴定,并开展玉米抗氧化肽的活性评价,同时研究了抗氧化活性与肽序列、空间结构等的关系,最后研究玉米抗氧化肽的完整吸收。(1)在玉米抗氧化肽分离纯化与结构鉴定的研究中,以玉米蛋白粉为原料,经过酶解、超滤、冻干等过程,得到两种不同分子量(MW)玉米抗氧化肽粉,对分子量100 kDa的组分进行Sephadex G-25凝胶色谱分离纯化,优选纯化得到高活性因子的抗氧化活性组分CPH2-III,对CPH2-III进行MS/MS鉴定,获得四条玉米源抗氧化五肽,氨基酸序列为AGI/LPM和HAI/LGA,相对分子质量分别为487.62 Da和467.53 Da。(2)在玉米源抗氧化五肽的活性评价研究中,以前期分离纯化获得的AGI/LPM和HAI/LGA为研究对象,以ORAC氧自由基清除能力、清除羟基自由基活性、活性氧自由基ROS的检测和细胞抗氧化活性为评价指标,对玉米源抗氧化五肽AGI/LPM和HAI/LGA的活性进行了综合评价,并初步探讨肽的抗氧化活性与其序列及空间结构之间的关系,结论如下:玉米源抗氧化五肽AGLPM的抗氧化活性最强;在肽序列中,含有Leu肽段的抗氧化活性可能高于含有Ile肽段的抗氧化活性(不是C-或N-末端);在对肽的抗氧化活性影响中,α-螺旋结构相比于无规则卷曲,可能起到更加重要的作用。(3)在玉米源抗氧化五肽AGLPM的完整吸收研究中,以抗氧化活性最强的玉米源抗氧化五肽AGLPM为研究对象,通过建立Caco-2细胞膜模型,采用超高效液相色谱法HPLC评价玉米源抗氧化五肽AGLPM的完整吸收性。经21天培养的Caco-2细胞,TEER值稳定在400?·cm,细胞单层膜的完整性良好。同时AP侧的碱性磷酸酶活力是BL侧的12.29倍,Caco-2细胞膜发生了明显的极性分化,所构建的Caco-2细胞膜是完整的极性分化的单层结构;采用超高效液相色谱法对AGLPM的稳定性和对Caco-2细胞膜的吸收实验表明,玉米源抗氧化五肽AGLPM可以被完整吸收。

关键词：玉米蛋白粉玉米抗氧化肽分离纯化结构鉴定完整吸收

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大孔吸附树脂吸附分离高活性玉米抗氧化肽

食品科学 2011年第16期32卷 187-191页

作者：刁静静曹龙奎黑龙江省农产品加工工程技术研究中心黑龙江大庆163319 黑龙江八一农垦大学食品学院黑龙江大庆163319

采用大孔吸附树脂对玉米抗氧化肽进行分离,通过单因素试验得出XAD-7HP树脂为最适树脂,在此基础上,研究不同pH值条件下的静态吸附能力和不同解吸剂的静态解吸能力等实验,确定玉米抗氧化肽吸附分离的基本参数为pH7.0、解吸剂体积分数70%... 详细信息

采用大孔吸附树脂对玉米抗氧化肽进行分离,通过单因素试验得出XAD-7HP树脂为最适树脂,在此基础上,研究不同pH值条件下的静态吸附能力和不同解吸剂的静态解吸能力等实验,确定玉米抗氧化肽吸附分离的基本参数为pH7.0、解吸剂体积分数70%。通过动态吸附分离实验得出,该树脂可以达到分离纯化玉米抗氧化肽的目的,而且分离后的玉米肽的抗氧化活性比原液提高了1倍。

关键词：大孔吸附树脂玉米抗氧化肽静态吸附解吸

单柱层析分离高活性玉米抗氧化肽技术参数的研究

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食品工业 2018年第1期39卷 92-96页

作者：刁静静陈洪生李朝阳黑龙江八一农垦大学国家杂粮工程技术研究中心大庆163319 黑龙江八一农垦大学食品学院大庆163319

筛选利用大孔吸附树脂分离高活性玉米抗氧化肽的工艺参数。以解吸后玉米抗氧化肽的纯度、DPPH自由基清除率为指标,采用不同流速、不同洗脱剂对玉米抗氧化肽进行纯化。在不同流速条件下对玉米抗氧化肽进行水解吸,兼顾生产效率得出流速在4... 详细信息

筛选利用大孔吸附树脂分离高活性玉米抗氧化肽的工艺参数。以解吸后玉米抗氧化肽的纯度、DPPH自由基清除率为指标,采用不同流速、不同洗脱剂对玉米抗氧化肽进行纯化。在不同流速条件下对玉米抗氧化肽进行水解吸,兼顾生产效率得出流速在4 mL/min条件下解吸液的纯度达到84%,自由基清除率达到40%。醇洗脱杂质在5 mL/min的流速条件下,耗时60 min,树脂中的杂质及色素类物质基本被完全解吸。单柱分离高活性玉米抗氧化肽的工艺参数:饱和吸附量为0.08 g/mL;水洗脱流速4 mL/min,洗脱30 min;90%醇洗脱流速5 mL/min,洗脱剂用量为280 mL。

关键词：单柱层析分离纯化玉米抗氧化肽大孔吸附树脂

玉米蛋白资源高效利用开发抗氧化肽的关键技术研究

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玉米蛋白资源高效利用开发抗氧化肽的关键技术研究

作者：王可吉林大学

学位级别：硕士

本论文研究内容隶属于“十二五”国家科技支撑计划课题《食源性功能肽生物制备技术研究（2012BAD33B03）》，是以蛋白质含量为79.4%、粒径为180目的玉米蛋白粉为原料，重点开展了高效水解玉米蛋白粉的关键技术、高活性玉米抗氧化肽（CAP... 详细信息

本论文研究内容隶属于“十二五”国家科技支撑计划课题《食源性功能肽生物制备技术研究（2012BAD33B03）》，是以蛋白质含量为79.4%、粒径为180目的玉米蛋白粉为原料，重点开展了高效水解玉米蛋白粉的关键技术、高活性玉米抗氧化肽（CAPS）的优选、高活性玉米抗氧化肽（CAPS-1）的安全毒理学评价、玉米抗氧化肽（CAPS-1）分离制备高活性因子、基于高压脉冲电场技术（PEF）提高玉米抗氧化肽活性等研究工作，具体研究内容如下：（1）在高效水解玉米蛋白粉的关键技术研究中，以水解度（DH）为衡量指标，借助单因素实验和响应面实验设计等研究方法，对比分析了碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶3种蛋白酶对玉米蛋白粉酶解过程中的DH的影响情况。通过对酶解温度T、酶解pH值、酶比底物浓度[E]/[S]的单因素实验对比分析获知，碱性蛋白酶酶解制备玉米蛋白粉酶解物的DH最高。通过响应面实验设计，构建了碱性蛋白酶回归模型为Y=36.85333-1.48375X1-9.94125X2+1.12X3-0.5225X1X2+0.78X1X3-0.31X2X3+0.024583X12-11.8954X22-1.74292X32，式中：X1为酶解温度（℃）;X2为酶解pH值;X3为酶比底物浓度[E]/[S（]%）。其最佳工艺参数为：酶解温度50℃，酶解pH值8.6，酶比底物浓度9.13%，玉米蛋白粉的最大水解度可达40.26±0.23%;在此基础上探讨了辐照剂量（0-138.7kGy）对玉米蛋白粉酶解过程中DH的影响，获知当辐照剂量为65.0kGy时，玉米蛋白粉的DH可达最高值48.23±6.1%，经场发射扫描电镜检测辐照前后玉米蛋白粉表面形态变化，获知较未辐照玉米蛋白粉相比，辐照剂量为65.0kGy的玉米蛋白粉表面的凹凸程度增加，完整性下降。（2）在高活性玉米抗氧化肽（CAPS）的优选的研究中，以最佳酶解工艺所获得的玉米蛋白酶解物为原料，以经超滤技术制备获得的CAPS-1，CAPS-2，CAPS-3，CAPS-4和CAPS-5五种不同分子量范围的超滤液为研究对象，借助于体外抗氧化评价指标（DPPH清除率）和体内抗氧化动物实验指标（受试小鼠血清中的GSH-Px活力、CAT活力和MDA含量），优选出抗氧化活性最高的超滤液组分。研究发现：体外抗氧化评价结果表明CAPS-1的DPPH清除率可达最高值84.75±4.19%。体内抗氧化动物实验结果表明：与空白组相比，CAPS-1-中剂量（CAPS-1-MD）组的GSH-Px活力显著增加（P玉米抗氧化肽（CAPS-1）的安全毒理学评价研究中，是以超滤分离获得的CAPS-1为实验原料，选取受试小鼠的精子畸形率、骨髓微核率、NK细胞活性、脏器系数（心脏系数、肺系数、肾脏系数、肝脏系数和胸腺系数）、体重均值为衡量指标，研究结果表明：与空白组相比，CAPS-1对受试小鼠的精子畸形率、骨髓微核率、脏器系数（心脏系数、肺系数、肾脏系数、肝脏系数、胸腺系数）和体重均值的影响均不显著（P>0.05）;CAPS-1可以使受试小鼠的NK细胞活性显著提高（P玉米抗氧化肽（CAPS-1）分离制备高活性因子的研究中，以CAPS-1为实验原料，以DPPH清除率为衡量指标，利用Sephadex G-25凝胶色谱分离技术为分离纯化方法，当Sephadex G-25凝胶色谱分离装置的层析柱径高比为1.6:100、上样浓度为50mg/mL、洗脱流速为60mL/h时，分离获得CAPS-1-Ⅰ、CAPS-1-Ⅱ、CAPS-1-Ⅲ和CAPS-1-Ⅳ4个组分，研究发现CAPS-1-Ⅲ的DPPH清除率可达最高值84.51±1.3%;将CAPS-1-Ⅲ进行氨基酸成分分析获知，与CAPS-1相比，CAPS-1-Ⅲ中Glu和Leu的含量显著增加，分别由1.581%增至3.237%，由1.801%增至2.689%，疏水性氨基酸比例降低，降低率为13.3%。（5）在基于高压脉冲电场技术（PEF）提高玉米抗氧化肽活性的研究中，以CAPS-2和蛋清抗氧化肽（EWAPS）为实验原料，以DPPH清除率为衡量指标，借助单因素和响应面实验设计方法，构建了PEF技术提高CAPS-2抗氧化活性的工程化回归模型为Y=-152.29-4.57X1+7.93X2+0.18X3+0.01X1X2-0.002X1X3-0.002X2X3+0.53X12-

关键词：玉米蛋白粉玉米抗氧化肽电子束辐照技术高压脉冲电场技术

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玉米蛋白粉研究进展

黑龙江八一农垦大学学报 2013年第4期25卷 53-57页

作者：潘旭琳曹龙奎黑龙江八一农垦大学食品学院大庆163319

玉米蛋白粉是玉米淀粉湿法生产的副产物。文中介绍了玉米蛋白粉的组成及营养价值,综述了玉米蛋白粉深加工的新方法和新工艺,包括玉米醇溶蛋白和玉米黄色素的提取、玉米抗氧化肽的制备以及它们的应用。

关键词：玉米蛋白粉玉米醇溶蛋白玉米黄色素玉米抗氧化肽