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獐牙菜苦苷对内毒素诱导的胆汁淤积大鼠肝细胞膜转运蛋白Mrp3、Mrp4表达的影响

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獐牙菜苦苷对内毒素诱导的胆汁淤积大鼠肝细胞膜转运蛋白Mrp3、Mr...

作者：李绍雪蚌埠医学院

学位级别：硕士

目的：本实验从内毒素诱导的胆汁淤积模型上，研究獐牙菜苦苷对内毒素诱导的胆汁淤积大鼠肝细胞膜转运蛋白Mrp3、Mrp4表达的影响，评价獐牙菜苦苷治疗胆汁淤积的效果，为临床治疗胆汁淤积症提供新的重要线索。材料和方法：选取45只SD雄... 详细信息

目的：本实验从内毒素诱导的胆汁淤积模型上，研究獐牙菜苦苷对内毒素诱导的胆汁淤积大鼠肝细胞膜转运蛋白Mrp3、Mrp4表达的影响，评价獐牙菜苦苷治疗胆汁淤积的效果，为临床治疗胆汁淤积症提供新的重要线索。材料和方法：选取45只SD雄性大鼠，随机分为3组(每组15只)：生理盐水组、LPS+生理盐水组、LPS+獐牙菜苦苷组，各组大鼠均于LPS注射16h后取标本，统计分析各组大鼠肝功能指标ALT、AST、TBIL;取肝脏组织行HE病理切片检测各组大鼠肝脏形态变化;分别提取大鼠肝脏组织RNA、总蛋白,采用Real-time PCR和蛋白免疫印迹检测各组大鼠肝细胞膜转运蛋白Mrp3、Mrp4和核受体Pxr、Car在转录与蛋白水平的表达变化。结果：1.与生理盐水组相比，LPS+生理盐水组肝功能指标ALT、AST、TBIL明显升高(p〈0.05)。而与LPS+生理盐水组相比，LPS+獐牙菜苦苷组肝功能指标显著下降(p〈0.05)。2.给予獐牙菜苦苷后，与LPS+生理盐水组相比，对大鼠肝损伤病理有显著改善作用。3.与生理盐水组比较，LPS胆汁淤积模型组大鼠胆酸转运蛋白Mrp4、Mrp3及核受体Car、Pxr蛋白水平表达增加(P〈0.05)。与LPS+生理盐水组大鼠比较，用獐牙菜苦苷处理后,Mrp4、Mrp3及核受体Car、Pxr蛋白水平表达也显著增加(P〈0.05)。4.与生理盐水组比较，LPS+生理盐水组大鼠肝细胞膜转运蛋白Mrp3、Mrp4mRNA及核受体Car、PxrmRNA表达水平增加(P〈0.05)。与LPS+生理盐水组大鼠比较，LPS+獐牙菜苦苷组其Mrp3、Mrp4mRNA及核受体Car、PxrmRNA表达水平也显著增加(P〈0.05)。结论：本实验结果发现，獐牙菜苦苷能明显减轻LPS诱导的大鼠胆汁淤积肝脏损伤。可能与上调的肝脏膜转运蛋白Mrp3、Mrp4的表达有关，而Mrp3、Mrp4表达的增加可能与核受体Pxr(Mrp3)、Car(Mrp3、Mrp4)的调节有关。同时，在LPS诱导的大鼠胆汁淤积中，转运蛋白Mrp3、Mrp4表达水平也增加，提示在胆汁淤积模型中Mrp3、Mrp4作为肝细胞的保护因子，改善淤胆对肝脏的损伤。

关键词：獐牙菜苦苷内毒素胆汁淤积 Mrp3 Mrp4 Pxr Car

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獐牙菜苦苷热转化产物水溶性成分的化学研究

獐牙菜苦苷热转化产物水溶性成分的化学研究

作者：杜盛楠云南中医学院

学位级别：硕士

本论文主要是对獐牙菜苦苷热转化产物水溶性成分进行研究。利用各种色谱方法，从獐牙菜苦苷单体的热转化产物水溶性成分中共分离得到25个单体化合物。通过波谱解析及X-射线晶体衍射等手段鉴定了19个化学结构，发现5个新化合物，分别命名... 详细信息

本论文主要是对獐牙菜苦苷热转化产物水溶性成分进行研究。利用各种色谱方法，从獐牙菜苦苷单体的热转化产物水溶性成分中共分离得到25个单体化合物。通过波谱解析及X-射线晶体衍射等手段鉴定了19个化学结构，发现5个新化合物，分别命名为Swertivarisin I (1)、Swertivarisin J (2)、Swertivarisin K (3)、Swertivarisin L (4)、Swertivarisin M (5)，其余已知化合物分别鉴定为Angelone (6)、Swertivarisin A(7)、龙胆苷元(gentiogenal)(8)、红白金花内酯(erythrocentaurin)(9)、(±) gentianol (10)、红白金花酸(11)、獐牙菜内酯F (Swerilactone F)(12)、Swertivarisin B (13)、獐牙菜内酯B(Swerilactone B)(14)、Swertivarisin G (15)、Swertivarisin H (16)、獐牙菜内酯C(Swerilactone C)(17)、α, β-葡萄糖(18)、邻苯二酚(pyrocatechol)(19)。根据獐牙菜苦苷与转化产物在结构上的相关性，对红白金花内酯、SwertivarisinG、Swertivarisin H等化合物的转化途径进行了理论上的推导，发现不论简单成分还是聚合度较高的新奇结构，它们在转化过程中都有相同的中间体，其转化过程遵循相同的规律。通过对其转化途径的初步探讨，能够为进一步研究环烯醚萜类成分的合成方法提供新的思路和方法。同时对部分化合物进行了保肝及免疫活性的体外细胞筛选，得到较为理想的结果。其中Swertivarisin J (2)、Swertivarisin K (3)、Swertivarisin A (7)、獐牙菜内酯F(Swerilactone F)(12)、獐牙菜内酯B (Swerilactone B (14)等能够显著提高AP损伤L-02细胞模型的相对存活率。最后，对青叶胆及其习用品中的来源、化学成分以及药理活性等研究概况进行了综述，为寻找青叶胆药材的替代植物资源及更好地发掘抗肝炎药物提供参考。

关键词：獐牙菜苦苷热转化产物水溶性成分转化过程活性筛选

獐牙菜苦苷对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的作用及机制研究

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獐牙菜苦苷对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的作用及机制研究

作者：陈康湖北中医药大学

学位级别：硕士

研究背景:肝纤维化基本在所有的慢性肝损伤的患者中都会形成,慢性肝病恶化的时候都会经过肝纤维化这个过程。肝纤维化危害严重,但是迄今都还没有找到能够完全治疗肝纤维化的药物。根据中药多年来对肝病的治疗经验,为了找到能够治愈肝纤... 详细信息

研究背景:肝纤维化基本在所有的慢性肝损伤的患者中都会形成,慢性肝病恶化的时候都会经过肝纤维化这个过程。肝纤维化危害严重,但是迄今都还没有找到能够完全治疗肝纤维化的药物。根据中药多年来对肝病的治疗经验,为了找到能够治愈肝纤维化的新药,最好的方法就是研究中药的有效成份。研究目的:整理大鼠肝纤维化与獐牙菜苦苷的相关文献,建立四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型,探讨獐牙菜苦苷抗肝纤维化作用及其机制。研究方法:选取SPF级雄性Sprague–Dawley大鼠50只,随机分为5组:正常对照组,STM对照组(给药对照组),CCL4模型组,CCL4+STM 100治疗组(低剂量药物治疗组),CCL4+STM 200治疗组(高剂量药物治疗组);CCL4模型组、CCL4+STM组首次皮下注射40%CCL4花生油溶液0.5 mL/100 g,之后每次皮下注射40%CCL4花生油溶液0.3 mL/100 g(每周一、四注射1次,连续8周,共注射16次);CCL4+STM组、STM对照组大鼠于开始造模的第2天开始给药,按照实验方案灌胃不同浓度的STM溶液(1 mL/100g),每日1次,连续8周;大鼠自由饮水,摄食;给药结束后,禁食过夜;取大鼠血清待测,取肝组织固定、送检。实验检测指标如下:1.一般状态观察:试验期间,每日观察各组动物饮食状况,活动,外观;2.生化检测:采用生化方法检测大鼠血清肝功能以及纤维化指标;3.病理检查:采用HE染色和Massson染色观察评价肝组织病理改变;4.细胞因子检测:采用ELISA方法检测大鼠肝组织炎症因子水平;5.氧化应激指标:采用生化方法检测大鼠肝组织氧化应激指标;6.分子生物学检测:采用RT-qPCR以及Western blot方法检测大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1、TLR4和NF-κB P65表达水平。研究结果:獐牙菜苦苷显著减轻四氯化碳诱导大鼠肝组织病理损伤和纤维化程度,改善肝功能,同时明显减轻肝组织氧化应激损伤、降低炎症因子水平,可能与其抑制TLR信号通路有关。研究结论:1.獐牙菜苦苷对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化具备显著的保护作用,可以显著降低大鼠血清生化指标,减轻肝组织病理损伤,降低肝脏组织纤维化程度;2.獐牙菜苦苷抗四氯化碳诱导大鼠实验性肝纤维化的可能机制包括:减少Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGFβ1表达、减轻肝脏氧化应激、减轻肝组织炎症反应;3.獐牙菜苦苷可能部分地通过抑制TLR信号通路发挥抗炎和抗纤维化作用。

关键词：獐牙菜苦苷肝纤维化四氯化碳氧化应激炎症

獐牙菜苦苷对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤的保护作用及其作用机制研究

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獐牙菜苦苷对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤的保护作用及其作用机制研究

作者：杨方方湖北中医药大学

学位级别：硕士

目的:查阅参考獐牙菜苦苷与脑缺血再灌注损伤的相关文献,建立人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y缺氧缺糖/复氧（OGD/R）损伤模型,研究獐牙菜苦苷对OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞的潜在神经保护作用及作用机制。另建立獐牙菜苦苷高效液相色谱分析方法... 详细信息

目的:查阅参考獐牙菜苦苷与脑缺血再灌注损伤的相关文献,建立人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y缺氧缺糖/复氧（OGD/R）损伤模型,研究獐牙菜苦苷对OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞的潜在神经保护作用及作用机制。另建立獐牙菜苦苷高效液相色谱分析方法并对其进行方法学考察,研究其溶解性和稳定性的影响因素,为深入开发利用獐牙菜苦苷提供实验基础和药理基础。方法:1.构建人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的OGD/R模型并随机分为:正常组（Control）、OGD/R损伤模型组（Vehicle）、OGD/R损伤+STM组（120、60、30μM）共计5组;2.用CCK-8法检测不同浓度（30μM,60μM和120μM）的STM作用于SH-SY5Y细胞24小时后的细胞毒性;利用CCK-8法检测各组SH-SY5Y细胞的细胞活力;3.用Annexin V/PI法测定各组凋亡细胞的比例;4.采用JC-1探针检测各组细胞线粒体膜电位（MMP）的变化;5.采用DCFH-DA染色法检测各组细胞内活性氧（ROS）生成水平;6.观察獐牙菜苦苷对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤的影响,采用Western blot方法对细胞内TLR4/PARP1/NF-κB通路相关蛋白的表达水平进行测定;7.采用高效液相测定STM在Hank’s平衡盐溶液中的溶解性与稳定性,为STM的体内吸收与代谢研究奠定基础。结果:1.结果显示,未经处理的对照组和的STM预处理组的细胞活力无统计学意义,表明本研究中选择的STM（30,60和120μM）浓度不具细胞毒性;2.CCK-8检测显示,OGD/R组细胞活力明显低于对照组（p＜0.01）,STM（30、60、120μM）预处理组细胞活力明显高于OGD/R组;3.细胞经OGD/R处理后存活率下降,STM（30、60、120μM）预处理可使缺氧缺糖4h、复氧24h的SH-SY5Y细胞活力增加（p＜0.01）;4.OGD/R降低了SH-SY5Y细胞的ΔΨm,STM（30、60、120μM）预处理使损伤细胞的ΔΨm明显升高;5.OGD/R显著提高了SH-SY5Y细胞内的ROS水平。STM（30、60和120μM）预处理抑制了OGD/R诱导的细胞内ROS的产生,减少了细胞凋亡;6.OGD/R主要诱导TLR4、MyD88、NF-κB p65和PARP1在细胞中的表达,STM预处理可降低TLR4、MyD88、NF-κB p65和PARP1的表达;7.STM在pH=3、pH=5和pH=7.4的HBSS溶液环境中稳定性良好,而在pH=9和pH=11的碱性环境中稳定性较差,光照和温度对STM稳定性无明显影响。结论:STM能够减轻OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞损伤,与减少细胞ROS水平和抑制细胞凋亡有关;STM在碱性HBSS溶液环境稳定性较差。

关键词：獐牙菜苦苷 OGD/R SH-SY5Y细胞溶解性与稳定性

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獐牙菜苦苷片的制备工艺及质量研究

獐牙菜苦苷片的制备工艺及质量研究

作者：杜建倬哈尔滨商业大学

学位级别：硕士

目的:建立獐牙菜苦苷提取工艺,以獐牙菜苦苷为原料,制备獐牙菜苦苷片。方法:确定药材来源,从药材中提取獐牙菜苦苷的方法主要通过乙醇或者水为溶剂,提取后浓缩提取液,将提取液通过大孔树酯吸附,采用乙醇洗脱,得到獐牙菜苦苷,所得到的獐... 详细信息

目的:建立獐牙菜苦苷提取工艺,以獐牙菜苦苷为原料,制备獐牙菜苦苷片。方法:确定药材来源,从药材中提取獐牙菜苦苷的方法主要通过乙醇或者水为溶剂,提取后浓缩提取液,将提取液通过大孔树酯吸附,采用乙醇洗脱,得到獐牙菜苦苷,所得到的獐牙菜苦苷为混合物,所含成分根据药材中的有效成份不同而略有差异,将提取物通过大孔树脂制备獐牙菜苦苷。在得到獐牙菜苦苷单体后,采用质量源于设计的理念进行处方设计,考察检测指标如下:规格选择依据、辅料选择、原料粒度选择、原辅料相容性研究、溶出度考察、压片参数摸索,包衣参数摸索。本品制备过程主要包括称量、过筛、混合、中间体测定、压片、包衣、铝塑包装。在处方摸索及工艺研究过程中积累相关参数,建立关键工艺参数,确定影响产品质量的关键属性。根据产品剂型特点建立考察指标,主要考察指标有性状、溶出度、片重差异、微生物限度及含量。参照2015版四部药典对溶出度、微生物限度及含量进行检验方法验证。对样品进行稳定性考察,评价样品稳定性情况。结果:建立药材提取工艺,主要工序包括提取、浓缩、吸附、分离及精制等,具体参数为提取的水量为10倍,提取时间为0.5h,提取次数为3次;提取液浓缩温度为45℃～55℃,真空度为0.085mpa～0.095mpa;以30%乙醇溶液为洗脱剂,用乙醇洗脱速度为0.8～1.0BV/h,洗脱体积约为3～4倍BV,洗脱终点根据獐牙菜苦苷点板结果判断;洗脱液浓缩温度为45～55℃,真空度0.085～0.095mpa。将洗脱液浓缩至0.20～0.25kg溶液/kg药材;浓缩所得样品于10℃下冷藏24h以上,使獐牙菜苦苷样品结晶析出,取出样品后将结晶样品加1～2倍量无水乙醇反复冲洗3～5次,过滤溶液,得獐牙菜苦苷样品。獐牙菜苦苷片制备工艺为称取处方量的物料置于三维混合机中混合15min,三维混合机转速为10r/min,混合后向其中加入处方量硬脂酸镁,加入硬脂酸镁后混合5min,中间体检测（性状、含量）,性状应为白色粉末,含量应为37.0%～45.0%。中间体检测合格后压片,压片时选择冲模直径为8mm,压片机压力为80～100N,压片时素片的片重差异为±2%,包衣时包衣锅转速为3～5r/min,包衣增重为3.0%～4.0%。质量研究所建立方法可行,稳定性研究主要指标无明显变化。结论:所建立工艺参数可生产出合格样品,所建立质量标准可有效控制产品质量,稳定性研究结果表明獐牙菜苦苷片质量稳定。

关键词：獐牙菜苦苷质量研究质量源于设计

獐牙菜苦苷对缺血性脑损伤的保护作用及机制研究

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獐牙菜苦苷对缺血性脑损伤的保护作用及机制研究

作者：王慧宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的观察獐牙菜苦苷(Swertiamain,Swe)对大脑中动脉栓塞(MCAO)小鼠及氧糖剥夺(OGD/R)损伤的海马神经元的保护作用并探讨獐牙菜苦苷发挥神经保护作用与Nrf2内源性抗氧化信号通路的关系。方法1.观察獐牙菜苦苷(Swe)对缺血性脑损伤(MCAO)... 详细信息

目的观察獐牙菜苦苷(Swertiamain,Swe)对大脑中动脉栓塞(MCAO)小鼠及氧糖剥夺(OGD/R)损伤的海马神经元的保护作用并探讨獐牙菜苦苷发挥神经保护作用与Nrf2内源性抗氧化信号通路的关系。方法1.观察獐牙菜苦苷(Swe)对缺血性脑损伤(MCAO)小鼠的保护作用构建局灶性脑缺血MCAO模型,随机分为六组:假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、Swe低剂量组(25 mg/kg)、Swe中剂量组(100 mg/kg)、Swe高剂量组(400 mg/kg)和尼莫地平组(1.4 mg/kg)。腹腔注射给予小鼠獐牙菜苦苷和尼莫地平,连续给药七天,第七天给药一小时后建立MCAO模型。损伤后24h观察Swe对小鼠缺血性脑损伤的影响:(1)TTC染色检测脑梗死体积,Longa5级4分法进行神经功能缺陷评分(2)采用行为学实验方法,转棒运动实验和握力实验观察小鼠的协调运动功能。(3)采用组织学实验技术进行HE染色和TUNEL染色,观察Swe对MCAO小鼠缺血性损伤后脑部组织病理学改变的影响;(4)比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的水平,观察Swe对MCAO小鼠氧化应激损伤的影响。2.观察獐牙菜苦苷(Swe)对缺血性脑损伤的保护作用与Nrf2信号通路的关系构建原代海马神经元OGD/R模型并随机分为:正常组(Control)、模型组(Vehicle)、Swe组(0.1、1、10μM)及Nrf2抑制剂(鸦胆子苦醇)组。海马神经元缺氧缺糖2h后给予药物处理。在24h后观察Swe对海马神经元OGD/R损伤的影响及与Nrf2信号通路的关系:(1)MTT法检测神经元的存活率、LDH活性测定试剂盒检测海马神经元LDH的漏出率;(2)DCFH-DA荧光探针检测神经元内的ROS水平,Fluo-3AM探针检测神经元内Ca的浓度,采用JC-1探针检测神经元线粒体膜电位(MMP)水平;(3)采用免疫共沉淀法检测海马神经元内Nrf2(Nuclear factor erythroid-2-related factor 2)与keap1(Kelch-like ECH-associated protein 1)的解离情况;(4)采用免疫荧光法检测海马神经元内Nrf2的分布;(5)采用Western blot方法检测海马神经元细胞内Nrf2、HO-1(heme oxygenase-1)和NQO1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase-1)蛋白的表达水平;(6)运用qPCR方法检测海马神经元细胞内HO-1和NQO1的mRNA表达水平。结果1.(1)与Sham组比较,MCAO模型组小鼠的神经功能缺陷评分增高(p<0.01),梗死体积明显增加(p<0.01);与模型组相比,Swe预处理组小鼠梗死体积显著减少(p<0.01,p<0.05),神经功能缺陷评分显著降低(p<0.01,p<0.05)。(2)与Sham比较,MCAO模型组小鼠在转棒上运动时间显著减少(p<0.01),小鼠在铁棒上的握力减弱(p<0.01);与模型组相比,小鼠的握力及在转棒上运动的时间显著增加(p<0.01,p<0.05)。(3)与Sham比较,MCAO模型组小鼠海马CA1、CA3和皮层区组织损伤明显,皮层区神经元凋亡显著增加(p<0.01);与MCAO模型组比,Swe组的组织病理性损伤减轻,神经元的凋亡显著减少(p<0.01)。(4)与Sham组比较,MCAO模型组小鼠抗氧化酶的活性和GSH的水平显著减少(p<0.01),MDA含量显著增加(p<0.01);与MCAO模型组比,Swe组抗氧化酶的活性和GSH的水平显著增加(p<0.01,p<0.05),MDA的水平显著降低(p<0.01,p<0.05)。2.(1)与Control组比较,Vehicle组海马神经元存活率显著下降(p<0.01),LDH的漏出率显著增加(p<0.01);与Vehicle组比较,Swe(0.1、1、10μM)给药后,海马神经元的存活率呈剂量依赖性的增加(p<0.05,p<0.01,p<0.01),LDH漏出率显著降低(p<0.05,p<0.01)。(2)与Control组比较,Vehicle组神经元内ROS的水平显著上升(p<0.01),细胞内Ca浓度明显增高(p<0.01)、MMP显著降低(p<0.01);与Vehicle组比较,Swe(10μM)给药后显著降低胞内ROS水平(p<0.01),稳定了神经元内Ca浓度(p<0.01),提高MMP(p<0.05)。(3)与Vehicle组比较,Swe(10μM)组明显增加Nrf2与keap1的解离。(4)与Vehicle组比较,Swe(10μM)组促进Nrf2从胞质向核内转移。(5)与Vehicle组比较,Swe(10μM)组Nrf2蛋白的

关键词：獐牙菜苦苷缺血性脑损伤神经保护氧化应激 Keap1/Nrf2

獐牙菜苦苷的抗癫痫作用及对BDNF/ERK/CREB信号通路的影响

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獐牙菜苦苷的抗癫痫作用及对BDNF/ERK/CREB信号通路的影响

作者：张晓宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的:通过实验,考察獐牙菜苦苷(Swertaimarin,SWE)对匹鲁卡品(Pilocarpine,PILO)所诱发的癫痫小鼠的抗癫痫和神经保护作用,探讨BDNF/ERK/CREB信号通路对獐牙菜苦苷的抗癫痫及神经保护作用的影响。方法:用匹鲁卡品PILO(280mg/kg)腹腔注... 详细信息

目的:通过实验,考察獐牙菜苦苷(Swertaimarin,SWE)对匹鲁卡品(Pilocarpine,PILO)所诱发的癫痫小鼠的抗癫痫和神经保护作用,探讨BDNF/ERK/CREB信号通路对獐牙菜苦苷的抗癫痫及神经保护作用的影响。方法:用匹鲁卡品PILO(280mg/kg)腹腔注射的方法建立小鼠癫痫模型,随机分成正常组、PILO+SWE(50mg/kg、150mg/kg、450mg/kg)、PILO+SWE(100mg/kg,阈下剂量)+ERK抑制剂组(25mg/kg,阈下剂量)、(Sodium Valproate,VPA)阳性药物组。注射PILO后,进行行为学观察和脑电记录。行为学观察72小时后,取各组小鼠脑组织进行分子生物学和组织病理学检测。1.考察獐牙菜苦苷对匹鲁卡品诱发癫痫小鼠的抗癫痫及神经保护作用(1)行为学方法:注射PILO即后,进行行为学观察,根据Racine分级对小鼠的癫痫发作行为进行分析:对癫痫发作潜伏期、进入癫痫持续状态时间、癫痫发生率、小鼠死亡率进行记录分析。(2)脑电测量:注射PILO后,检测獐牙菜苦苷对小鼠大脑皮层脑电图的影响,并对脑电图进行分析,计算出波幅、总功率。(3)组织形态学方法:给予PILO72小时后,取材,进行Nissl染色、NEUN染色、TUNEL染色,对阳性细胞数进行统计分析。2.探讨獐牙菜苦苷对匹鲁卡品诱发癫痫小鼠的抗癫痫作用和BDNF/ERK/CREB信号通路的关系(1)采用Western blot方法检测獐牙菜苦苷对PILO诱发癫痫小鼠海马组织中BDNF、Trkb、ERK、p-ERK、CREB、p-CREB、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响。(2)采用Q-PCR方法检测獐牙菜苦苷对PILO诱发癫痫小鼠海马组织中BDNFmRNA、Trkb mRNA、ERKmRNA、CREBmRNA、Bcl-2mRNA、Caspase-3mRNA、Bax mRNA含量的影响。结果:1.獐牙菜苦苷对匹鲁卡品诱发癫痫小鼠的抗癫痫作用与模型组相比,SWE(150、450mg/kg)给药组小鼠的癫痫潜伏期显著延长(p獐牙菜苦苷对匹鲁卡品诱发癫痫小鼠的神经保护作用和BDNF/ERK/CREB信号通路的关系。SWE给药组(450mg/kg)与PILO模型组比较,可降低BDNF、p-ERK、CREB、p-CREB、Bax、Caspase-3蛋白在海马组织的表达(p獐牙菜苦苷(450mg/kg)给药组能抑制海马组织中BDNF mRNA、TrkbmRNA、ERKmRNA、CREBmRNA、BaxmRNA、Caspase-3 mRNA的表达(p獐牙菜苦苷对匹鲁卡品诱发癫痫小鼠具有明显的抗癫痫和神经保护作用,其机制可能与獐牙菜苦苷调节海马组织中BDNF/ERK/CREB信号通路有关。

关键词：獐牙菜苦苷匹鲁卡品抗癫痫 BDNF/ERK/CREB

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蒙药复方制剂壮伦-5汤质量标准提升研究

中国药品标准 2024年第2期25卷 141-146页

作者：安文源郝俊生嵇增云井佳楠盛雪王燕燕拉喜那木吉拉通辽市市场检验检测中心内蒙古通辽028000 内蒙古民族大学蒙医药学院内蒙古通辽028000 国家药品监督管理局中药(蒙药)质量控制重点实验室内蒙古通辽028000

目的:建立蒙药复方制剂壮伦-5汤处方中肋柱花药材的定性和定量方法,解决肋柱花材代被替代现象。方法:采用显微鉴别法观察粉末中花粉粒;獐牙菜苦苷对照品和肋柱花药材为对照,以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(12∶2∶2∶0.5)为展开剂进行薄层鉴... 详细信息

目的:建立蒙药复方制剂壮伦-5汤处方中肋柱花药材的定性和定量方法,解决肋柱花材代被替代现象。方法:采用显微鉴别法观察粉末中花粉粒;獐牙菜苦苷对照品和肋柱花药材为对照,以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(12∶2∶2∶0.5)为展开剂进行薄层鉴别研究;采用Agilent Eclipse Plus C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),0.2%磷酸溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,检测波长238 nm,以獐牙菜苦苷为对照品对不同厂家壮伦-5汤,进行含量测定。结果:12批壮伦-汤中8批次为肋柱花,2批次为紫花地丁,2批次为其它药材。8批壮伦-汤中獐牙菜苦苷含量范围较大,在0.2~11.7 mg·g^(-1)之间。结论:建立的鉴别方法简单、有效,含量测定方法稳定、专属性强,可为该制剂的监管提供技术支撑,对传统中蒙药制剂标准的提升具有借鉴作用。

关键词：蒙药壮伦-5汤獐牙菜苦苷质量评价 HPLC

獐牙菜苦苷在水中热转化产物脂溶性部分的化学成分继续研究

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獐牙菜苦苷在水中热转化产物脂溶性部分的化学成分继续研究

作者：姚远鹏云南中医学院

学位级别：硕士

獐牙菜苦苷是青叶胆（Swertia mileensis T.N.Ho et W.L.Shih）中主要的水溶性抗肝炎组分，也是大部分獐牙菜属药用植物中的主成分和活性成分。在其水的冷浸提液经冷冻干燥达到50%以上，经本课题组研究表明，青叶胆水煎剂中检测不出獐... 详细信息

獐牙菜苦苷是青叶胆（Swertia mileensis T.N.Ho et W.L.Shih）中主要的水溶性抗肝炎组分，也是大部分獐牙菜属药用植物中的主成分和活性成分。在其水的冷浸提液经冷冻干燥达到50%以上，经本课题组研究表明，青叶胆水煎剂中检测不出獐牙菜苦苷。本论文研究内容是在国家自然基金“獐牙菜苦苷在水中热转化产物与青叶胆抗肝炎功能的相关性研究”（项目编号：81060338）前期研究的基础上继续进行的工作。獐牙菜苦苷经过水煎煮之后转化产物有脂溶性和水溶性两个部分。前期本课题组成员已经从脂溶性部分分离得到17个化合物，其中大部分化合物具有一定的抗肝炎活性和免疫抑制活性。因此对于獐牙菜苦苷水中热转化产物的脂溶性部分的物质基础继续研究有一定的必要性。本论文利用硅胶、RP-18、MCI等柱材料从獐牙菜苦苷在水中热转化产物脂溶性部分分离得到15个单体，通过波谱分析等手段鉴定了其中的7个化合物。本研究表明，化合物獐牙菜内酯A、獐牙菜内酯E、獐牙菜内酯F等均是首次从獐牙菜苦苷水中热转化产物中分离得到。加上课题组成员之前从转化产物分离得到的化合物，查文献与从青叶胆乙醇热提取物中分离得到的化合物进行综合分析比较，发现有很大一部分的的化合物是一致的。我们有理由相信青叶胆热提取物中的獐芽菜内酯等化合物，极有可能就是其中主要成分表獐牙菜苦苷分解、转化而来，而并非植物本身体内的化合物。

关键词：獐牙菜苦苷转化产物脂溶性部分化学研究