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獐牙菜苦苷对PC12细胞氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用及机制

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中国药理学与毒理学杂志 2022年第2期36卷 90-97页

作者：王慧兰小兵郑萍王晴马琳杨佳美刘宁余建强苏州大学附属独墅湖医院(苏州大学医学中心) 江苏苏州215000 宁夏医科大学药学院宁夏银川750004 宁夏特色中医药协同创新中心宁夏药物创新与仿制药研究重点实验室宁夏银川750004

目的探讨獐牙菜苦苷(Swe)对PC12细胞氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤的保护作用及其机制。方法①将PC12细胞放入恒温缺氧箱内(缺氧缺糖)4 h,再置CO_(2)培养箱正常培养(再灌注)24 h构建PC12细胞OGD/R模型。再灌注同时分别给予溶剂(OGD/R模型组... 详细信息

目的探讨獐牙菜苦苷(Swe)对PC12细胞氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤的保护作用及其机制。方法①将PC12细胞放入恒温缺氧箱内(缺氧缺糖)4 h,再置CO_(2)培养箱正常培养(再灌注)24 h构建PC12细胞OGD/R模型。再灌注同时分别给予溶剂(OGD/R模型组)、Swe 0.1,1.0和10.0μmol·L^(-1)(Swe组)或阳性对照药尼莫地平12μmol·L^(-1)(尼莫地平组)。MTT法检测细胞存活率;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;DCFH-DA荧光探针检测PC12细胞内活性氧(ROS)含量;比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;Fluo-3 AM荧光探针测定PC12细胞内Ca^(2+)浓度,JC-1探针检测线粒体膜电位(MMP)水平。②构建PC12细胞OGD/R模型,再灌注同时分别给予溶剂(OGD/R模型组)、Swe 10μmol·L^(-1)(Swe组)或尼莫地平12μmol·L^(-1)(尼莫地平组),流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax蛋白表达及胱天蛋白酶3活化水平。结果①与细胞对照组相比,OGD/R模型组细胞存活率显著降低,LDH漏出率显著增加,Ca^(2+)浓度显著升高,MMP水平显著降低,ROS和MDA含量显著增加,SOD,CAT和GSH-Px活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,Bcl-2/Bax比值显著降低,胱天蛋白酶3活化水平显著增加(均P<0.01)。与OGD/R模型组相比,Swe 0.1μmol·L^(-1)组细胞SOD和CAT活性显著增强,胞内Ca^(2+)浓度及ROS和MDA含量显著降低(P<0.05);Swe 1和10μmol·L^(-1)组及尼莫地平组细胞存活率显著增加,LDH漏出率显著降低,Ca^(2+)浓度显著降低,MMP水平显著升高,ROS和MDA含量显著降低,SOD,CAT和GSH-Px活性显著增强(P<0.05,P<0.01)。②与OGD/R模型组相比,Swe 10μmol·L^(-1)组和尼莫地平组细胞凋亡率显著降低(P<0.01);Swe 10μmol·L^(-1)组Bcl-2/Bax比值显著增加,胱天蛋白酶3活化水平显著降低(P<0.01)。结论Swe对PC12细胞OGD/R损伤具有保护作用,其作用机制与抗氧化应激损伤和细胞凋亡有关。

关键词：獐牙菜苦苷 PC12细胞氧糖剥夺再灌注神经保护氧化应激

獐牙菜苦苷通过调控miR-351-5p表达对6-羟基多巴胺诱导PC12细胞帕金森模型损伤的影响

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中成药 2023年第11期45卷 3808-3812页

作者：周喜燕马晓维李彬张鑫鑫郭联于淼王群青岛市中医医院(市海慈医院)神经内科山东青岛266033

目的探讨獐牙菜苦苷对6-羟基多巴(6-OHDA)诱导PC12细胞损伤的影响及其分子机制。方法以100μmol/L 6-OHDA处理PC12细胞建立帕金森病细胞模型,将PC12细胞分为对照组、6-OHDA组、獐牙菜苦苷低、中、高剂量组(30、60、120μmol/L)、anti-mi... 详细信息

目的探讨獐牙菜苦苷对6-羟基多巴(6-OHDA)诱导PC12细胞损伤的影响及其分子机制。方法以100μmol/L 6-OHDA处理PC12细胞建立帕金森病细胞模型,将PC12细胞分为对照组、6-OHDA组、獐牙菜苦苷低、中、高剂量组(30、60、120μmol/L)、anti-miR-NC组、anti-miR-351-5p组、獐牙菜苦苷(120μmol/L)+miR-NC组、獐牙菜苦苷(120μmol/L)+miR-351-5p组。MTT法检测细胞存活率,采用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达,RT-qPCR法检测miR-351-5p表达。结果与对照组比较,6-OHDA组PC12细胞存活率、SOD活性、Bcl-2蛋白表达降低(P獐牙菜苦苷处理或干扰miR-351-5p表达可升高PC12细胞存活率、SOD活性、Bcl-2蛋白表达(P獐牙菜苦苷处理可下调6-OHDA诱导的miR-351-5p表达(P獐牙菜苦苷对6-OHDA诱导PC12细胞损伤的作用(P獐牙菜苦苷可通过下调miR-351-5p表达抑制6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡和氧化应激。

关键词：獐牙菜苦苷 PC12细胞帕金森病 miR-351-5p 6-羟基多巴胺(6-OHDA) 凋亡氧化应激

獐牙菜苦苷可减轻糖尿病大鼠的周围神经痛:基于抑制NOXS/ROS/NLRP3通路实验

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南方医科大学学报 2021年第6期41卷 937-941页

作者：王保姚嘉茵尧新华劳俊铭刘栋陈陈燕鲁义广州医科大学附属中医医院麻醉科广东广州510130 中山大学附属第六医院消化内科广东广州510655

目的基于NOXS/ROS/NLRP3信号通路探讨獐牙菜苦苷对糖尿病周围神经痛(DPN)大鼠的治疗作用及分子机制。方法采用链脲佐菌素(STZ)法构建大鼠模型,造模成功后第1、7、14天分别按大鼠体质量腹腔注射干预制剂。将32只SD大鼠随机分为4组:空白... 详细信息

目的基于NOXS/ROS/NLRP3信号通路探讨獐牙菜苦苷对糖尿病周围神经痛(DPN)大鼠的治疗作用及分子机制。方法采用链脲佐菌素(STZ)法构建大鼠模型,造模成功后第1、7、14天分别按大鼠体质量腹腔注射干预制剂。将32只SD大鼠随机分为4组:空白对照组、DPN模型组、獐牙菜苦苷治疗组、NOXS抑制剂治疗组。空白对照组:给予10 mL/kg生理盐水;DPN模型组:给予10 mL/kg生理盐水;獐牙菜苦苷治疗组:给予5 mg/kg獐牙菜苦苷;NOXS抑制剂治疗组:给予10 mL/kg二苯基氯化碘盐。在给药完毕30 min后,对各组大鼠进行触觉过敏试验,采用ELISA检测NOXS/ROS/NLRP3以及炎性因子表达水平,采用Western blot方法检测各组大鼠脊髓组织的NOXS/ROS/NLRP3表达水平。结果与空白对照组比较,DPN模型组大鼠在造模后出现痛觉过敏(P獐牙菜苦苷干预后有效减轻触觉过敏(P獐牙菜苦苷对炎性因子及NOXS/ROS/NLRP3通路各因子的表达影响与NOXS抑制剂治疗组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论獐牙菜苦苷有效缓解触觉过敏,治疗DPN,通过抑制NOXs/ROS/NLRP3信号通路表达,纠正DPN炎性因子失衡是其分子机制之一。

关键词：獐牙菜苦苷糖尿病周围神经痛 NLRP3 炎性平衡

獐牙菜苦苷的抗炎活性及其对NF-κB通路相关因子p65和IKK-α表达的影响

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中国现代应用药学 2018年第12期35卷 1817-1820页

作者：王君燕童晔玲赵文慧浙江医院杭州310030 浙江省中医药研究院杭州310007

目的观察獐牙菜苦苷(Swertiamarin)的抗炎活性以及对核转录因子-κB(NF-κB)通路的调控作用。方法采用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7构建体外炎症模型,CCK-8法观察獐牙菜苦苷对细胞活性的影响,ELISA法检测其对炎症相关因子肿瘤... 详细信息

目的观察獐牙菜苦苷(Swertiamarin)的抗炎活性以及对核转录因子-κB(NF-κB)通路的调控作用。方法采用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7构建体外炎症模型,CCK-8法观察獐牙菜苦苷对细胞活性的影响,ELISA法检测其对炎症相关因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)表达的影响,RT-PCR法测定其对NF-κB通路相关因子p65和IKK-α的mRNA表达的影响。结果 100μg·mL^(-1)獐牙菜苦苷能降低细胞存活率,3.125～50μg·mL^(-1)浓度对细胞存活率无影响;25～50μg·mL^(-1)獐牙菜苦苷能降低炎症相关因子TNF-α及IL-6的释放;12.5～50μg·mL^(-1)獐牙菜苦苷能抑制p65的mRNA表达,50μg·mL^(-1)獐牙菜苦苷能抑制IKK-α的mRNA表达。结论獐牙菜苦苷对LPS诱导的炎症模型中TNF-α、IL-6的生成具有抑制作用,其机制可能与抑制NF-κB通路相关因子p65、IKK-α的表达有关。

关键词：獐牙菜苦苷巨噬细胞抗炎活性核转录因子-κB

獐牙菜苦苷通过抑制NF-κB、NLRP3炎症小体信号通路发挥对佐剂性关节炎大鼠的保护作用

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药物生物技术 2021年第2期28卷 123-128页

作者：王新强吴良邦章月红顾增辉中国人民解放军联勤保障部队第903医院骨三科浙江杭州310004

研究獐牙菜苦苷(Swe)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的抗炎机制。60只SD大鼠随机分为6组,正常组、模型组、Swe低、中、高剂量组、甲氨蝶呤(MTX)组。AA模型构建方法为大鼠右后趾皮内注射完全弗氏佐剂(CFA) 0.1 m L。各组给药剂量:Swe低、中、高... 详细信息

研究獐牙菜苦苷(Swe)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的抗炎机制。60只SD大鼠随机分为6组,正常组、模型组、Swe低、中、高剂量组、甲氨蝶呤(MTX)组。AA模型构建方法为大鼠右后趾皮内注射完全弗氏佐剂(CFA) 0.1 m L。各组给药剂量:Swe低、中、高剂量组分别是25,50,100 mg/kg,MTX组为2 mg/kg,空白组与模型组给予等量的生理盐水,第18 d各组按照给药剂量灌胃给药,1次/d,连续给药12 d。酶联免疫试剂盒(ELISA)测定大鼠血清TNF-α、IL-1β水平;荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)测定大鼠滑膜组织TNF-α、IL-1β的mRNA相对表达量;Western blot法检测大鼠NLRP3、NF-κB通路相关蛋白表达。与正常组比较,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β水平、滑膜组织TNF-α、IL-1β的mRNA相对表达量、p-NF-κB p65、NLRP3、ASC蛋白表达均增多,差异具有统计学意义(P <0.01)。与模型组比较,Swe各剂量组AA大鼠的足体积、关节炎指数评分降低。与模型组比较,Swe中高剂量组TNF-α、IL-1β、TNF-α、IL-1βmRNA的水平降低,差异具有统计学意义(P <0.05)。与模型组比较,Swe中高剂量组滑膜组织p-NF-κB p65、NLRP3、ASC水平明显下调,差异具有统计学意义(P <0.05)。Swe通过抑制NLRP3炎症小体、NF-κB信号通路,发挥对AA大鼠的保护作用。

关键词：獐牙菜苦苷佐剂性关节炎类风湿性关节炎抗炎机制 NF-κB信号通路 NLRP3炎症小体信号通路

獐牙菜苦苷对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤的保护作用及其作用机制研究

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獐牙菜苦苷对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤的保护作用及其作用机制研究

作者：杨方方湖北中医药大学

学位级别：硕士

目的:查阅参考獐牙菜苦苷与脑缺血再灌注损伤的相关文献,建立人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y缺氧缺糖/复氧（OGD/R）损伤模型,研究獐牙菜苦苷对OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞的潜在神经保护作用及作用机制。另建立獐牙菜苦苷高效液相色谱分析方法... 详细信息

目的:查阅参考獐牙菜苦苷与脑缺血再灌注损伤的相关文献,建立人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y缺氧缺糖/复氧（OGD/R）损伤模型,研究獐牙菜苦苷对OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞的潜在神经保护作用及作用机制。另建立獐牙菜苦苷高效液相色谱分析方法并对其进行方法学考察,研究其溶解性和稳定性的影响因素,为深入开发利用獐牙菜苦苷提供实验基础和药理基础。方法:1.构建人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的OGD/R模型并随机分为:正常组（Control）、OGD/R损伤模型组（Vehicle）、OGD/R损伤+STM组（120、60、30μM）共计5组;2.用CCK-8法检测不同浓度（30μM,60μM和120μM）的STM作用于SH-SY5Y细胞24小时后的细胞毒性;利用CCK-8法检测各组SH-SY5Y细胞的细胞活力;3.用Annexin V/PI法测定各组凋亡细胞的比例;4.采用JC-1探针检测各组细胞线粒体膜电位（MMP）的变化;5.采用DCFH-DA染色法检测各组细胞内活性氧（ROS）生成水平;6.观察獐牙菜苦苷对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤的影响,采用Western blot方法对细胞内TLR4/PARP1/NF-κB通路相关蛋白的表达水平进行测定;7.采用高效液相测定STM在Hank’s平衡盐溶液中的溶解性与稳定性,为STM的体内吸收与代谢研究奠定基础。结果:1.结果显示,未经处理的对照组和的STM预处理组的细胞活力无统计学意义,表明本研究中选择的STM（30,60和120μM）浓度不具细胞毒性;2.CCK-8检测显示,OGD/R组细胞活力明显低于对照组（p＜0.01）,STM（30、60、120μM）预处理组细胞活力明显高于OGD/R组;3.细胞经OGD/R处理后存活率下降,STM（30、60、120μM）预处理可使缺氧缺糖4h、复氧24h的SH-SY5Y细胞活力增加（p＜0.01）;4.OGD/R降低了SH-SY5Y细胞的ΔΨm,STM（30、60、120μM）预处理使损伤细胞的ΔΨm明显升高;5.OGD/R显著提高了SH-SY5Y细胞内的ROS水平。STM（30、60和120μM）预处理抑制了OGD/R诱导的细胞内ROS的产生,减少了细胞凋亡;6.OGD/R主要诱导TLR4、MyD88、NF-κB p65和PARP1在细胞中的表达,STM预处理可降低TLR4、MyD88、NF-κB p65和PARP1的表达;7.STM在pH=3、pH=5和pH=7.4的HBSS溶液环境中稳定性良好,而在pH=9和pH=11的碱性环境中稳定性较差,光照和温度对STM稳定性无明显影响。结论:STM能够减轻OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞损伤,与减少细胞ROS水平和抑制细胞凋亡有关;STM在碱性HBSS溶液环境稳定性较差。

关键词：獐牙菜苦苷 OGD/R SH-SY5Y细胞溶解性与稳定性

獐牙菜苦苷对大鼠胆汁淤积性肝损伤肝纤维化的抑制作用

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世界华人消化杂志 2016年第23期24卷 3482-3487页

作者：卫双连汪杰李德民黄石市爱康医院消化内科湖北省黄石市435000 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科湖北省武汉市430030

目的:探讨獐牙菜苦苷对大鼠胆汁淤积性肝损伤肝纤维化进程的影响.方法:30只♂幼年SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)、空白治疗模型组(n=10)及獐牙菜苦苷治疗组(n=10),利用改良ANIT法构建大鼠胆汁淤积性肝损伤及肝纤维化模型,造模期间给... 详细信息

目的:探讨獐牙菜苦苷对大鼠胆汁淤积性肝损伤肝纤维化进程的影响.方法:30只♂幼年SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)、空白治疗模型组(n=10)及獐牙菜苦苷治疗组(n=10),利用改良ANIT法构建大鼠胆汁淤积性肝损伤及肝纤维化模型,造模期间给予獐牙菜苦苷治疗.实验终点以大鼠肝功能指标、肝纤维化血清学指标、肝组织纤维化指标、肝纤维化病理学指标等以判定獐牙菜苦苷的治疗效果,并利用Western blot法检测大鼠肝脏膜转运蛋白Mrp3、Mrp4的表达水平变化.结果:与空白治疗模型组相比,獐牙菜苦苷治疗组大鼠肝功能指标包括谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、直接胆红素、碱性磷酸酶及谷氨酰转肽酶,肝纤维指标包括血清透明质酸、层黏连蛋白、Ⅳ胶原及Ⅲ型前胶原,肝组织纤维化指标肝组织羟脯氨酸含量,病理学指标包括炎症活动度及纤维化程度SSS计分等均有显著改善.Western blot检测结果提示獐牙菜苦苷可显著提高模型大鼠肝脏膜转运蛋白Mrp3、Mrp4的表达水平.结论:獐牙菜苦苷可抑制大鼠胆汁淤积性肝损伤肝纤维化进程.

关键词：獐牙菜苦苷胆汁淤积肝损伤肝纤维化大鼠

獐牙菜苦苷对MGC803细胞的体内外抑制作用

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胃肠病学 2019年第2期24卷 86-89页

作者：杨伟强万伯顺常庆上海市嘉定区中心医院外科 201800 上海市嘉定区中心医院中心实验室 201800

背景:胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,抑制胃癌细胞增殖是抗癌药物研发的关键。目的:研究獐牙菜苦苷在体内外对MGC803细胞增殖的影响。方法:MGC803细胞予以不同浓度獐牙菜苦苷(0、30、60、90μg/mL)培养48h,以MTT法检测细胞活性,Annexin V-... 详细信息

背景:胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,抑制胃癌细胞增殖是抗癌药物研发的关键。目的:研究獐牙菜苦苷在体内外对MGC803细胞增殖的影响。方法:MGC803细胞予以不同浓度獐牙菜苦苷(0、30、60、90μg/mL)培养48h,以MTT法检测细胞活性,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率,ELISA法检测Bax、Bcl-2含量。建立BALB/c裸鼠MGC803移植瘤模型,尾静脉注射不同浓度獐牙菜苦苷(0、40、60、80mg/kg),肿瘤体积长至1000mm^3时处死裸鼠,记录裸鼠开始和最终的体质量,以免疫组化法检测Ki-67蛋白表达。结果:与对照组相比,不同浓度獐牙菜苦苷可有效抑制MGC803细胞增殖,诱导细胞凋亡,Bax含量明显升高,Bcl-2含量明显降低(P獐牙菜苦苷组的肿瘤体积较对照组明显缩小(P獐牙菜苦苷是一种安全有效的抗胃癌的植物单体。

关键词：獐牙菜苦苷胃肿瘤细胞增殖细胞凋亡

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獐牙菜苦苷药理作用的研究进展

临床医学进展 2023年第11期13卷 17822-17827页

作者：孔莉王献珍青海大学附属医院烧伤整形外科青海西宁

獐牙菜苦苷是多种植物的活性成分之一,综述其在药理作用各方面的研究现状。

关键词：獐牙菜苦苷药理作用综述