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猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国预防兽医学报 2008年第11期30卷 901-905页

作者：华秋东吴志军姜成刚沈楠陈维多相文华周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 哈药集团黑龙江哈尔滨150018

利用PCR技术从质粒pSHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a(+)构建重组质粒pET32a-p27,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化定量后的表达产物免疫小鼠... 详细信息

利用PCR技术从质粒pSHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a(+)构建重组质粒pET32a-p27,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化定量后的表达产物免疫小鼠,制备单克隆抗体。结果显示,gag基因的p27相应片段为763bp,其表达产物相对分子量为46ku。经镍柱纯化,获得目的蛋白p27纯度可达90%以上。利用淋巴细胞杂交瘤技术获得5株稳定分泌抗p27的单克隆抗体细胞株,分别命名为1A5、1C7、3C2、2D12、3D12。5株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1∶12800、1∶25600、1∶819200、1∶51200和1∶409600。免疫球蛋白类型均为IgG1型,轻链均为λ链。Western blot和IFA试验结果表明所获得的单克隆抗体均对病原检测具有很高的特异性,为进一步开发SIV早期诊断试剂盒奠定了基础。

关键词：猴免疫缺陷病毒 p27蛋白单克隆抗体

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猴免疫缺陷病毒和艾滋病

微生物学通报 1995年第4期22卷 232-235页

作者：王用楫卫生部北京生物制品研究所

猴免疫缺陷病毒和艾滋病王用楫（卫生部北京生物制品研究所，北京１０００２４）１前言猴免疫缺陷病毒（ｓｉｍｉａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅ－ｎｃｙｖｉｒｕｓ，ＳＩＶ）与艾滋病（ＡＩＤＳ）的病原体人免疫缺陷病毒（ｈｕｍａｎ... 详细信息

猴免疫缺陷病毒和艾滋病王用楫（卫生部北京生物制品研究所，北京１０００２４）１前言猴免疫缺陷病毒（ｓｉｍｉａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅ－ｎｃｙｖｉｒｕｓ，ＳＩＶ）与艾滋病（ＡＩＤＳ）的病原体人免疫缺陷病毒（ｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖ...

关键词：艾滋病艾滋病毒猴免疫缺陷病毒

猴免疫缺陷病毒抗体免疫梳检测方法的建立及应用

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中国实验动物学报 2018年第2期26卷 217-223页

作者：李丹丹王绥家陈平亚张体银杨俊兴刘忠梅高慎阳海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心海口570311 福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心福州350001 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心广东深圳518001 黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心哈尔滨150001 辽宁医学院畜牧兽医学院辽宁锦州121001

目的以基因工程技术制备猴免疫缺陷病毒(SIV)的SIV30蛋白作为抗原诊断试剂,建立免疫梳方法(IC)用于特异性检测实验猴血清中抗SIV的抗体Ig G。方法应用原核表达载体p GEX-4T-1构建SIV SIV30基因的重组表达质粒,并在感受态细胞BL21中表达... 详细信息

目的以基因工程技术制备猴免疫缺陷病毒(SIV)的SIV30蛋白作为抗原诊断试剂,建立免疫梳方法(IC)用于特异性检测实验猴血清中抗SIV的抗体Ig G。方法应用原核表达载体p GEX-4T-1构建SIV SIV30基因的重组表达质粒,并在感受态细胞BL21中表达,将该重组蛋白纯化后作为诊断抗原,建立免疫梳标准化检测程序,并应用于临床检测。结果最佳抗原包被量为0.02 mg/m L;制备好的IC均能够特异性检测到相应的SIV阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应,表明该检测方法特异性强;敏感性分析结果表明,SIV30蛋白能够敏感地检测到1∶400倍稀释的SIV阳性血清;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测3次,变异系数(CV)均小于10%;利用该检测方法在对10份可疑猴血清样品进行检测,IC与ELISA检测结果一致率为100.0%,Kappa=1.000。结论原核表达了SIV30蛋白,制备了IC,并应用于临床检测。该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。

关键词：猴免疫缺陷病毒 SIV30蛋白免疫梳快速检测方法抗体

猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体结合抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第9期33卷 738-741页

作者：李亮林跃智那雷汤艳东吕晓玲周建华曲娟娟东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定抗猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27单克隆抗体(MAb)p27-A5、p27-C7和p27-D2所识别的抗原表位,本研究通过间接ELISA法相加试验对这3株MAbs结合抗原表位进行初步分析,并利用部分重叠的短肽对MAbs的结合抗原表位进行鉴定。结果表明p2... 详细信息

为鉴定抗猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27单克隆抗体(MAb)p27-A5、p27-C7和p27-D2所识别的抗原表位,本研究通过间接ELISA法相加试验对这3株MAbs结合抗原表位进行初步分析,并利用部分重叠的短肽对MAbs的结合抗原表位进行鉴定。结果表明p27-C7和p27-A5的结合抗原表位位于p27蛋白的aa61～aa76(氨基酸序列为61SEGCTPYDINQMLNCV76);p27-D2的结合抗原表位则位于aa191～aa206(氨基酸序列为191EQTDAAVKNWMTQTLL206)。该结果为进一步深入了解p27的抗原特性和建立该蛋白的检测方法奠定了基础。

关键词：猴免疫缺陷病毒 p27蛋白单克隆抗体表位鉴定

猴免疫缺陷病毒实时荧光环介导等温扩增快速检测方法的建立

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中国动物传染病学报 2017年第5期25卷 37-41页

作者：刘助红王静黄碧洪尹雪琴张钰郭鹏举黄韧广东省实验动物监测所广东省实验动物重点实验室广州510663

以猴免疫缺陷病毒(Simian immunodeficiency virus,SIV)的核心蛋白Gag区域的部分保守基因序列为检测靶标,通过软件设计内、外引物和环引物,借助恒温荧光扩增仪建立SIV实时荧光环介导等温扩增快速检测方法(real-time loop-mediated isoth... 详细信息

以猴免疫缺陷病毒(Simian immunodeficiency virus,SIV)的核心蛋白Gag区域的部分保守基因序列为检测靶标,通过软件设计内、外引物和环引物,借助恒温荧光扩增仪建立SIV实时荧光环介导等温扩增快速检测方法(real-time loop-mediated isothermal amplification,Realamp),根据有无"S"型扩增曲线判断检测结果。Realamp方法对含有猴免疫缺陷病毒目标片段的质粒标准品的检测灵敏度为300 copies/μL,对猴类的其他常见病原如猴D型逆转录病毒、猴T淋巴细胞趋向性病毒、猴B病毒等无非特异性扩增。通过33份临床样本的检测,Realamp检出的阳性2例,qPCR检出的阳性率为1例,两种检测方法的符合率为97%。本研究建立的Realamp检测技术所需设备简单、反应效率快、检测灵敏度高和特异性强,可用于偏远地区猴养殖单位相关病原的检测。

关键词：猴免疫缺陷病毒实时荧光环介导等温扩增技术检测

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猴免疫缺陷病毒（SIV）猴模型的建立

中国实验动物学报 1994年第2期2卷 94-101页

作者：卢耀增吴小闲涂新明何伏秋张永蓉苏树芸陈中潘勇宋怀燕施慧君佟巍刘增华刘亚莉朱华丛王欣秦川魏强贾锐胜中国医学科学院实验动物研究所

应用ＳＩＶｍａｃ毒株感染中国恒河猴１３只，感染剂量为病毒液的１０－１～２×１０－５；感染食蟹猴４只，感染剂量为１０－２。感染后２周出现各种症状和体征如皮疹，浅表淋巴结肿大，脾肿大，血象白细胞总数下降，出现异常淋巴细胞... 详细信息

应用ＳＩＶｍａｃ毒株感染中国恒河猴１３只，感染剂量为病毒液的１０－１～２×１０－５；感染食蟹猴４只，感染剂量为１０－２。感染后２周出现各种症状和体征如皮疹，浅表淋巴结肿大，脾肿大，血象白细胞总数下降，出现异常淋巴细胞和中性白细胞。感染后期Ｔ４下降，Ｔ４、Ｔ８比例倒置等。从外周血淋巴细胞和血浆分离病毒阳性，血清抗体上升。淋巴结组织切片呈规律性改变，即淋巴滤泡增生－滤泡耗竭－淋巴组织耗竭或逐渐恢复。感染后２．５个月有急性死亡病例，以后呈散在死亡例，尸检还发现机遇性感染如肺寄生虫，肺、肝巨细胞病毒感染等。

关键词：感染后 SIV 染剂猴免疫缺陷病毒剂量白细胞总数脾肿大毒株急性死亡寄生虫

猴免疫缺陷病毒（SIV）分离鉴定方法的实验研究

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中国实验动物学报 1994年第1期2卷 38-42页

作者：涂新明吴小闲何伏秋丛喆中国医学科学院实验动物研究所，北京

人，外周血淋巴细胞(HuPBLs)和CEMx174细胞分离SIV的分离率均为100％，但细胞病变(CPE)出现时间及CPE程度和IFA强度均不一样，HuPBLs细胞CPE出现较快，而CPE程度和IFA强度均不如CEMx174细胞明显；CEMx174细胞CPE出现较晚，但CPE明显，IF... 详细信息

人，外周血淋巴细胞(HuPBLs)和CEMx174细胞分离SIV的分离率均为100％，但细胞病变(CPE)出现时间及CPE程度和IFA强度均不一样，HuPBLs细胞CPE出现较快，而CPE程度和IFA强度均不如CEMx174细胞明显；CEMx174细胞CPE出现较晚，但CPE明显，IFA强度大．不同的标本、不同的时期，同一标本不同的接种量，病毒分离的结果均表现出规律性变化，说明方法学的可靠性，同时也说明两种细胞均可用于SIV的病毒分离。

关键词： SIV 外周血淋巴细胞猴免疫缺陷病毒 IFA 标本 PBL 实验研究病毒分离分离鉴定细胞病变

猴免疫缺陷病毒SIV核心蛋白基因在大肠杆菌中表达的研究

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中国实验动物学报 1995年第1期3卷 12-15页

作者：施慧君何伏秋吴小闲中国医学科学院实验动物研究所

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ），直接从ＳＩＶ感染的猴艾滋病（ＳＡＩＤＳ）模型猴的外周血淋巴细胞总ＤＮＡ中扩增出７６７ｂｐ的ＳＩＶ核心蛋白Ｐ２７基因片段。扩增产物经ＥｃｏＲＩ及ＳａｌＩ双酶切后，克隆入相同酶切的表达质粒ｐＢ... 详细信息

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ），直接从ＳＩＶ感染的猴艾滋病（ＳＡＩＤＳ）模型猴的外周血淋巴细胞总ＤＮＡ中扩增出７６７ｂｐ的ＳＩＶ核心蛋白Ｐ２７基因片段。扩增产物经ＥｃｏＲＩ及ＳａｌＩ双酶切后，克隆入相同酶切的表达质粒ｐＢＶ２２０中，获得含ＳＩＶ核心蛋白基因片段的重组质粒ｐＢＶＳＧ，并进行ＤＮＡ序列分析。用该重组质粒转化大肠杆菌ＤＨ５ａ经筛选、增殖及４２℃温度诱导，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明外源基因表达蛋白含量占菌体总蛋白１４．５％，Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ证实表达产物能被ＳＩＶＰ２７单克隆抗体及ＳＡＩＤＳ模型猴血清中特异性抗体识别。

关键词：猴免疫缺陷病毒核心蛋白基因大肠杆菌表达

Allglo探针与TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测猴免疫缺陷病毒的比较

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南方医科大学学报 2016年第11期36卷 1496-1501页

作者：吴胜男谢延峥刘翠华何金洋广州中医药大学热带医学研究所广东广州510405

目的比较Allglo探针和TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测SIV的灵敏度下限和重复性。方法把SIV标准品进行梯度稀释成6个浓度,每个浓度同时提取12个标本进行批内差异分析,每个标本提取12次进行批间差异分析之后进行逆转录并用TaqMan探针和All... 详细信息

目的比较Allglo探针和TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测SIV的灵敏度下限和重复性。方法把SIV标准品进行梯度稀释成6个浓度,每个浓度同时提取12个标本进行批内差异分析,每个标本提取12次进行批间差异分析之后进行逆转录并用TaqMan探针和Allglo探针进行定量PCR检测。批内差异分析者每个标本同时进行逆转录和上机检测,批间差异分析者分12次进行逆转录和检测,对这两种探针的PCR结果利用ABI7300定量PCR仪所携带的软件和相关的统计学方法进行分析。结果 TaqMan探针和Allglo探针法检测SIV标准品的灵敏度下限均为50 copies/m L。重复性结果显示:批内结果差异分析显示Allglo探针法最大变异系数为0.63%,最小变异系数为0.33%,TaqMan探针法最大变异系数为1.33%,最小变异系数为0.2%;批间结果差异分析显示Allglo探针法最大变异系数为1.77%,最小变异系数为0.95%,TaqMan探针法最大变异系数为1.86%,最小变异系数为1.03%。结论在荧光定量RT-PCR法检测猴免疫缺陷病毒中,Allglo探针法可能优于TaqMan探针法。

关键词： Allglo探针 TaqMan探针猴免疫缺陷病毒实时荧光定量PCR