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利巴韦林对猫细小病毒诱导的细胞凋亡抑制作用

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黑龙江畜牧兽医（下半月） 2015年第8期 122-125,217,218页

作者：胡莲美郑良焰余文兰李英潘家强吴玄光唐兆新华南农业大学兽医学院广州510642

为了研究利巴韦林对感染猫细小病毒(FPV)细胞的影响,试验将猫肾细胞(F81细胞)随机分为对照组、病毒组、药物组,采用MTT法检测细胞的生长曲线,Hochest 33258染色观察细胞的细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期。结果表明:Hochest 33258染... 详细信息

为了研究利巴韦林对感染猫细小病毒(FPV)细胞的影响,试验将猫肾细胞(F81细胞)随机分为对照组、病毒组、药物组,采用MTT法检测细胞的生长曲线,Hochest 33258染色观察细胞的细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期。结果表明:Hochest 33258染色试验中药物组与病毒组差异不显著(P>0.05);药物组细胞的增殖活性始终高于病毒组,但低于对照组;流式细胞仪检测利巴韦林治疗后48小时G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞变化不大;72小时G2/M期细胞增多;药物组与病毒组细胞的流式检测在G1峰的左侧均出现典型的亚G1峰,但各时间点药物组细胞的凋亡指数均明显低于病毒组。说明利巴韦林能抑制FPV诱导的细胞凋亡,具有一定的治疗指导意义。

关键词：猫细小病毒利巴韦林细胞凋亡细胞周期 F81细胞

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马抗猫细小病毒特异性免疫球蛋白的研制

中国畜牧兽医 2010年第1期37卷 34-39页

作者：饶家辉王玉平雷连成吉林大学畜牧兽医学院长春130062

由猫细小病毒(feline parvovirus,FPV)引起的猫泛白细胞减少症目前仍呈上升势头,发病率和死亡率较高。迄今国内外尚未见到较理想的治疗药物。本试验选用马作为免疫动物,收集血清。通过对传统正辛酸—硫酸铵沉淀法进行优化,用Protein A... 详细信息

由猫细小病毒(feline parvovirus,FPV)引起的猫泛白细胞减少症目前仍呈上升势头,发病率和死亡率较高。迄今国内外尚未见到较理想的治疗药物。本试验选用马作为免疫动物,收集血清。通过对传统正辛酸—硫酸铵沉淀法进行优化,用Protein A亲和层析、胃蛋白酶消化,获得精制抗猫瘟免疫球蛋白(IgG)生物制剂。对该生物制剂进行物理性状、热原性、安全性、无菌检验、SDS-PAGE纯度鉴定、血凝抑制试验、双向琼脂扩散试验、细胞中和试验和动物治疗试验。结果表明,该生物制剂为略带乳光的澄明液体,溶液稳定无分层,无可见颗粒,无微生物污染,保存期长;对家兔、小白鼠、豚鼠等试验动物安全稳定、无毒副作用;其热原性符合规定,F(ab′)2分子质量约为110 ku,中和效价在128倍以上,对5只人工感染FPV猫进行治疗,治愈率达100%,证实该制品对猫泛白细胞减少症有很好的治疗效果。

关键词：猫细小病毒免疫球蛋白制备

河南地区猫细小病毒RC-2021株的分离鉴定及其灭活后免疫效果研究

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中国动物传染病学报 2023年

作者：徐彦召宋会帅申月华钟秋月董亚楠张伟涛胡建和王青河南科技学院动物科技学院开封正大农牧发展有限公司

为探究河南地区猫细小病毒(Feline panleukopenia virus， FPV)的流行情况并对其流行毒株的遗传变异和演化规律进行分析，并评估其灭活疫苗的免疫效果，本研究对采集的23 份疑似由FPV引起的猫白细胞减少症的临床样品进行了PCR鉴定，并对... 详细信息

为探究河南地区猫细小病毒(Feline panleukopenia virus， FPV)的流行情况并对其流行毒株的遗传变异和演化规律进行分析，并评估其灭活疫苗的免疫效果，本研究对采集的23 份疑似由FPV引起的猫白细胞减少症的临床样品进行了PCR鉴定，并对其VP2基因进行同源性和遗传进化分析，同时获得对应样品的全基因序列。将鉴定为阳性的对应样品无菌接种于猫肾细胞(Crandell Reese Feline Kidney， CRFK)细胞并盲传3代进行病毒的分离和鉴定。利用分离到的病毒进行动物回归试验并制备灭活疫苗免疫试验猫进行安全性和免疫原性评价。结果表明，从23 份病料中检测到3 份FPV阳性样品，接种了阳性样品的CRFK细胞出现明显的细胞病变，TCID50值为10-6.26/0.1 mL，透射电镜下观察到大小约20 nm的病毒粒子。分离株基因全长4 442 bp，与下载的其他株病毒基因序列同源性在98.3%-99.8%之间，氨基酸序列比较保守，分离株病毒与中国哈尔滨分离的毒株FPV-XJ1亲缘关系比较接近。该毒株为强毒株，试验猫出现明显的临床症状，病理剖检病变明显，将病毒灭活制备疫苗后免疫猫未导致其出现不良反应，免疫血清经1∶200稀释后能够中和分离株病毒对CRFK细胞的感染，细胞形态完整。本研究成功分离了一株强毒猫细小病毒株并制备了相应的灭活疫苗，丰富了国内FPV的流行病学资料和流行毒株信息，可用于评价疫苗的免疫效果，所制备的病毒灭活制品可有效预防猫泛白细胞减少症。

关键词：猫细小病毒 IFA 分离鉴定遗传进化树动物回归试验灭活疫苗

东北三省部分地区猫细小病毒VP2基因进化分析

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黑龙江畜牧兽医 2019年第4期 69-72,75页

作者：张雪竹王海军孙明洁杜帅帅孙伯涵王开胡桂学吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林省野生动物救护繁育中心长春130122

为了研究我国东北三省部分地区猫细小病毒(Feline parvovirus, FPV)基因的遗传进化情况,试验用PCR方法对我国东北地区25份猫肛拭子进行检测,并对检测结果呈阳性的猫进行细小病毒VP2基因克隆测序,然后进行遗传进化分析。结果表明:经PCR... 详细信息

为了研究我国东北三省部分地区猫细小病毒(Feline parvovirus, FPV)基因的遗传进化情况,试验用PCR方法对我国东北地区25份猫肛拭子进行检测,并对检测结果呈阳性的猫进行细小病毒VP2基因克隆测序,然后进行遗传进化分析。结果表明:经PCR扩增有10份为FPV阳性,其VP2基因序列与标准株M38246和疫苗株EU498681及EU498680的相似性达99.1%以上,有9株属于G1群,1株属于G2群。说明东北地区FPV基因型主要以G1群为主。

关键词：猫细小病毒 VP2基因遗传进化基因型东北三省

山东部分地区猫细小病毒、疱疹病毒、杯状病毒流行情况调查

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中国兽医杂志 2020年第11期56卷 81-84,I0008页

作者：曲雪婷王森原昆鹏崔月瑛齐昊南孙强张本清陶春霖尹燕博青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 橘子宠物医院山东青岛266061 青岛博隆基因生物工程有限公司山东青岛266041 瑞鹏宠物医院上海杨浦200082 青岛市即墨区畜牧业发展服务中心山东青岛266200 青岛市黄岛区农业局山东青岛266400 青岛博隆实验动物有限公司山东青岛266200

为了解山东省猫细小病毒(FPV)、猫疱疹病毒1型(FHV-1)和猫杯状病毒(FCV)的流行情况,对来自5个不同地区的380份口鼻、粪便拭子进行三重PCR检测,同时对这3种病毒进行分离。结果显示,FPV的PCR检出阳性率为27.9%,FHV为5%,FCV为13.4%。对不... 详细信息

为了解山东省猫细小病毒(FPV)、猫疱疹病毒1型(FHV-1)和猫杯状病毒(FCV)的流行情况,对来自5个不同地区的380份口鼻、粪便拭子进行三重PCR检测,同时对这3种病毒进行分离。结果显示,FPV的PCR检出阳性率为27.9%,FHV为5%,FCV为13.4%。对不同来源的拭子进行统计发现,来自宠物医院样本的FPV PCR检出阳性率最高,为43.8%;来自养猫户样本的FHV-1 PCR检出阳性率最高,为6.9%;来自流浪猫样本的FCV PCR检出阳性率最高,为44.1%。本调查分离的病毒为诊断试剂及疫苗研究打下了良好的基础。

关键词：猫细小病毒猫疱疹病毒猫杯状病毒流行情况调查病毒分离

华南虎疑似感染猫细小病毒的PCR鉴定与病理组织学检查

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中国动物传染病学报 2017年第6期25卷 43-47页

作者：黄翠琴范克伟余佳傅文源林开雄杨守深林青青杨小燕无龙岩学院生命科学学院龙岩364012 福建省生猪疫病防控工程技术研究中心龙岩364012 福建农林大学动物科学学院福州350001 福建梅花山华南虎繁育研究所龙岩364201

对1例疑似感染猫细小病毒的死亡华南虎幼虎进行病理剖检、病原PCR检测和病理组织切片观察。结果表明,死亡幼虎的肠道组织中能检测出猫细小病毒核酸;病理组织切片镜检结果显示,死亡幼虎胃、肠粘膜出血,大量粘膜上皮细胞坏死、脱落,严重... 详细信息

对1例疑似感染猫细小病毒的死亡华南虎幼虎进行病理剖检、病原PCR检测和病理组织切片观察。结果表明,死亡幼虎的肠道组织中能检测出猫细小病毒核酸;病理组织切片镜检结果显示,死亡幼虎胃、肠粘膜出血,大量粘膜上皮细胞坏死、脱落,严重部位粘膜层基本消失,并伴有大量炎性细胞浸润;心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑等组织也均有较为严重的病理损伤。以上结果提示,该死亡幼虎感染了猫细小病毒,且该病毒对幼虎多种主要器官造成了严重的损伤。

关键词：华南虎猫细小病毒 PCR 病理组织学

猫杯状病毒、猫细小病毒、猫流感病毒和猫疱疹病毒多重PCR检测方法的建立和应用

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畜牧与兽医 2022年第6期54卷 113-118页

作者：郭嘉宁郭金凡周华波曾昊余良政刘林林陈建材龙剑明欧阳康韦祖樟黄伟坚陈樱广西大学动物科技学院广西南宁530004 南宁市华波宠物医院广西南宁530004 广西南宁神九生物制品有限责任公司广西南宁530004

为建立快速检测猫科动物重要传染病的多重PCR检测方法,根据GenBank中登录的猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)、猫细小病毒(feline parvovirus,FPV)、猫流感病毒(feline influenza virus,FIV)和猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus type 1,FHV-1)的相对高保守性基因ORF2、NSP1、M和UL27,分别设计4对特异性引物。通过对反应体系的摸索及优化,建立了可同时扩增FCV(257 bp)、FPV(380 bp)、FIV(519 bp)和FHV-1(761 bp)的四重PCR反应条件及体系。结果显示:能够在同一体系中用同一反应扩增出以上4种病毒基因,其重复性及特异性均良好,敏感性可达到10 copies/μL。用该方法检测69份口鼻拭子,结果发现FCV和FPV混合感染的阳性率为10.14%,FCV和FHV-1混合感染的阳性率为1.45%,FCV、FPV和FIV混合感染的阳性率为10.14%。结果表明:研究建立的四重PCR检测方法可对常见猫科动物病毒性传染病进行快速准确的鉴别诊断,而且为早期治疗提供了有力的检测工具。

关键词：多重PCR 猫疱疹病毒猫流感病毒猫细小病毒猫杯状病毒

4种分子伴侣促进猫细小病毒样颗粒可溶性表达的研究

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黑龙江畜牧兽医 2021年第7期 19-24,153页

作者：夏霖亚吴铭洁王蕾张宁罗国良吴丛梅殷玉和长春工业大学化学与生命科学学院长春130012 中国农业科学院特产研究所长春130012

为了研究4种分子伴侣在***表达系统中对猫细小病毒(feline Parvovirus, FPV)VP2蛋白表达及其组装的病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)活性的影响,试验构建重组质粒pET30a-VP2,将重组质粒pET30a-VP2分别与4种分子伴侣pKJE7、pKJE8、pGro7和pTf16转化至*** ER2566感受态细胞中进行共表达,运用SDS-PAGE、Western-blot对表达产物进行检测,通过硫酸铵沉淀结合疏水层析柱对表达产物进行纯化,电镜观察VLPs的形态,并采用血凝试验检测其免疫活性。结果表明:重组质粒pET30a-VP2在***表达系统中主要以包涵体形式表达蛋白。4种分子伴侣与重组质粒pET30a-VP2共表达,加入终浓度为2 mg/mL L-阿拉伯糖及0.1 mmol/L IPTG或5 ng/mL四环素的诱导剂,25℃诱导16 h,均能显著提高FPV VP2蛋白的可溶性表达,表达蛋白具有抗原特异性。纯化得到的FPV VP2蛋白在250 mmol/L NaCl(pH值为8.0)条件下可自组装形成均一、直径约为24 nm的VLPs。仅分子伴侣pTf16与重组质粒pET30a-VP2共表达获得的FPV VP2蛋白经透析形成的FPV VLPs正常,无碎片,其血凝效价为219。说明通过将重组质粒pET30a-VP2分别与4种分子伴侣在***表达系统中共表达,4种分子伴侣均可促进FPV VP2蛋白的可溶性表达,成功纯化并获得FPV VLPs。

关键词：猫细小病毒病毒样颗粒分子伴侣 VP2蛋白原核表达可溶性表达

抗猫细小病毒嵌合抗体基因在昆虫细胞中的表达与鉴定

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中国预防兽医学报 2019年第6期41卷 632-636页

作者：薛雨佳宋彩玲赵爽爽李彤彤王文静张云刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为降低单克隆抗体(MAb)在犬体内的免疫原性,本研究克隆了具有中和猫、犬细小病毒(FPV、CPV)活性的MAb(3EB)的轻、重链可变区基因及犬天然抗体(NAb)轻、重链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-犬嵌合抗体基因。构建能够表达嵌合抗体的重组质... 详细信息

为降低单克隆抗体(MAb)在犬体内的免疫原性,本研究克隆了具有中和猫、犬细小病毒(FPV、CPV)活性的MAb(3EB)的轻、重链可变区基因及犬天然抗体(NAb)轻、重链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-犬嵌合抗体基因。构建能够表达嵌合抗体的重组质粒,经昆虫杆状病毒表达系统对重组嵌合抗体进行表达。SDS-PAGE和western blot试验显示鼠-犬嵌合抗体重链为55ku、轻链为25ku。间接免疫荧光试验显示该嵌合抗体能够与抗犬IgG和FPV特异性结合。上述结果表明,嵌合抗体保留了原MAb3EB对病毒特异结合能力的基础上,将鼠源恒定区替换为犬源NAb的恒定区。病毒中和试验表明嵌合抗体保留了3EB对FPV、CPV的中和活性。本研究首次通过昆虫杆状病毒表达系统表达了抗FPV、CPV的嵌合抗体,降低了原MAb的免疫原性,对FPV、CPV病临床治疗用抗体药物的研制具有重要指导意义。

关键词：基因工程嵌合抗体猫细小病毒昆虫杆状病毒表达系统