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作者：易婷娇第二军医大学

学位级别：硕士

一、研究背景肝癌严重威胁着人类的健康,2004年全世界约有61万人死于肝癌。中国是肝癌的高发地区。目前,手术治疗仍是其主要治疗手段,但是术后易复发、转移,以及较多肝癌病人确诊时已不具备手术指征等问题,使得单纯的手术治疗不能满足... 详细信息

一、研究背景肝癌严重威胁着人类的健康,2004年全世界约有61万人死于肝癌。中国是肝癌的高发地区。目前,手术治疗仍是其主要治疗手段,但是术后易复发、转移,以及较多肝癌病人确诊时已不具备手术指征等问题,使得单纯的手术治疗不能满足现阶段的肝癌治疗。中医药对肿瘤的治疗有着悠远的历史,独特的优势,并取得了显著的效果。中药有效成分的分离以及药理作用研究是目前研究中药治疗肿瘤的一个重要途径。猫人参为江浙地区地方习用抗肿瘤药物,临床广泛运用于肺癌和消化道肿瘤的治疗。猫人参植物中含20种无机元素,根茎部位含有丰富的氨基酸,乙醇提取物含有儿茶类、三萜类等成分。近期研究表明,从猫人参中提取分离的蒽醌类复合物能够抑制小鼠肝癌皮下移植瘤的生长。本课题在前期相关工作的基础上,进一步观察猫人参总皂苷对肝癌体内体外生长的抑制作用,初步探讨其作用机制。二、研究目的 (一)观察猫人参总皂苷对小鼠肝癌皮下移植瘤的抑制作用。 (二)观察猫人参总皂苷对肝癌细胞周期的影响。三、研究方法第一部分:猫人参总皂苷对肝癌体内生长抑制作用的实验研究 1、建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型,随机分组,规律给药。称取各组小鼠实验前后体质量,测量瘤体体积,称取瘤质量。 2、肿瘤组织免疫组化染色,运用IMS医学图象定量分析软件检测肿瘤组织TUNEL的表达情况。第二部分:猫人参总皂苷对肝癌细胞体外作用的实验研究 1、四氮唑盐还原法(MTT法)和台盼蓝染色细胞计数法检测不同浓度猫人参总皂苷作用48 h对人肝癌细胞BEL-7402和小鼠肝癌细胞H22,细胞的增殖抑制率。 2、流式细胞仪(FCM)采用PI染色方法检测不同浓度猫人参总皂苷作用48 h对人肝癌细胞BEL-7402,小鼠肝癌细胞H22细胞周期的影响。 3、采用Western blot方法检测猫人参总皂苷作用48 h对人肝癌细胞BEL-7402细胞周期相关蛋白以及激酶的变化。四、研究结果第一部分:猫人参总皂苷对肝癌体内生长抑制作用的实验研究 1、各组之间小鼠体质量无明显差异;高、低剂量给药组瘤体体积和瘤质量均明显低于阴性对照组,有显著统计学差异(P猫人参总皂苷对肝癌细胞体外作用的实验研究 1、猫人参总皂苷浓度在0.75-3 mg/ml时对人肝癌细胞BEL-7402和小鼠肝癌细胞H22具有细胞毒作用。 2、猫人参总皂苷作用于人肝癌BEL-7402细胞,在给药浓度0.1 mg/ml,0.2 mg/ml和0.4 mg/ml时随浓度增加S期的比例明显增加,其他两期比例减少;猫人参总皂苷作用于小鼠肝癌细胞H22在给药浓度为0.1 mg/ml,0.2 mg/ml和0.4 mg/ml时随浓度增加G0/G1期和G2/M期的比例明显增加,S期比例减少。 3、猫人参总皂苷根据给药浓度的增加人肝癌BEL-7402细胞周期相关蛋白Cyclin A的表达上调;Cdk2无明显变化。五、研究结论 (一)猫人参总皂苷能够抑制小鼠肝癌皮下移植瘤的生长,其作用机制之一可能是诱导移植瘤细胞凋亡。 (二)猫人参总皂苷在浓度为0.75-3 mg/ml时通过细胞毒作用抑制人肝癌细胞BEL-7402和小鼠肝癌细胞H22的增殖,在浓度低于0.75 mg/ml时可将细胞BEL-7402和H22周期分别阻滞在S期和G0/G1,G2/M期,其对BEL-7402细胞周期阻滞的作用机制可能和Cyclin A的上调有关。

关键词：猫人参总皂苷肝癌肝癌皮下移植瘤细胞周期小鼠

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猫人参总皂苷抑制肝癌生长和转移的实验研究

猫人参总皂苷抑制肝癌生长和转移的实验研究

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作者：郑国银第二军医大学

学位级别：硕士

一、研究背景肝癌是严重威胁人类健康的一大疾患,中西医结合治疗贯穿我国肝癌防治的全过程中,中医药在肝癌预防、治疗以及防止复发转移等方面有着独特的优势。研究发现某些天然中药及其提取物通过对肿瘤发生发展过程中某一环节及其相... 详细信息

一、研究背景肝癌是严重威胁人类健康的一大疾患,中西医结合治疗贯穿我国肝癌防治的全过程中,中医药在肝癌预防、治疗以及防止复发转移等方面有着独特的优势。研究发现某些天然中药及其提取物通过对肿瘤发生发展过程中某一环节及其相关因子发挥作用达到多层次、多靶点抗肿瘤效果,中药防治肿瘤的作用主要围绕防治癌前病变,抑制癌灶生长包括直接杀灭肿瘤、抑制增殖、诱导分化、促进凋亡,抑制肝癌转移包括抑制细胞转移相关运动,抑制转移相关基因、粘附分子、膜相关分子、血管生成相关因子等的表达,增强机体免疫等。抑制肿瘤生长和转移的是中药发挥抗癌作用的重要作用途径。猫人参为江浙地区临床常用抗肿瘤药,广泛运用于肝癌、转移性肺癌、乳腺癌等的临床治疗。浙江大学对猫人参有效成分研究发现该植物中富含人体所需的各种无机元素,根茎部位含有丰富的氨基酸,特别是一些具有特殊生理活性的氨基酸含量较高,猫人参乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部分得24-三羟基-12烯-齐墩果烷,积雪草酸,儿茶素,isotachioside,表儿茶素,熊果酸,胡萝卜苷,β-谷甾醇等有效成分。既往研究表明单味猫人参注射液对肝癌、白血病及结肠癌细胞株有一定的抑制作用,从猫人参中提取分离的葸醌类和皂苷类的复合物均被证实有抗肿瘤活性,能够抑制小鼠皮下移植瘤的生长。本课题在对猫人参进行有效成分提取和初筛的基础上,进一步观察猫人参总皂苷对肝癌体内体外生长转移的作用。二、研究目的 1体外观察猫人参总皂苷对人肝癌细胞株的增殖抑制作用,观察其对部分肝癌细胞划痕、粘附、侵袭、趋化实验的作用效果,了解猫人参总皂苷对肝癌体外增殖和转移的作用。 2观察猫人参总皂苷对小鼠肝癌皮下移植瘤模型和转移瘤模型的作用,了解猫人参总皂苷对肝癌体内生长和转移的效果。三、研究方法第一部分猫人参总皂苷对肝癌细胞体外实验作用观察 1通过四氮唑盐还原法(MTT法)检测不同浓度猫人参总皂苷对不同人肝癌细胞株BEL-7402、MHCC-97-H、HepG2、SMMC-7721、PLC的增殖影响,从中选出抑制作用最强和(或)具有高转移能力的肝癌细胞进行转移运动相关实验。初步确定猫人参总皂苷发挥增殖抑制效果的浓度范围,筛选出无明显增殖抑制作用的药物浓度范围进行下一步实验。 2进行体外划痕实验,观察猫人参总皂苷对肝癌细胞迁移运动的作用。 3观察猫人参总皂苷对肝癌细胞粘附实验的作用,计算其粘附抑制率。 4采用Transwell小室模拟侵袭运动环境,进行侵袭实验,观察猫人参总皂苷对肝癌细胞侵袭运动的抑制作用,计算侵袭抑制率。 5通过趋化运动实验观察猫人参总皂苷对肝癌细胞趋化运动的效果,计算趋化抑制率。第二部分猫人参总皂苷抗肝癌生长转移体内实验研究 1猫人参总皂苷对肝癌体内生长的作用接种肝癌细胞于小鼠左前肢腋部皮下,待皮下瘤形成以后将小鼠随机分组,分别给与100 mg/kg/d、50 mg/kg/d及等浓度的溶剂作为对照组,腹腔注射给药一日一次,连续给药10 d,期间观察不同组别老鼠的活动情况、瘤体大小、体重、饮食饮水量等状况。停药24 h后颈椎脱臼处死小鼠,剥取瘤块称重,观察肺、心、肝、肺、肾、脾脏、胸腺等器官,留取部分进行组织病理学检查。对肿瘤组织行免疫组化染色,运用IMS医学图象定量分析软件检测肿瘤组织MVD、VEGF、bFGF的表达情况。 2猫人参总皂苷对肝癌体内转移的作用通过尾静脉注射小鼠肝癌细胞构建小鼠肝癌肺转移瘤模型,隔日给药,剂量及方法同前,连续给药14天。观察用药后动物的一般情况:包括活动情况,体重毛色,饮食饮水量,有无消瘦及死亡等。停药24小时后称小鼠体重,眼眶取血,送检血常规,脱臼处死小鼠,剥取脾脏、胸腺称重,剥取小鼠肺组织,Bouin液染色24小时后,75%酒精固定,观察肺转移癌灶数。包埋肺组织,制成蜡块,HE染色,镜下观察不同组肺内组织及瘤灶的情况。四、研究结果第一部分猫人参总皂苷对肝癌细胞体外实验作用观察 1 MTT结果猫人参总皂苷对BEL-7402细胞增殖抑制作用最强,呈高度敏感,抑制效果呈浓度依赖性,1.50 mg/ml猫人参总皂苷24、48、72小时时间点抑制率分别为(68.38±10.33)、(61.13±18.37)、(82.96±2.24)%,半数抑制浓度分别为(1.16±0.02)、(1.39±0.67)、(0.92±0.42)mg/ml。猫人参总皂苷浓度低于0.50 mg/ml时,对细胞增殖无明显抑制作用。1.50 mg/ml猫人参总皂苷对MHCC-97-H细胞增殖抑制率为36%。 2划痕实验分别对BEL-7402和MHCC-97-H肝癌细胞进行24小时划痕实验,结果显示猫人参总皂苷对其迁移均有一定的抑制作用,镜下细胞迁移的程度为400＜200＜100μg/ml＜空白对照组,猫人参皂苷对肝癌细胞迁移能力的抑制效果随着药

关键词：猫人参总皂苷肝癌生长转移

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猫人参总皂苷对小鼠皮下移植瘤的抑制作用

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中华中医药学刊 2009年第8期27卷 1642-1643页

作者：易婷娇徐燕丰郑国银辛海量凌昌全第二军医大学第一附属医院中医科上海200433

目的:研究猫人参总皂苷对小鼠皮下移植瘤的抑制作用及机制。方法:建立小鼠皮下移植瘤模型,观察猫人参总皂苷体内抑制肿瘤作用。运用免疫组化法,检测猫人参总皂苷对肿瘤组织中微血管的影响。结果:猫人参总皂苷对小鼠皮下移植瘤有显著抑... 详细信息

目的:研究猫人参总皂苷对小鼠皮下移植瘤的抑制作用及机制。方法:建立小鼠皮下移植瘤模型,观察猫人参总皂苷体内抑制肿瘤作用。运用免疫组化法,检测猫人参总皂苷对肿瘤组织中微血管的影响。结果:猫人参总皂苷对小鼠皮下移植瘤有显著抑制作用。给药组肿瘤组织的微血管密度和VEGF表达与阴性对照组有显著差异。结论:猫人参总皂苷对小鼠移植瘤的生长有抑制作用,其作用机制之一可能是抗血管生成。

关键词：猫人参总皂苷皮下移植瘤抗肿瘤

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