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猪链球菌噬菌体裂解酶Ply5218功能域解析及体内抗菌活性研究

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猪链球菌噬菌体裂解酶Ply5218功能域解析及体内抗菌活性研究

作者：刘洋上海交通大学

学位级别：硕士

猪链球菌(Streptococcus suis)是一种人兽共患病原菌,感染仔猪可导致患关节炎、败血症和脑膜炎等,对养猪业以及公共卫生均构成非常严重的威胁。目前,对猪链球菌病菌的防控主要依赖抗生素治疗,但抗生素的滥用,导致临床分离的多数病原菌... 详细信息

猪链球菌(Streptococcus suis)是一种人兽共患病原菌,感染仔猪可导致患关节炎、败血症和脑膜炎等,对养猪业以及公共卫生均构成非常严重的威胁。目前,对猪链球菌病菌的防控主要依赖抗生素治疗,但抗生素的滥用,导致临床分离的多数病原菌株呈现严重耐药和多重耐药特性,细菌耐药问题日趋严重,阻碍了该病的有效防控,因此发掘新的抗菌制剂尤为重要;来源于噬菌体的裂解酶(Lysin)具有高效、快速杀菌,特异性强,且不易产生耐药性等特点,是一种潜在的新型抗菌制剂。本研究基于猪链球菌噬菌体裂解酶Ply5218在体外裂菌和在小鼠体内抗感染的良好效果,应用Ply5218对发病仔猪进行治疗。选用20 kg大小的仔猪,采取“颈部攻击-裂解酶治疗”策略,评价Ply5218的体内抗感染效果。将16只仔猪随机分成四组,分别为攻击未治疗组、未攻击治疗组,攻击后立即治疗组和攻击后延迟1 h治疗组。攻击组仔猪均经颈部肌肉注射10 mL(1.4×1000 CFU/mL)复壮的猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)强毒株HA9801,然后分别立即注射10 mL(512 U/mL)裂解酶Ply5218或PBS;延迟治疗组仔猪在攻击1 h后颈部注射10 mL(512 U/ml)的裂解酶Ply5218进行治疗,记录仔猪的的存活状态、体温、血液细菌载量以及血液中促炎性细胞因子水平。结果显示攻击后立即注射裂解酶Ply5218能够有效控制仔猪链球菌感染,立即治疗组存活率达到75%,而对照组存活率为0%;存活仔猪体温逐渐恢复正常;血液中细菌载量逐渐下降;立即治疗3天内,治疗组促炎性细胞因子表达水平显著低于未治疗组,且立即治疗仔猪健康状况逐步恢复至正常水平。为了使裂解酶Ply5218能更便捷地应用于临床治疗,本研究对其递送途径进行了探究。通过分析、优化Ply5218的密码子,将优化后的裂解酶基因片段克隆至真核表达载体PPlczA,在X酵母感受态细胞中诱导表达,并对酵母表达条件进行优化,实现Ply5218高效、大批量表达;ICR小鼠经SS2 HA9801腹腔攻击后,分别进行X-Ply5218(Ply5218在酵母细胞X中表达)酵母细胞、Ply5218蛋白、X酵母细胞对照及PBS缓冲液对照的口服治疗,分别于24 h、48 h、72 h及96 h测定每组小鼠血液、肝脏及脾脏的细菌数。结果显示:酵母表达Ply5218的最佳条件为:28℃、诱导48 h(每隔24 h加入1%的甲醇);口服X-Ply5218酵母细胞组和Ply5218蛋白组,小鼠体内的细菌数与对照组相比显著减少,说明小鼠口服X-Ply5218和Ply5218能有效抑制猪链球菌在小鼠体内的增殖与感染。为了进一步鉴定猪链球菌噬菌体裂解酶Ply5218的最小活性功能域及关键氨基酸位点,便于后期对裂解酶的改造和降低表达成本,本文对全长裂解酶Ply5218和催化结构域(Ply5218)进行截短并对可能与活性相关的关键氨基酸位点进行定点突变,研究截短与突变后各个裂解酶蛋白的裂菌活性。通过与全长裂解酶蛋白裂菌活性的对比,确定Ply5218的最小活性功能域及关键氨基酸。结果显示:截短片段Ply5218可在平板上形成裂菌圈,仍保持裂菌活性,而比该片段更短的截短片段则失去裂菌活性,推测Ply5218为Ply5218的最小活性相关功能域;第8、第58、第136和第142位的氨基酸突变后,裂菌活性部分降低,而第34和第144位的氨基酸突变后,则彻底失去裂菌活性。提示这些位点的氨基酸与裂解酶的裂菌活性密切相关。综上所述,猪链球菌噬菌体裂解酶Ply5218,在仔猪遭受细菌攻击后立即注射治疗,能有效控制猪链球菌感染;经密码子优化后,裂解酶Ply5218能在酵母细胞X中表达,攻击了猪链球菌HA9801的小鼠,通过口服X-Ply5218酵母细胞治疗,组织中细菌载量显著下降,呈现一定的保护力;通过截短与定点突变,发现Ply5218发挥作用的最小功能域为Ply5218,鉴定了6个与裂菌活性相关的关键氨基酸位点,研究结果为深入揭示Ply5218的裂菌机制和进一步改造、应用裂解酶提供了基础数据。

关键词：猪链球菌裂解酶酵母表达治疗活性功能域

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猪链球菌抗亚铁和钴毒性的分子机制研究

猪链球菌抗亚铁和钴毒性的分子机制研究

作者：贾梦蝶扬州大学

学位级别：硕士

猪链球菌是革兰氏阳性菌,作为一种重要的人兽共患病原菌,会导致猪和人的脑膜炎、败血症和其它感染,不仅给养猪业带来巨大的经济损失,还严重危害公众健康。根据荚膜多糖抗原的差异,猪链球菌被分为29个血清型,其中2型是世界范围内临床分... 详细信息

猪链球菌是革兰氏阳性菌,作为一种重要的人兽共患病原菌,会导致猪和人的脑膜炎、败血症和其它感染,不仅给养猪业带来巨大的经济损失,还严重危害公众健康。根据荚膜多糖抗原的差异,猪链球菌被分为29个血清型,其中2型是世界范围内临床分离率最高,与人和猪感染最相关的血清型。过渡态金属是生物的必需营养物质,宿主可以通过限制金属离子来抑制病原菌的生长;但过量的金属也会对细胞造成毒害,研究发现施加金属毒性作用是宿主对抗病原菌的另一个策略,而细菌则进化出复杂的机制将过量的金属排出菌体或在菌体内隔离,从而维持金属稳态,所以金属外排系统在病原菌致病过程中发挥着重要作用。本研究通过同源序列比对,发现猪链球菌SC19菌株中的B9H01S01605基因编码的蛋白与几种革兰氏阳性菌中发现的Fe(Ⅱ)外排泵具有较高的同源性,我们把该基因命名为pmtA。通过荧光定量PCR发现pmtA基因的表达在Fe(Ⅱ)、Co(Ⅱ)和Ni(Ⅱ)的诱导作用下显著上调。接着我们构建了pmtA基因的缺失株与互补株,通过生长曲线的测定发现ΔpmtA缺失株在Fe(Ⅱ)和Co(Ⅱ)条件下生长明显受到抑制,在Fe(Ⅲ)或Zn(Ⅱ)条件下生长受到轻微抑制。而斑点稀释实验表明PmtA抑制Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)诱导的杀菌作用以及Co(Ⅱ)和Zn(Ⅱ)诱导的抑菌作用。通过ICP-OES发现pmtA基因缺失导致细胞内铁和钴水平升高,并且ΔpmtA对Fe(Ⅱ)激活的抗生素链黑菌素更敏感。在Fe(Ⅱ)或Co(Ⅱ)过量条件下,添加Mn(Ⅱ)可以缓解ΔpmtA的生长缺陷。另外PmtA在猪链球菌中发挥H2O2氧化应激耐受的作用,但与猪链球菌毒力无关。这些结果表明猪链球菌PmtA发挥Fe(Ⅱ)和Co(Ⅱ)外排泵的作用,并与氧化应激耐受相关。为了研究猪链球菌在Fe(Ⅱ)和Co(Ⅱ)条件下基因转录水平的变化,我们进行了转录组测序。结果表明在铁和钴过量条件下许多基因的表达存在差异。大多数应对钴毒性的基因与应对亚铁毒性的基因具有相同的表达趋势。通过对所选基因进行qRT-PCR分析,证实了 RNA测序结果的准确性。对差异表达基因的生物信息学分析发现亚铁和钴对猪链球菌的细胞过程具有相似的效应。亚铁处理导致一些氧化应激耐受相关基因的下调和氨基酸ABC转运蛋白操纵子基因的上调。此外亚铁和钴处理会导致精氨酸脱氨酶系统中几个基因的表达下调。这些结果表明猪链球菌改变了多个基因的表达,以应对亚铁和钴的毒性。本研究通过构建pmtA基因缺失株和互补株,对猪链球菌金属外排系统PmtA进行鉴定及功能研究,通过转录组测序分析了猪链球菌在亚铁和钴条件下基因转录组水平的变化,揭示了猪链球菌是通过将菌体内过量的金属排出体外,并通过改变相关基因的表达来抵抗亚铁和钴的毒性。

关键词：猪链球菌亚铁和钴金属外排泵转录组测序

猪链球菌-肠外致病性大肠杆菌二联多价亚单位候选疫苗免疫保护效果的评估

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猪链球菌-肠外致病性大肠杆菌二联多价亚单位候选疫苗免疫保护效...

作者：陈图梅华中农业大学

学位级别：硕士

猪链球菌病是一种重要的人畜共患传染病,感染猪主要引起败血症、脑膜炎、关节炎等疾病。以前,我国猪链球菌以血清型2型最为多发,近些年研究发现猪链球菌9型的感染趋势正在逐渐上升。肠外致病性大肠杆菌(Ex PEC)血清型复杂,能够定殖和感... 详细信息

猪链球菌病是一种重要的人畜共患传染病,感染猪主要引起败血症、脑膜炎、关节炎等疾病。以前,我国猪链球菌以血清型2型最为多发,近些年研究发现猪链球菌9型的感染趋势正在逐渐上升。肠外致病性大肠杆菌(Ex PEC)血清型复杂,能够定殖和感染肠外各组织器官,导致败血症、脑膜炎、肺炎、心内膜炎等。在养猪业猪链球菌病和大肠杆菌病混合感染的情况严重,目前没有商品化的疫苗可以同时用于这两种细菌性疾病的预防。亚单位疫苗具有良好的安全性及免疫原性,具有对多种血清型产生交叉保护等优点,所以本研究在实验室先前的研究基础上开展了二联多价亚单位候选疫苗免疫保护效果的评估。(1)候选蛋白分别免疫对每种菌的保护效果用猪链球菌IF-2、1022蛋白分别免疫以及混合后免疫小鼠,发现蛋白混合后的免疫组要比单个蛋白免疫组产生更高水平的抗体,这些免疫组产生的抗体水平均显著高于对照组(p猪链球菌SC19菌株的小鼠提供80%和60%的保护,而IF-2和1022蛋白则为感染SS9型猪链球菌S29菌株的小鼠提供70%和80%的保护。当将这两种蛋白质混合并用于免疫时,混合后的蛋白分别可以为SC19和S29菌株提供90%和90%的保护率。再者,尝试将大肠杆菌外膜蛋白Omp C、Omo F以及分子伴侣蛋白Groe L蛋白混合免疫小鼠,用5LD剂量的菌株攻毒小鼠,发现其对感染肠外致病性大肠杆菌PCN033菌株的小鼠提供80%的保护。且经过免疫后小鼠体内的抗体滴度有了极其显著的改变(p猪链球菌以及猪肠外致病性大肠杆菌的混合免疫效果。结果显示,免疫组和空白对照组相比小鼠产生强烈的体液免疫应答,同时对猪链球菌SS2、SS9和猪肠外致病性大肠杆菌PCN033和E49菌株的感染具有良好的保护作用,可以分别为感染致死剂量的PCN033、E49、SC19、S29菌株的小鼠提供90%、90%、90%和80%的保护。免疫组小鼠的特异性抗体的滴度明显高于对照组小鼠(p<0.001)血清中干扰素(IFN)-γ,IL-2和IL-4的水平显著升高(p<0.001)。组织病理学观察表明,对照组病变程度明显高于免疫组。组织载菌量发现免疫组的组织载菌量和对照组相比显著性降低。

关键词：猪链球菌猪大肠杆菌二联多价交叉保护

猪链球菌9型强弱毒株基因组序列测定及基因01891、01892和00110敲除菌株构建的研究

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猪链球菌9型强弱毒株基因组序列测定及基因01891、01892和00110敲...

作者：赵一凡华中农业大学

学位级别：硕士

猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一种重要的人畜共患病原体,能感染各年龄段猪群,引起猪脑膜炎,关节炎,心内膜炎等症状,人感染猪链球菌可引起包括化脓性关节炎、脑膜炎、坏疽、败血症等症状,严重时可致人死亡。在我国近年来,猪链... 详细信息

猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一种重要的人畜共患病原体,能感染各年龄段猪群,引起猪脑膜炎,关节炎,心内膜炎等症状,人感染猪链球菌可引起包括化脓性关节炎、脑膜炎、坏疽、败血症等症状,严重时可致人死亡。在我国近年来,猪链球菌9型(Streptococcus suis type 9,SS9)的分离率和流行率持续增加,且其强毒株感染猪可以引起脑膜炎和死亡,对养猪业造成经济损失的同时,危害着公共卫生安全,但目前对其毒力基因及致病机制的研究并不深入。因此,开展对SS9关键毒力位点的深入发掘,对更详细地揭示SS9致病机制、构建更完善的猪链球菌病预防体系有着重要的意义。在本实验室前期分离的猪链球菌9型菌株中,SS9-29菌株分离自因感染SS9而发生脑膜炎最终死亡的病猪脑组织,SS9-258分离自病猪肺脏。本论文通过动物实验评估了SS9-29和SS9-258对小鼠的致病力差异,为解释引起SS9毒力差异的原因,本研究开展了对强毒株(SS9-29)和弱毒株(SS9-258)基因组序列的测定、比较以及基因组分析,定位了一系列强、弱毒株的差异基因,在差异基因中筛选了01891、01892和00110号基因,并进行基因敲除菌株的构建以及致病性的研究,取得以下主要结果:(1)在体外和体内评估了SS9-29和SS9-258菌株的生物学特性和对小鼠的致病力。SS9-29和SS9-258在菌落形态、菌体形态以及生长速率方面没有明显差异,SS9-29感染小鼠能引起小鼠脑膜炎的发生,表现明显的神经症状,对小鼠的致死率高,毒力较强;SS9-258感染小鼠则不能引发脑膜炎,致死率较低,菌株毒力弱。(2)对SS9-29和SS9-258进行了全基因组测序及比对,发现了一系列强弱毒株基因组的差异基因,结合先前本实验室关于强弱毒株基因组序列的分析结果,发现SS9-29基因组中的01891、01892和00110号基因只存在于强毒株基因组中。(3)以SS9-29为亲本株,利用同源重组的方法,分别构建了01891、01892和00110号基因的基因缺失菌株,并对三株基因缺失菌株的生物学特性和对小鼠致病力进行评估。评估结果发现01891、01892和00110号基因缺失株在菌体形态和生长速率上与SS9-29野生株没有明显差异,在对小鼠进行不同毒量的攻毒实验后发现,基因缺失菌株对小鼠致病力与亲本株相比没有明显减弱,说明三个基因均不是影响SS9-29毒力的关键基因。综上所述,本实验首先通过对SS9不同毒力的菌株进行全基因组测序及比对,发现了上百个强毒株特异性基因,然后对其中三个基因01891、01892和00110号基因进行了验证,发现其并不是影响SS9毒力变化的关键因素之一,但该研究结果为进一步发掘SS9新型毒力因子提供了基础,便于后续对剩余特异性基因进行验证,更深入的发掘SS9的关键毒力因子及其作用机理。

关键词：猪链球菌脑膜炎全基因组测序基因缺失

广西部分地区猪群中猪链球菌的分离鉴定及耐药性研究

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畜牧与兽医 2023年第2期55卷 103-109页

作者：马婷婷朱远致闭璟珊苏姣秀周庆安谢守玉邹联斌郑敏施开创李军罗廷荣韦显凯西南医科大学附属医院四川泸州646000 广西动物疫病预防控制中心广西南宁530000 广西大学动物科学技术学院广西南宁530000

为探究广西部分地区猪群中猪链球菌(Streptococcus suis)的流行情况及耐药性,采集广西6个市县共527份猪组织及鼻腔拭子样品,通过选择培养基对样品中的猪链球菌进行分离和PCR鉴定,共分离到猪链球菌201株(38.1%)。其中大新县和那坡县猪链... 详细信息

为探究广西部分地区猪群中猪链球菌(Streptococcus suis)的流行情况及耐药性,采集广西6个市县共527份猪组织及鼻腔拭子样品,通过选择培养基对样品中的猪链球菌进行分离和PCR鉴定,共分离到猪链球菌201株(38.1%)。其中大新县和那坡县猪链球菌分离率最高,分别为64.0%(64/100)和65.4%(70/107),而靖西市截获的越南走私猪中猪链球菌分离率达29.3%(44/150)。对分离到的猪链球菌进行血清型分型鉴定,结果显示201株猪链球菌血清型中2(1/2)型24株(11.9%),7型2株(1.0%),9型15株(7.5%),大新县、那坡县和东兴市主要流行2(1/2)型,靖西市的越南走私猪样品主要流行9型。采用纸片扩散法,测定41株广西猪链球菌分离菌株对临床上常见的34种9类抗生素的耐药性,其中有1株猪链球菌只对2类抗生素中度敏感,对7类抗生素不敏感;有12株(29.3%)细菌多重耐药;大多数猪链球菌(65.9%)对大环内酯类不敏感,对万古霉素(87.8%)、硝基呋喃(87.8%)、氟喹诺酮类(82.9%)敏感。由此可见广西地区猪链球菌分离株有较强的耐药性。

关键词：猪链球菌血清型耐药性

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可视化RPA-LFD技术快速检测猪链球菌

畜牧兽医学报 2022年第2期53卷 538-547页

作者：张闪闪何斌李书光刘明成姜金庆胡建和雷连成沈志强夏小静河南科技学院动物科技学院新乡453003 山东省滨州畜牧兽医研究院滨州256600 吉林大学动物医学学院长春130062

旨在建立一种可视化、操作简便的猪链球菌快速检测技术。针对猪链球菌种特异性基因谷氨酸脱氢酶(gdh)序列设计特异性引物,建立可同时检测出所有血清型的重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测技术,优化反应温度与反应时间,... 详细信息

旨在建立一种可视化、操作简便的猪链球菌快速检测技术。针对猪链球菌种特异性基因谷氨酸脱氢酶(gdh)序列设计特异性引物,建立可同时检测出所有血清型的重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测技术,优化反应温度与反应时间,评价其特异性与灵敏度,同时利用该法对45例疑似猪链球菌感染标本进行检测。结果显示:猪链球菌RPA-LFD法检测灵敏度可达100拷贝·μL^(-1),优于常规PCR方法,且不与其他常见病原菌发生交叉反应。扩增反应可在较宽温度范围(30~45℃)内高效进行,20~30 min可完成检测。利用临床45例疑似猪链球菌感染样本对检测体系进行评估,其检出率高于细菌分离与常规PCR方法,具有较强的实用性。本研究建立的猪链球菌RPA-LFD检测方法具有强特异性、高灵敏度、易于操作的特点,同时不依赖于仪器、专业操作人员,适用于野外及现场检测。

关键词：猪链球菌重组酶聚合酶等温扩增侧流层析试纸条快速检测

浙江某市屠宰场猪链球菌血清型、耐药及致病特征

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微生物学报 2022年第8期62卷 3236-3250页

作者：刘召颖朱夏雨牛洪颖万欣吴宗福南京农业大学动物医学院江苏南京210014 农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210014 世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室江苏南京210014

【目的】猪链球菌(Streptococcus suis)是猪的重要病原菌,同时也是人畜共患病原。猪的扁桃体是猪链球菌主要定殖部位之一,是易感猪和人的重要传染源。因此,对屠宰场健康猪进行猪链球菌流行病学调查,具有重要的公共卫生学意义。【方法】... 详细信息

【目的】猪链球菌(Streptococcus suis)是猪的重要病原菌,同时也是人畜共患病原。猪的扁桃体是猪链球菌主要定殖部位之一,是易感猪和人的重要传染源。因此,对屠宰场健康猪进行猪链球菌流行病学调查,具有重要的公共卫生学意义。【方法】本研究自2020年至2021年,从浙江某市屠宰场采集健康猪扁桃体样品,分离鉴定猪链球菌,采用血清型特异性PCR法分型,通过耐药基因检测、药敏试验、斑马鱼毒力实验分析其耐药及致病特征。【结果】131份健康猪扁桃体样品猪链球菌阳性率为62.59%(82/131),共分离猪链球菌68株,其中16型分离率最高,占比16.18%(11/68),其次为31型(11.76%,8/68)、9型(7.35%,5/68)、3型(7.35%,5/68)等。含2种及以上血清型的扁桃体样品占15.85%(13/82)。药敏试验表明,分离株主要对林可酰胺类(100%,68/68)、大环内酯类(98.53%,67/68)、四环素类(100%,68/68)抗生素耐药,所有菌株均属于多药耐药。值得关注的是,有18株菌对青霉素耐药、3株菌对头孢噻肟耐药、2株菌对利福平耐药、11株菌对利奈唑胺耐药。大环内酯类/林可酰胺类耐药基因、四环素类耐药基因检出率均为82.35%(56/68),这是猪链球菌对这些抗生素耐药的主要原因。按不同批次分离的菌株,选择25株代表株进行斑马鱼毒力实验,结果显示:5株菌对斑马鱼致病力强,攻毒剂量为3×10^(6)CFU/尾时死亡率为80%–100%。【结论】该地区健康猪不仅猪链球菌携带率高,而且存在多药耐药和致病性强的菌株,这为了解该地区猪链球菌病的发病规律和制定相关的防控策略提供参考。

关键词：猪链球菌浙江屠宰场健康猪耐药致病

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1株9型猪链球菌全基因组分析

中国人兽共患病学报 2022年第8期38卷 707-713页

作者：席小燕李晓琪陈家苑彭凌韶关学院医学院韶关512026 韶关学院英东生物与农业学院韶关512005

目的探索9型猪链球菌基因组功能及遗传关系。方法采用生物信息学方法对1株9型猪链球菌强毒株GD18的全基因组序列进行注释,并与GenBank上的15株猪链球菌进行比较基因组学分析。结果GD18菌株基因组全长2067661 bp,总蛋白1961个,注释到COG... 详细信息

目的探索9型猪链球菌基因组功能及遗传关系。方法采用生物信息学方法对1株9型猪链球菌强毒株GD18的全基因组序列进行注释,并与GenBank上的15株猪链球菌进行比较基因组学分析。结果GD18菌株基因组全长2067661 bp,总蛋白1961个,注释到COG、GO、KEGG、CAZy和PHl-base数据库的基因分别占总蛋白的77.05%、71.29%、43.91%、4.49%和3.37%。毒力因子分析表明猪链球菌毒力因子的复杂以及并非所有的猪链球菌菌株都有一套通用的毒力因子。耐药基因分析表明GD18含多种类的耐药基因,且存在丰富的外排系统。蛋白预测结果显示GD18具有114个信号肽蛋白和30个分泌蛋白。16个菌株基因组比较分析发现共有的核心基因为1244个,非共有基因共1685个,特有基因共1417个。进化分析表明GD18与加拿大分离株89-3576-3亲缘关系最近,且国内菌株基本处在不同分支。结论对1株9型猪链球菌分离株的全基因组、基因功能、进化关系等进行分析,为9型猪链球菌基因组整体水平的研究奠定基础和提供数据支撑。

关键词：猪链球菌 9型基因组分析基因注释

猪链球菌2型调控因子Rex缺失株的构建及其致病性鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 201-205页

作者：王勇祝昊丹何孔旺范红结南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014 江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014

为鉴定猪链球菌2型强毒株SS2-1调控因子Rex基因的缺失对细菌毒力的影响,本研究利用同源重组方法构建猪链球菌Rex缺失株,命名为SS2-1△Rex,并通过缺失株的生物学特性及其小鼠致病性试验进行鉴定。结果显示亲本株、缺失株及互补株在溶血... 详细信息

为鉴定猪链球菌2型强毒株SS2-1调控因子Rex基因的缺失对细菌毒力的影响,本研究利用同源重组方法构建猪链球菌Rex缺失株,命名为SS2-1△Rex,并通过缺失株的生物学特性及其小鼠致病性试验进行鉴定。结果显示亲本株、缺失株及互补株在溶血能力、增殖特性和革兰染色形态无显著差异;在对小鼠致病性试验中,接种SS2-1组小鼠死亡率为87.5%,而SS2-1△Rex组死亡率为12.5%,SS2-1△Rex/p Rex对小鼠的毒力有所恢复,死亡率为50%;Log-Rank(Mantel-Cox)对数秩检验分析结果显示亲本株和缺失株对小鼠致病性存在显著差异。本研究结果表明调节因子Rex是猪链球菌2型的毒力相关因子。本实验为深入研究Rex调控毒力因子的转录和表达及其具体的机制奠定了实验基础。

关键词：猪链球菌 Rex 毒力调控因子