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猪链球菌耐药现状分析及感染防控措施

畜牧兽医学报 2023年第12期54卷 4920-4933页

作者：吕若一司晓慧孙志刚史晓敏刘晓晔北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室北京102206 北京农学院动物科学技术学院北京102206

猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)感染长期困扰我国养猪业的健康和可持续性发展,尤其耐药性菌株的出现阻断原本的链球菌病防治策略。针对近年来国内外S.suis的耐药性流行情况的总结,可以为防治S.suis感染提供有效措施。因此,作者首... 详细信息

猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)感染长期困扰我国养猪业的健康和可持续性发展,尤其耐药性菌株的出现阻断原本的链球菌病防治策略。针对近年来国内外S.suis的耐药性流行情况的总结,可以为防治S.suis感染提供有效措施。因此,作者首先总结近五年来在国内外多个地区规模化猪场S.suis感染情况(阳性率普遍>40%),其中我国各省市中流行范围最广的是血清2型菌株。随后,作者归纳了猪场中耐药性S.suis流行现状及其感染特点,发现规模化猪场中的耐药性S.suis集中出现在亚洲大陆以及欧洲且多数地区耐药性高达80%以上,以四环素类耐药菌株为主。而我国规模化猪场中耐药性S.suis主要以四环素类和大环内酯类耐药为主。此外,S.suis是人畜共患的病原,可以经呼吸道和血液造成全身感染。最后,针对S.suis菌株变异多的特点,作者提出了精准检测对于防控S.suis感染的重要性并总结了目前常用的快速检测手段。强调以疫苗接种为主的防控手段和联合用药及宿主导向的新型抗菌药物研发的防治措施,为后续S.suis的耐药性菌株感染的防治提供数据支撑。

关键词：猪链球菌耐药性现状防治措施

猪链球菌三价灭活苗的制备及对小鼠免疫效果的评价

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中国预防兽医学报 2022年第2期44卷 169-178页

作者：崔丽荣王嘉珍李亮何长生邢刚刘雪兰孙裴魏建忠李郁安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 安徽动物疫病预防与控制中心安徽合肥230091 马鞍山史记动物健康管理有限公司安徽马鞍山238251

为制备猪链球菌(SS)三价灭活苗并评价其对小鼠的免疫效果,本研究利用筛选出的3株SS菌株(代号/血清型分别为HF2/SS2、BB15-4/SS3、HBgu18-4/SS4)作为疫苗株,甲醛为灭活剂、ISA 201VG矿物油为佐剂制备灭活前分别为1.0×10^(9)cfu/mL、2.0... 详细信息

为制备猪链球菌(SS)三价灭活苗并评价其对小鼠的免疫效果,本研究利用筛选出的3株SS菌株(代号/血清型分别为HF2/SS2、BB15-4/SS3、HBgu18-4/SS4)作为疫苗株,甲醛为灭活剂、ISA 201VG矿物油为佐剂制备灭活前分别为1.0×10^(9)cfu/mL、2.0×10^(9)cfu/mL、4.0×10^(9)cfu/mL 3种活菌浓度的SS三价灭活苗,分别命名为V-a、V-b和V-c。以昆明鼠为实验动物模型,将V-a、V-b、V-c、商用疫苗均以0.2 mL/只的剂量采取颈背部皮下多点注射的方式依次免疫A~D组小鼠后进行以下免疫效果评价:采集首免后14 d与二免后7 d的小鼠血清,每组3只,通过间接ELISA方法检测各组小鼠血清中IgG抗体效价;以血清杀菌试验检测血清中功能性抗体水平。血清中IgG抗体检测结果显示,在各个免疫阶段,A~D组小鼠的IgG抗体含量始终保持相同水平且均显著高于阴性对照组(P0.05),具有高度杀菌活性。利用噻唑蓝溴化四唑溶液(MTT)测定小鼠脾淋巴细胞增殖指数(SI);采用双抗夹心ELISA方法检测小鼠血清相关细胞因子含量(IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-β、MCP-1);利用流式细胞术测定CD4^(+)与CD8^(+)外周血T淋巴细胞亚群的百分比。结果显示,二免后7 d,A~D组均能刺激小鼠血清中相关细胞因子水平、SI及CD4^(+)与CD8^(+)外周血T细胞亚群百分比持续上升且均显著高于阴性对照组(P<0.05)。二免7 d后,均以BZ1、BB15-4和HBgu18-4菌株攻毒各免疫组和攻毒对照组小鼠,阴性对照组接种等体积灭菌生理盐水,每组15只,观察7 d,计算小鼠死亡率;在小鼠攻毒3 d、7 d后,采用平板计数法测定攻毒菌株在小鼠体内的定植情况;并于攻毒7 d后取各组小鼠的肺、肝、脾、肾脏制作组织病理切片,观察各组织病理变化。结果显示,腹腔攻毒后7 d,A~D组及攻毒对照组小鼠免疫保护率依次为86.67%、100%、100%、80%和0;A~C免疫组小鼠各脏器的细菌定植量均显著降低且低于免疫组D(P<0.05);与D组相比,A~C组小鼠各器官病理变化均较为轻微。本研究结果表明,V-a、V-b和V-c免疫小鼠后均能产生良好的体液免疫和细胞免疫反应,其中V-b和V-c的免疫效力最优,均可有效抵抗SS2、SS3、SS4强毒株的攻击,可作为SS三价(血清2、3、4型)灭活苗的候选疫苗。本研究首次制备了新型SS三价灭活苗,并初步进行了免疫效果评价,为SS疫苗研发提供技术储备。

关键词：猪链球菌三价灭活苗(血清2、3、4型) 免疫效果昆明鼠

猪链球菌LPxTG蛋白HP0197与外源蛋白的融合表达及融合蛋白抗原活性的检测

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中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 532-537页

作者：朱金鲁卫东高广娟陈平刘思国张跃灵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069

为了从蛋白水平探究猪链球菌(S. suis)的表面LPxTG(Leu-Pro-x-Thr-Gly,x表示任何氨基酸)蛋白HP0197在S. suis表面展示外源抗原的可行性,本研究分别经PCR扩增HP0197蛋白的功能区编码基因片段hp0197(去除了HP1097全长蛋白aa1~aa40的转运... 详细信息

为了从蛋白水平探究猪链球菌(S. suis)的表面LPxTG(Leu-Pro-x-Thr-Gly,x表示任何氨基酸)蛋白HP0197在S. suis表面展示外源抗原的可行性,本研究分别经PCR扩增HP0197蛋白的功能区编码基因片段hp0197(去除了HP1097全长蛋白aa1~aa40的转运信号肽序列和aa524~aa56的CWA基序)、hp0197-18 ku基因片段(即HP0197蛋白的18 ku结构域的编码基因)、hp0197-Loop基因片段(HP0197蛋白aa201~aa523的编码基因片段),并通过融合PCR将gfp基因融合至上述两段基因即HP0197蛋白的18 ku结构域和Loop区编码基因之间,并构建表达HP-GFP融合蛋白的重组质粒及表达HP0197蛋白的重组质粒,经测序鉴定后将其分别转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导后采用SDS-PAGE鉴定。采用Ni-NTA亲和树脂方法纯化HP0197蛋白和HP-GFP融合蛋白后分别免疫小鼠,经间接ELISA检测首免后不同时间各组小鼠血清中的HP0197抗体和GFP抗体水平,评价HPGFP融合蛋白和HP0197蛋白的抗原活性。SDS-PAGE结果显示,分别经原核系统表达并纯化了HP-GFP融合蛋白和HP0197蛋白。间接ELISA结果显示,单独免疫HP0197蛋白的小鼠产生了HP0197抗体,但未产生GFP抗体;而免疫HP-GFP融合蛋白的小鼠,既产生了HP0197抗体,也产生了GFP抗体,且在首免后28 d这两种抗体效价均达1:204 800。上述结果表明在HP0197蛋白的18 ku结构域和Loop区之间插入外源蛋白,可在保留HP0197蛋白自身抗原活性的前提下,有效发挥外源蛋白的抗原活性。本研究首次在蛋白水平上证实了S. suis的LPxTG蛋白HP0197作为载体蛋白用于在S. suis表面展示外源蛋白的可行性,为进一步构建S. suis表面蛋白展示系统奠定了基础。

关键词：猪链球菌 LPxTG蛋白 HP0197 细菌表面展示载体蛋白

猪链球菌组氨酸三联体蛋白多抗的制备及Dot-ELISA检测方法的建立

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中国人兽共患病学报 2022年第8期38卷 657-665页

作者：蔡旭燊燕书豪赵芷若郑峰胡丹卢亚维申雪娇何铠熊晓辉操敏卢一辰南京工业大学食品与轻工学院南京210035 东部战区疾病预防与控制中心南京210002

目的建立一种猪链球菌的快速、简便检测方法。方法根据猪链球菌2型强毒株05ZYH33组氨酸三联体蛋白HtpsC蛋白基因序列设计特异性引物,将HtpsC蛋白基因克隆至原核表达载体pET-30a并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经0.2 mmol/L IPTG、15℃条件... 详细信息

目的建立一种猪链球菌的快速、简便检测方法。方法根据猪链球菌2型强毒株05ZYH33组氨酸三联体蛋白HtpsC蛋白基因序列设计特异性引物,将HtpsC蛋白基因克隆至原核表达载体pET-30a并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经0.2 mmol/L IPTG、15℃条件下诱导表达HtpsC蛋白。经Ni-IDA纯化后免疫新西兰白兔获得抗血清,通过亲和层析纯化制备Anti-HtpsC多克隆抗体。在此基础上,建立检测猪链球菌的斑点酶联免疫吸附检验法(Dot-ELISA),进一步优化了检测条件,并对该方法的特异性和敏感性进行评价。结果通过原核表达成功制备了HtpsC蛋白。Western blot结果显示,制备的Anti-HtpsC多克隆抗体可特异性结合HtpsC蛋白。优化的最佳多抗使用浓度为2.5μg/mL,最佳酶标二抗稀释倍数为1∶3000。特异性试验结果表明,含HtpsC蛋白基因的多种血清型猪链球菌均可呈现清晰的黄褐色斑点,但不含该蛋白基因的9型猪链球菌除外。而其他对照菌株:大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、化脓性链球菌、无乳链球菌和粪肠球菌均无斑点出现。灵敏度试验结果表明,该方法的检测限为1×10^(6)CFU/mL。结论本研究建立的Dot-ELISA方法特异性强,灵敏度良好,可用于检测多种血清型猪链球菌。

关键词：猪链球菌 HtpsC蛋白 Dot-ELISA

猪链球菌荚膜多糖抗血清的制备及在血清分型中的应用

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江苏农业科学 2023年第13期51卷 189-196页

作者：胡群肖琦温立斌彭大新何孔旺扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

为获得猪链球菌荚膜多糖及其抗血清,采用高压破碎法、乙醇分级沉淀法、酶解法以及Sevage法提取纯化了猪链球菌2、3、7、9型荚膜多糖,采用己二酸二酰肼(ADH)间桥法将荚膜多糖与牛血清蛋白(BSA)偶联,将其制备成油乳疫苗免疫BALB/c纯系雌... 详细信息

为获得猪链球菌荚膜多糖及其抗血清,采用高压破碎法、乙醇分级沉淀法、酶解法以及Sevage法提取纯化了猪链球菌2、3、7、9型荚膜多糖,采用己二酸二酰肼(ADH)间桥法将荚膜多糖与牛血清蛋白(BSA)偶联,将其制备成油乳疫苗免疫BALB/c纯系雌性小鼠制备抗血清,同时制备了猪链球菌2、3、7、9型全菌灭活苗抗血清进行了间接ELISA试验及玻片试验检测。试验结果显示,制备了高纯度的荚膜多糖,对荚膜多糖-牛血清白蛋白偶联物分析,荚膜多糖偶联蛋白后的分子量变大,荚膜多糖与牛血清白蛋白偶联比为1∶1,免疫小鼠表现出较高的免疫原性。而将单独的4种荚膜多糖以及荚膜多糖与牛血清白蛋白(牛血清白蛋白)混合作为比较也免疫小鼠不能激活免疫系统产生IgG抗体,不具有免疫原性。荚膜多糖结合蛋白抗血清与全菌灭活苗抗血清同时进行交叉ELISA以及玻片凝集试验,结果表明这4型荚膜多糖结合蛋白抗血清不与其他型菌株发生反应,具有型特异性,而全菌灭活苗抗血清与其他型菌株会发生一定程度的交叉反应。此研究结果为猪链球菌亚单位疫苗的研制以及猪链球菌分型试剂的制备提供了试验依据。

关键词：猪链球菌荚膜多糖抗血清间接ELISA 玻片凝集试验

猪链球菌2、7、9型西藏小型猪感染模型的初步研究

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中国动物传染病学报 2024年

作者：王娟张玮王星晨朱利塞王贵平孙明华贾爱卿广州市益豚猪业投资有限公司广东海大集团股份有限公司广东海大畜牧兽医研究院有限公司广东省养猪与猪病防控技术研究企业重点实验室

为探索西藏小型猪作为猪链球菌2、7、9型感染模型的可行性，本研究用2型、7型、9型猪链球菌分别以2×108CFU、7×109CFU、2×109CFU的剂量颈部肌肉接种60日龄的西藏小型猪，对照组猪同样方式接种等体积生理盐水，每组5头仔猪。接种后定... 详细信息

为探索西藏小型猪作为猪链球菌2、7、9型感染模型的可行性，本研究用2型、7型、9型猪链球菌分别以2×108CFU、7×109CFU、2×109CFU的剂量颈部肌肉接种60日龄的西藏小型猪，对照组猪同样方式接种等体积生理盐水，每组5头仔猪。接种后定期监测仔猪的临床症状和血液中带菌情况，30d后安乐死全部组别仔猪，观察其组织病理学变化。结果显示，与对照组相比，攻毒组仔猪均表现出发热、食欲减退、精神沉郁等临床症状；攻毒后仔猪血液带菌的时间为3～6d，组织病理学变化结果显示2型猪链球菌对西藏小型猪的致病力最强，其次为7型，病变主要集中在肺，脑、肝或关节等部位也有不同程度的病变。本研究初步确定西藏小型猪可作为猪链球菌2型、7型、9型人工感染模型，为临床猪链球菌的致病机制研究和动物模型建立提供参考依据。

关键词：猪链球菌西藏小型猪感染模型致病性

猪链球菌2型Δ0948互补株构建及对溶血素分泌和毒力的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第5期41卷 374-379页

作者：骈亚亚聂晶晶高振祥陶凤蓉胡继红北京医院国家老年医学中心国家卫生健康委临床检验中心中国医学科学院老年医学研究院 100730 北京医院检验科国家老年医学中心中国医学科学院老年医学研究院100730

目的:构建猪链球菌2型Δ0948互补株,验证对溶血素分泌和毒力的影响。方法:PCR扩增带启动子的SSU05_0948基因序列并连接至pAT18载体构建互补株,Western blot验证表达情况;绘制生长曲线比较互补株和野生株、突变株在不同时期的生长情况;CD... 详细信息

目的:构建猪链球菌2型Δ0948互补株,验证对溶血素分泌和毒力的影响。方法:PCR扩增带启动子的SSU05_0948基因序列并连接至pAT18载体构建互补株,Western blot验证表达情况;绘制生长曲线比较互补株和野生株、突变株在不同时期的生长情况;CD1小鼠攻毒模型验证互补株能否恢复突变株毒力;溶血素(SLY)溶血活性及Western blot比较互补株和野生株、突变株不同时间点对SLY蛋白分泌的影响。结果:互补株构建成功但SSU05_0948基因的表达低于野生株;互补株在对数生长期的生长速度明显慢于野生株和突变株,但在平台期一致;CD1小鼠毒力试验证明互补株可以基本恢复突变株毒力;SLY蛋白溶血活性及Western blot实验证明SSU05_0948在对数期早中期可以抑制SLY蛋白的分泌,而在对数期晚期及平台期则不影响SLY蛋白的分泌,互补株可以恢复SLY蛋白的分泌。结论:猪链球菌互补株CΔ0948能够恢复突变株Δ0948的毒力,SSU05_0948影响SLY蛋白的分泌,为猪链球菌防治提供新思路。

关键词：猪链球菌互补株溶血活性 SLY蛋白

猪链球菌中携带optrA基因的新型整合性接合元件ICESsuDF712解析

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中国动物传染病学报 2024年

作者：聂万森宋强强姚晓慧徐卫兵李宗杰魏建超刘珂邵东华邱亚峰马志永李蓓蓓夏利宁上海市浦东新区大团镇经济发展服务中心中国农业科学院上海兽医研究所新疆农业大学动物医学院

在临床分离的猪链球菌中发现了一个新型的携带optrA基因整合性接合元件（Integrative and conjugative element，ICE），本研究对该ICE元件的遗传结构、转移能力及其携带的多重耐药基因进行解析。采用微量肉汤稀释法测定猪链球菌DF712... 详细信息

在临床分离的猪链球菌中发现了一个新型的携带optrA基因整合性接合元件（Integrative and conjugative element，ICE），本研究对该ICE元件的遗传结构、转移能力及其携带的多重耐药基因进行解析。采用微量肉汤稀释法测定猪链球菌DF712的最小抑菌浓度（Minimum inhibitory concentrations， MICs），利用PCR技术检测恶唑烷酮类耐药基因，通过Illumia二代测序平台获取DF712全基因组数据，采用生物信息学分析和PCR技术获取携带optrA基因的ICE元件完整核苷酸序列，利用反向PCR和接合转移试验探索新型ICE元件的转移能力。结果表明，猪链球菌DF712中的optrA基因定位于一个ICE元件，该ICE元件全长69，029 bp，插入rpIL与hpy基因之间，拥有ICESa2603家族的典型特征，但其遗传信息和结构特征具有独特性，因此将其命名为ICESsuDF712。除optrA基因外，ICESsuDF712还携带其它耐药基因，包括erm(B）、spw、tet(O)、aadE。optrA基因两端由重复序列IS1216E包围，形成一个典型的IS1216E-optrA-IS1216E转座子结构插入ICESsuDF712之中。反向PCR结果表明ICESsuDF712和IS1216E-optrA-IS1216E结构均可自我剪切并形成环状结构，提示二者均有潜在的转移能力，但接合转移未能成功。综上所述，ICE元件是optrA基因在猪链球菌中转移传播的重要载体，应持续关注并检测该基因在动物源细菌的流行状况和传播机制。

关键词：猪链球菌耐药性整合性接合元件 optrA基因

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猪链球菌血流感染1例

中国感染与化疗杂志 2023年第4期23卷 492-494页

作者：郑永先陈瑞娟卢学俊吴若关小容刘其朋海口市人民医院急诊科海口570208

猪链球菌病(Streptococcus suis disease)是由多种致病性猪链球菌感染引起的一种人兽共患病,主要通过接触病死猪,经破损皮肤等侵入人体,导致患者在数小时至数天内发病[1-2]。人感染猪链球菌后,根据临床表现不同,可分为普通型、休克型、... 详细信息

猪链球菌病(Streptococcus suis disease)是由多种致病性猪链球菌感染引起的一种人兽共患病,主要通过接触病死猪,经破损皮肤等侵入人体,导致患者在数小时至数天内发病[1-2]。人感染猪链球菌后,根据临床表现不同,可分为普通型、休克型、脑膜炎型和混合型。休克型发病急骤,迅速出现多器官功能衰竭,死亡率高。目前,国内关于猪链球菌14型人源分离株的报道少见,现将海口市人民医院急诊科成功救治1例猪链球菌14型导致的重症休克患者诊疗经过报道如下。

关键词：猪链球菌血流感染治疗