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猪血清中抗猪丹毒丝菌特异性IgG的纯化

湖南农业大学学报（自然科学版） 2013年第2期39卷 183-187页

作者：胡云霏钱幸王淑琴余兴龙刘晓波罗璋湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

为了获得纯度高、特异性好的抗猪丹毒丝菌特异性IgG,采用抗原反向吸附结合重组葡萄球菌蛋白A(SPA)亲和层析法对猪丹毒丝菌阳性血清进行纯化。结果表明,血清用量对IgG的纯化结果影响不大,而细菌的用量则与IgG的获得量成正比;用猪丹毒丝... 详细信息

为了获得纯度高、特异性好的抗猪丹毒丝菌特异性IgG,采用抗原反向吸附结合重组葡萄球菌蛋白A(SPA)亲和层析法对猪丹毒丝菌阳性血清进行纯化。结果表明,血清用量对IgG的纯化结果影响不大,而细菌的用量则与IgG的获得量成正比;用猪丹毒丝菌与阳性血清吸附,初步纯化出的猪丹毒丝菌特异性IgG,再用SPA亲和层析法特异性的浓缩和纯化IgG,获得的抗体含量为240μg/mL,即从8 mL阳性血清中获得360μg猪丹毒丝菌特异性IgG,其纯度接近100%,可用于噬菌体展示的靶分子。

关键词：猪丹毒丝毒特异性免疫球蛋白G(IgG) 猪血清 IgG纯化纯度重组葡萄球菌蛋白A凝胶(SPA) SDS–聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)

猪血清联合ConA建立Balb／c小鼠肝纤维化模型及评价

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解剖学杂志 2009年第4期32卷 546-548页

作者：吴江锋肖和杰张艳琼徐凯柳长柏三峡大学分子生物研究所宜昌443002 三峡大学医学院宜昌443002 三峡大学第三临床医学院宜昌443002 三峡大学葛洲坝中心医院肝病科宜昌443002

肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是诸多致病因素导致肝硬化的前期病理过程。我国每年由乙型肝炎病毒等病毒感染引起的肝硬化患者众多。免疫法造模致肝纤维化与临床上慢性肝炎所致的肝硬化在发病机制上较为接近，有利于对肝纤维化的发... 详细信息

肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是诸多致病因素导致肝硬化的前期病理过程。我国每年由乙型肝炎病毒等病毒感染引起的肝硬化患者众多。免疫法造模致肝纤维化与临床上慢性肝炎所致的肝硬化在发病机制上较为接近，有利于对肝纤维化的发病机制进行深入研究，为筛选抗肝纤维化药物提供客观依据。随着分子生物学的不断发展，基因库中积累的小鼠基因数据极为丰富，为实验动物过程中肝纤维化的评估和分子治疗研究提供了便利。本研究采用猪血清联合刀豆蛋白A（con—canavalin A，Con-A）建立Balb／c小鼠肝纤维化模型，通过多种方法对其进行评价，寻找免疫学肝纤维化实验动物模型中新的标记分子。

关键词： Balb/c小鼠肝纤维化模型猪血清 ConA 实验动物模型肝硬化患者抗肝纤维化药物乙型肝炎病毒

猪血清肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶-9/13和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1/2表达的动态变化及下瘀血汤对其影响

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中国实验方剂学杂志 2009年第11期15卷 48-51页

作者：都广礼刘平王磊谭善忠龙爱华慕永平王春树上海中医药大学上海201203

目的:研究免疫性肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶9/13和基质金属蛋白酶组织抑制因子1/2表达的动态变化及下瘀血汤对其影响,探讨下瘀血汤抗肝纤维化的机制。方法:猪血清腹腔复制大鼠肝纤维化模型,造模8周后ig下瘀血汤的流浸膏,用药4周... 详细信息

目的:研究免疫性肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶9/13和基质金属蛋白酶组织抑制因子1/2表达的动态变化及下瘀血汤对其影响,探讨下瘀血汤抗肝纤维化的机制。方法:猪血清腹腔复制大鼠肝纤维化模型,造模8周后ig下瘀血汤的流浸膏,用药4周后和在造模过程中的1、24、、8周动态处死大鼠,获取标本,检测指标。结果:MMP-2/9的高活性和TIMP-1的高表达贯穿于本模型的始终。MMP-9/13蛋白表达在肝纤维化发生发展过程中有先抑制后升高,再次抑制而后升高的反复过程,并受TIMP-1/2表达影响;下瘀血汤可以提高MMP-9活性,促进MMP-9/13而抑制TIMP-1,2表达。结论:该模型有MMP-9/13和TIMP-1/2表达的失衡;下瘀血汤可通过调控MMp-9/13和TIMP-1/2的表达,降解过度沉积的细胞外基质而发挥抗肝纤维化的作用。

关键词：肝纤维化猪血清组织基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶且织抑制因子细胞外基质

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高效液相色谱法测定猪血清中的依维菌素

四川大学学报（医学版） 2005年第1期36卷 130-131,150页

作者：赵剑虹孙成均毛丽莎尹宗宁江波李永新四川大学华西公共卫生学院卫生检测学教研室成都610041 四川大学华西药学院药剂学教研室

目的　建立猪血清中依维菌素 (iverm ectin)的高效液相色谱测定方法。方法　以 0 .0 5 %偏磷酸 -甲醇(7∶ 3)沉淀猪血清蛋白后用乙酸乙酯提取依维菌素 ,离心后取上清液用旋转真空蒸发器挥干溶剂 ,用甲醇溶解残渣后进样分析。色谱柱为反... 详细信息

目的　建立猪血清中依维菌素 (iverm ectin)的高效液相色谱测定方法。方法　以 0 .0 5 %偏磷酸 -甲醇(7∶ 3)沉淀猪血清蛋白后用乙酸乙酯提取依维菌素 ,离心后取上清液用旋转真空蒸发器挥干溶剂 ,用甲醇溶解残渣后进样分析。色谱柱为反相 C18柱 (5μm ,2 5 0 m m× 4 .6 m m) ,流动相为甲醇 -水 (90∶ 10 ) ,流速 1ml/ m in,紫外检测波长为 2 4 5 nm。结果　方法检出下限为 0 .0 10 mg/ L ,线性范围为 0 .0 10～ 2 0 m g/ L ,相对标准差为 0 .78%～ 3.82 % ,加标回收率为 94 .0 %～ 10 0 .0 %。结论　本法操作简便 ,结果准确可靠。

关键词：高效液相色谱法猪血清依维菌素

猪血清中PCV-2全基因组的克隆与序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2018年第8期 71-74页

作者：徐国梁海英曾智勇汤德元王彬黄涛代振江叶百川张爱琼咸文何小莉贵州大学动物科学学院

为研究从猪血清中分离的猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV-2）与从发病猪组织中分离的PCV-2之间的差异、了解贵州地区PCV-2遗传变异情况、丰富贵州PCV-2全基因组序列库,试验采用来自贵州省毕节市金沙县、遵义市绥阳县、毕... 详细信息

为研究从猪血清中分离的猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV-2）与从发病猪组织中分离的PCV-2之间的差异、了解贵州地区PCV-2遗传变异情况、丰富贵州PCV-2全基因组序列库,试验采用来自贵州省毕节市金沙县、遵义市绥阳县、毕节市黔西县和贵阳市修文县的PCV-2抗体阳性猪血清,通过PCR扩增及通过T克隆获得了4株PCV-2全基因,分别命名为GZ-JS2015、GZSY2016、GZ-QX2014和GZ-XW2014,并进行测序;将测序结果与笔者收集的38株PCV-2的核苷酸序列进行比对分析。结果表明：在病毒血症期间猪血清中分离的PCV-2与从发病猪组织中分离的PCV-2并无太大差异;笔者收集的血清中贵州省为10株,其中8株为PCV-2b型、2株为PCV-2a型,说明在贵州地区流行的主要是PCV-2b型;来自贵州省同一地区的2株PCV-2处于不同的进化树分支上,与省外的PCV-2分离株亲缘关系较近,提示在贵州省流行的部分PCV-2可能由引种时流入。

关键词：猪血清组织 PCV-2 全基因组序列

不同亚群肝脏巨噬细胞在猪血清诱导大鼠免疫性肝损伤中作用

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中国病理生理杂志 2010年第7期26卷 1341-1347页

作者：何瑶黄文生杨荣萍陈瑜君任明中山大学附属第一医院消化内科广东广州510080 中山大学附属第一医院微创外科广东广州510080

目的:我们前期研究发现在正常大鼠肝脏中存在2个巨噬细胞亚群,本实验将探讨猪血清诱导免疫性肝损伤大鼠肝脏巨噬细胞的构成及作用。方法:(1)制作大鼠免疫性肝损伤模型。(2)肝脏病理组织学及免疫荧光研究。(3)流式细胞技术研究并分离肝... 详细信息

目的:我们前期研究发现在正常大鼠肝脏中存在2个巨噬细胞亚群,本实验将探讨猪血清诱导免疫性肝损伤大鼠肝脏巨噬细胞的构成及作用。方法:(1)制作大鼠免疫性肝损伤模型。(2)肝脏病理组织学及免疫荧光研究。(3)流式细胞技术研究并分离肝脏巨噬细胞。(4)实时定量PCR检测肝脏巨噬细胞、炎症及纤维化相关细胞因子及Ki67(细胞增殖抗原,MKI67)的表达。结果:(1)猪血清腹腔注射组(IPS组)大鼠肝内大量纤维间隔形成,α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性的肌成纤维细胞增生,ED2(CD163,表面抗原分化簇163)阳性细胞增多。(2)免疫荧光及印度墨注射后显示IPS组肝脏中巨噬细胞大小不一,自身荧光强弱不等,在肝内分布不同;GdCl3仅可清除体积大、自身荧光强的细胞。(3)自大鼠肝脏分离出2个巨噬细胞亚群,即ED2染色强阳性、自身荧光强的细胞(ED2high/AFhigh)和ED2染色弱阳性、自身荧光弱的细胞(ED2dim/AFdim),与对照组相比IPS组2个亚群细胞数量均显著增多。(4)ED2high/AFhigh细胞中主要表达与炎症相关的细胞因子,ED2dim/AFdim细胞则主要表达与纤维化相关的细胞因子。(5)ED2dim/AFdim细胞Ki67表达显著高于ED2high/AFhigh细胞,IPS组巨噬细胞Ki67表达显著高于对照组。结论:猪血清诱导免疫性肝脏损伤大鼠肝脏中亦存在2个巨噬细胞亚群,它们在肝脏损伤发病中发挥不同的作用,ED2dim/AFdim细胞增殖活跃,主要表达与纤维化相关的基因,可能在猪血清诱导的肝纤维化形成中起着重要作用。

关键词：流式细胞术巨噬细胞猪血清大鼠肝 CD163

清肝胶囊对猪血清所致大鼠慢性肝损伤肝纤维化的保护作用

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中成药 2007年第10期29卷 1508-1510页

作者：王庆端路浩夏薇江金花马方王宁河南省医药科学研究院河南省肝病药理重点实验室河南郑州450052

清肝胶囊(Qing Gan Jiao Nang,QGJN)为一中药复方制剂.属临床经验方,由龙胆、茵陈、黄芩、栀子、大黄等中药组成.具有清热解毒,疏肝理气等作用.经初步临床验证对各型急慢性肝炎、肝纤维化等肝病具有较好疗效.本研究采用由猪血清所致大... 详细信息

清肝胶囊(Qing Gan Jiao Nang,QGJN)为一中药复方制剂.属临床经验方,由龙胆、茵陈、黄芩、栀子、大黄等中药组成.具有清热解毒,疏肝理气等作用.经初步临床验证对各型急慢性肝炎、肝纤维化等肝病具有较好疗效.本研究采用由猪血清所致大鼠慢性肝损伤、肝纤维化模型观察其疗效及其作用机制报道如下.

关键词：清肝胶囊慢性肝损伤肝纤维化猪血清

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预处理猪血清IgG料液的超滤浓缩研究

食品科学 2008年第6期29卷 159-163页

作者：罗磊樊金铃孙红姣河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471003 南阳市土壤肥料工作站河南南阳473000

本实验对预处理猪血清IgG料液超滤浓缩进行了研究。选择螺旋卷式超滤设备,以截留液全循环错流方式对预处理IgG料液进行超滤浓缩。其最佳工艺参数为:样品pH值为7、温度50℃、超滤压力0.1MPa、浓缩倍数为10倍。浓缩后得到的样品中蛋白质... 详细信息

本实验对预处理猪血清IgG料液超滤浓缩进行了研究。选择螺旋卷式超滤设备,以截留液全循环错流方式对预处理IgG料液进行超滤浓缩。其最佳工艺参数为:样品pH值为7、温度50℃、超滤压力0.1MPa、浓缩倍数为10倍。浓缩后得到的样品中蛋白质含量为2.08%(W/V),IgG含量为1.42%(W/V),具有活性的IgG所占比例比超滤前略有下降,从91.3%降低到87.6%。

关键词：猪血清 G型免疫球蛋白超滤浓缩

聚丙烯酰胺凝胶电泳研究猪血清蛋白硫酸铵分级盐析

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食品科学 2006年第2期27卷 218-222页

作者：罗磊朱雅东丁霄霖江南大学食品学院江苏无锡214036

本文通过聚丙烯酰胺凝胶电泳研究了盐析时各种猪血清蛋白溶解度与硫酸铵饱和度的关系,结果显示猪血清蛋白析出区间为25%～70%硫酸铵饱和度,各种猪血清蛋白具有各自的沉淀区间。10倍稀释猪血清白蛋白最佳硫酸铵沉淀方案为:pH值7.4,调节... 详细信息

本文通过聚丙烯酰胺凝胶电泳研究了盐析时各种猪血清蛋白溶解度与硫酸铵饱和度的关系,结果显示猪血清蛋白析出区间为25%～70%硫酸铵饱和度,各种猪血清蛋白具有各自的沉淀区间。10倍稀释猪血清白蛋白最佳硫酸铵沉淀方案为:pH值7.4,调节硫酸铵饱和度到50%,离心除去沉淀,调清液pH值至4.5,硫酸铵饱和度至55%,沉淀白蛋白。pH值7.4,35%饱和度硫酸铵沉淀猪血清时,IgG得率为69.5%,纯度为76%;40%饱和度时,IgG得率为91.8%,纯度为61.6%。

关键词：聚丙烯酰胺凝胶电泳猪血清硫酸铵白蛋白 G型免疫球蛋白(IgG)