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猪胚胎体外培养影响因素的研究

畜牧与兽医 2010年第7期42卷 30-32页

作者：吴正三朱云干杨素芳陆凤花石德顺广西大学动物繁殖研究所广西南宁530005 江苏畜牧兽医职业技术学院江苏泰州225300

以孤雌激活胚胎为研究对象,对猪胚胎体外培养过程中的相关影响因素进行了探讨。体外成熟的猪卵母细胞经孤雌激活后,用添加0.5%牛血清蛋白(BSA)的NCSU-23(北卡罗来纳州立大学-23)培养基培养的囊胚率(36.7%)极显著高于添加5%、10%和15%胎... 详细信息

以孤雌激活胚胎为研究对象,对猪胚胎体外培养过程中的相关影响因素进行了探讨。体外成熟的猪卵母细胞经孤雌激活后,用添加0.5%牛血清蛋白(BSA)的NCSU-23(北卡罗来纳州立大学-23)培养基培养的囊胚率(36.7%)极显著高于添加5%、10%和15%胎牛血清(FCS)的NCSU-23(11.8%,18.5%和10.3%,P猪卵母细胞孤雌激活后的分裂率无显著影响(89.6%vs87.0%,83.4%和82.6%,P>0.05),但囊胚发育率随着TCM-199比例的增加而显著下降(30.1%vs25.0%,11.1%和1.1%,P猪胚胎体外培养效果优于添加FCS;猪胚胎的体外培养不需要成分复杂的培养液。

关键词：猪胚胎体外培养分裂率囊胚率

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猪胚胎死亡原因及其防制措施

畜牧与兽医 2006年第9期38卷 32-33页

作者：吴建民青海省循化县畜牧局青海循化811100

通过对母猪胚胎死亡时期及胚胎死亡原因的探讨,提出了遗传因素、母体营养、内分泌因素、排卵数与子宫内环境、热应激因素及疾病因素是造成猪胚胎死亡的原因,母猪胚胎的死亡给养猪业带来很大损失。从而进一步提出了防制猪胚胎死亡的措施... 详细信息

通过对母猪胚胎死亡时期及胚胎死亡原因的探讨,提出了遗传因素、母体营养、内分泌因素、排卵数与子宫内环境、热应激因素及疾病因素是造成猪胚胎死亡的原因,母猪胚胎的死亡给养猪业带来很大损失。从而进一步提出了防制猪胚胎死亡的措施,以降低胚胎的死亡率,提高母猪的妊娠率和分娩率,促进养猪业的发展。

关键词：猪胚胎胚胎死亡防制措施

血清及山羊卵丘细胞共培养对猪胚胎体外发育的促进作用

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华中农业大学学报 2014年第5期33卷 73-79页

作者：王慧利李静心王婧孟春花朱前明张俊钱勇曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所/江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室南京210014

为进一步完善猪胚胎体外发育系统,以孤雌激活胚胎为研究对象,依次对胚胎培养液种类、培养期间血清添加方式、卵丘细胞共培养体系进行筛选优化。结果表明,与常规的PZM3培养液相比,CR1aa并不适合猪胚胎的体外发育;猪胚胎在PZM3中培养4d后... 详细信息

为进一步完善猪胚胎体外发育系统,以孤雌激活胚胎为研究对象,依次对胚胎培养液种类、培养期间血清添加方式、卵丘细胞共培养体系进行筛选优化。结果表明,与常规的PZM3培养液相比,CR1aa并不适合猪胚胎的体外发育;猪胚胎在PZM3中培养4d后添加10%胎牛血清培养至第6天,体外发育能力得到显著改善,卵裂率、囊胚率、囊胚孵化率、囊胚细胞数分别达到95.1%、56.5%、27.3%、79.3;在此基础上,利用山羊卵丘细胞与猪胚胎进行共培养,将囊胚孵化率进一步提高至36.6%,初步建立了一套高效稳定的猪胚胎体外发育系统。

关键词：猪胚胎体外发育血清共培养凋亡

猪胚胎胰腺组织块移植和原胰岛移植治疗实验性糖尿病鼠的…

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中华器官移植杂志 1993年第4期14卷 148-150页

作者：刘雪梅姜枫勤山东省医学科学院基础医学研究所德国吉森大学第三内科医院

本文以链脲霉素诱导的裸鼠糖尿病为模型，比较了在相同条件下培养的猪胚胎胰腺组织块和原胰岛移植治疗糖尿病的疗效。结果表明，猪胚胎胰腺组织块和原胰岛移植均能在异体内衍化发育成熟并能逆转实验性裸鼠糖尿病的功能，但前者需较大剂... 详细信息

本文以链脲霉素诱导的裸鼠糖尿病为模型，比较了在相同条件下培养的猪胚胎胰腺组织块和原胰岛移植治疗糖尿病的疗效。结果表明，猪胚胎胰腺组织块和原胰岛移植均能在异体内衍化发育成熟并能逆转实验性裸鼠糖尿病的功能，但前者需较大剂量，而且见效慢。本研究提示，在移植前，纯化猪胚胎胰腺原胰岛，对提高临床疗效是非常重要的。

关键词：胰腺移植猪胚胎胰岛移植糖尿病

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猪胚胎细胞核移植

西北农业大学学报 1996年第6期24卷 1-5页

作者：陈乃清赵浩斌苟德明樊俊华西北农业大学动物科学系湖北省农科院畜牧兽医研究所

选用杜洛克２～１６细胞期胚胎卵裂球作核供体，湖北白猪卵母细胞作核受体，通过显微操作和电融合法构成重组胚。体外培养时，以融合前２ｈ，１ｈ激活及融合前不激活的卵母细胞做核受体的重组胚，发育率分别为６４．６％（３１／４８）... 详细信息

选用杜洛克２～１６细胞期胚胎卵裂球作核供体，湖北白猪卵母细胞作核受体，通过显微操作和电融合法构成重组胚。体外培养时，以融合前２ｈ，１ｈ激活及融合前不激活的卵母细胞做核受体的重组胚，发育率分别为６４．６％（３１／４８），５５．３％（２６／４７）和３４．５％（１９／５５）。６１枚重组胚移入同步发情的５头受体母猪输卵管，１头于妊娠１１７ｄ产下５头核移植仔猪。结果表明，激活卵母细胞作核受体优于未激活卵母细胞。

关键词：猪胚胎核移植电融合电激活

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猪胚胎体外培养影响因素的研究

猪胚胎体外培养影响因素的研究

作者：吴正三广西大学

学位级别：硕士

本研究以孤雌激活胚胎为研究对象，对猪胚胎体外培养过程中的相关影响因素进行了探讨。体外成熟的猪卵母细胞经孤雌激活后，用添加0.5％BSA的NCSU-23培养的囊胚率(36.7％)极显著高于添加5％，10％和15％FCS的NCSU-23(11.8％，18.5％和1... 详细信息

本研究以孤雌激活胚胎为研究对象，对猪胚胎体外培养过程中的相关影响因素进行了探讨。体外成熟的猪卵母细胞经孤雌激活后，用添加0.5％BSA的NCSU-23培养的囊胚率(36.7％)极显著高于添加5％，10％和15％FCS的NCSU-23(11.8％，18.5％和10.3％，P＜0.01)。在NCSU-23中添加一定比例的TCM-199(10％，25％和50％)，虽然对猪卵母细胞孤雌激活后的分裂率无显著影响(89.6％vs87.0％，83.4％和82.6％，P＞0.05)，但囊胚发育率随着TCM199比例的增加而显著下降(30.1％vs25.0％，11.1％和1.1％，P＜0.05)。将NCSU23中的亚牛磺酸浓度从原来的5mmol／L降低到2.5，1.0或0.5mmol／L时，对猪卵母细胞激活后的分裂率和囊胚发育率均无显著影响(P＞0.05)，但完全去掉亚牛磺酸则导致囊胚发育率极显著下降(1.4％)。在猪卵母细胞激活后的0～60h添加0.34mmol／L丙酮酸钠和5.4mmol／L乳酸钠，显著提高卵母细胞的分裂率(71.0％vs 63.9％，P＜0.05)，但60h后在培养液中添加丙酮酸钠和乳酸钠则极显著降低其囊胚发育率(3.0，6.3，3.3％vs20.2％，P＜0.01)。从胚胎培养开始就添加葡萄糖可提高胚胎的囊胚发育率(20.1％vs10.3％，P＜0.05)。在NCSU-23中添加12mmol／L的山梨醇，孤雌激活胚胎的囊胚发育率有所提高(32.4％vs26.0％)，但差异不显著(P=0.1875)。以上结果表明：(1)BSA的猪胚胎体外培养效果优于FCS;(2)猪胚胎的体外培养不需要成分复杂的培养液;(3)亚牛磺酸是猪胚胎培养液必不可少的重要成分，但其浓度可下调到现行的1／10;(4)乳酸盐和丙酮酸盐对猪胚胎的早期发育有促进作用，但不利于后期发育;葡萄糖对猪胚胎的整个培养发育过程均有促进作用。(5)山梨醇对猪胚胎的体外发育可能具有促进作用，但其效果有待进一步验证。

关键词：猪胚胎体外培养分裂率囊胚率

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猪胚胎伸长阶段滋养层代谢模式研究

猪胚胎伸长阶段滋养层代谢模式研究

作者：刘雨辰东北农业大学

学位级别：硕士

不同物种胚胎着床前在形态上存在巨大的差异,人和小鼠的胚胎在着床前不会发生显著的形态变化,而猪胚胎的形态上却经历了由球形、卵形、管状最终到丝状胚胎的巨大变化。有研究证明猪胚胎这种剧烈的形态变化是成功着床所必须的,这个过程... 详细信息

不同物种胚胎着床前在形态上存在巨大的差异,人和小鼠的胚胎在着床前不会发生显著的形态变化,而猪胚胎的形态上却经历了由球形、卵形、管状最终到丝状胚胎的巨大变化。有研究证明猪胚胎这种剧烈的形态变化是成功着床所必须的,这个过程涉及细胞的增殖、细胞重排、炎症反应等。细胞状态的变化往往伴随着代谢模式的调整,然而猪胚胎伸长过程中细胞的代谢动态变化情况还不清楚,同时该过程胚胎所处的子宫液的成分及子宫内膜代谢变化也有待研究。首先,本研究从转录组角度对猪胚胎发育的第8天、第10天和第12天进行研究,发现在猪胚胎伸长期间滋养层细胞的代谢方式在胚胎发育的第10天由氧化磷酸化转变为了糖酵解。进一步对三羧酸循环、氨基酸、脂质、核苷酸代谢相关基因进行了分析,发现第10天脂质代谢相关基因表达占比大幅提高,包括长链脂肪酸转运、代谢相关基因在第10天与12天出现表达,尤其是脂肪酸转运蛋白SLC27A4在第10天滋养层细胞(trophoblast cell,TE)中高表达,而β氧化的限速酶CPT1A在第12天TE中高表达。为了验证以上结果,对不同时期TE上SLC27A4与CPT1A进行了免疫荧光检测,结果也呈现时期特异性高表达,这些结果说明TE的增殖和形态变化过程中脂质代谢可能是主要的供能形式。随后,对第8天、第10天和第12天的子宫冲出液进行代谢物的靶向检测。数据表明,糖类代谢物在第10天的含量突然升高,然后再12天降低;氨基酸代谢物比较稳定,第8天到第10天逐渐升高,第12天降低;核苷酸及其衍生物第8天时最高,到第12天时逐渐降低;脂类代谢物第8天时最高,第10天降低,第12天又升高。最后,为了确定子宫液中的脂肪酸来源,通过免疫组化实验对SLC27A4蛋白在子宫内膜上的表达进行了检测,发现在胚胎发育的第8天、第10天和第12天时的子宫内膜,SLC27A4均有表达,证明子宫内膜在胚胎伸长时期参与了对脂肪酸的转运。通过以上研究结果得出以下结论:1)猪胚胎伸长时期滋养层的糖代谢由氧化磷酸化转为了有氧糖酵解;2)猪胚胎伸长时期子宫环境的糖类代谢物含量存在阶段特异性;3)脂肪酸氧化可能是滋养层伸长过程中细胞增殖和迁移的主要能量来源,子宫液中的脂肪酸可能来自于子宫内膜的转运。总之,本研究对猪胚胎滋养层伸长阶段的代谢模式进行了初步探究,加深了我们对猪着床前胚胎代谢调控的认知,也从代谢角度为猪体外胚胎培养体系的建立提供了参考。

关键词：猪胚胎伸长滋养层代谢模式脂代谢

共培养系统的体细胞类型和状态对猪胚胎早期发育的影响

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中国兽医学报 2002年第3期22卷 299-302页

作者：钱云师蔚群朱猛进丁家桐刘嘉茵刘红林南京医科大学第一附属医院人类生殖医学研究中心江苏南京210029 江苏省农业科学院畜牧兽医研究所江苏南京210014 扬州大学畜牧兽医学院江苏扬州225009 南京农业大学动物科技学院江苏南京210095

经体外成熟、受精和培养获得猪胚胎 ,采用体细胞共培养研究了体细胞类型和状态对胚胎早期发育的影响。取体外成熟的不同直径卵泡 (>5 m m,2～ 5 mm)卵母细胞的卵丘团 (颗粒细胞团 ) ,培养铺层后与猪受精卵共培养 ,组间受精卵的卵裂率和... 详细信息

经体外成熟、受精和培养获得猪胚胎 ,采用体细胞共培养研究了体细胞类型和状态对胚胎早期发育的影响。取体外成熟的不同直径卵泡 (>5 m m,2～ 5 mm)卵母细胞的卵丘团 (颗粒细胞团 ) ,培养铺层后与猪受精卵共培养 ,组间受精卵的卵裂率和发育能力无显著差异 ;根据卵巢的状况对猪输卵管上皮细胞 (POECs)的状态进行分组 ,受精卵和卵巢表面布满卵泡的 POECs共培养 ,卵裂率显著低于卵巢表面有黄体和 /或红体的 POECs共培养组 (P4-细胞的发育率显著高于卵巢表面布满卵泡的 POECs共培养组 (P4-细胞的发育率分别为 2 4.0 %、5 3.8% ,差异显著 (P胚胎体外发育的作用 ,一方面与体细胞类型有关。

关键词：猪卵泡卵母细胞体外成熟体外受精体外发育共培养系统体细胞类型细胞状态猪胚胎早期发育

ICSI受精卵胞质注射生产转基因猪胚胎的初步研究

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中国畜牧兽医 2018年第6期45卷 1618-1625页

作者：李红丽粟小平路粟雨刘帅刘庆友崔奎青石德顺广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530000

试验旨在探讨单精子胞浆内注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)法生产猪体外受精卵和应用猪ICSI受精卵进行胞质注射生产转基因胚胎的可行性。首先对比了猪体外受精(in vitro fertilization,IVF)受精卵与ICSI受精卵的胚胎发育效... 详细信息

试验旨在探讨单精子胞浆内注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)法生产猪体外受精卵和应用猪ICSI受精卵进行胞质注射生产转基因胚胎的可行性。首先对比了猪体外受精(in vitro fertilization,IVF)受精卵与ICSI受精卵的胚胎发育效率;然后观察了猪ICSI受精卵的双原核形成时间及效率,对精子注射到胞质后6~18h分6个时间段进行地衣红染色,对比精子进入卵胞质后的状态及原核形成;最后对猪IVF受精卵受精后8~10h及ICSI受精卵受精后12~14h进行EGFP-N1质粒(20ng/μL)胞质注射,观察胚胎发育效率及转基因效率。结果表明,ICSI受精卵的胚胎发育率(卵裂率89.4%和67.9%、囊胚率36.5%和16.1%)显著优于IVF组(P猪的体外受精卵试验;猪ICSI受精卵双原核在精子注射到卵胞质后12~14h形成,双原核形成率为54.90%,显著高于其余5个试验组(P胚胎卵裂率(86.2%和66.3%)、囊胚率(30.0%和13.6%)及转基因效率(18.5%和0)均显著高于IVF受精卵胞质注射试验组(P猪的研究奠定了基础。

关键词：单精子胞浆内注射(ICSI) 胞质注射转基因猪胚胎