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浙江中医药大学学报 2010年第6期34卷 833-835页

作者：沈瑞林徐广涛马时荣钱萍胡泊何旭锋浙江省嘉兴市中医院嘉兴31400 嘉兴学院医学院

[目的]探讨低温灌注对术中猪肾脏细胞的保护作用。[方法]实验猪随机分为3组(n=8):假手术对照组、低温灌注组、动脉阻断组。常规病理学观察细胞的形态变化,免疫组化检测Caspase-3蛋白表达和细胞凋亡指数。[结果]阻断后1h,动脉阻断组肾组... 详细信息

[目的]探讨低温灌注对术中猪肾脏细胞的保护作用。[方法]实验猪随机分为3组(n=8):假手术对照组、低温灌注组、动脉阻断组。常规病理学观察细胞的形态变化,免疫组化检测Caspase-3蛋白表达和细胞凋亡指数。[结果]阻断后1h,动脉阻断组肾组织可见细胞凋亡、坏死,低温灌注组无细胞坏死;动脉阻断组在0.5h时Caspase-3蛋白表达增强,高于假手术对照组和低温灌注组(P0.05);阻断后0.5 h和1h,动脉阻断组细胞凋亡指数(AI)显著高于假手术对照组和低温灌注组(P<0.01)。[结论]低温灌注能有效保护肾组织。

关键词：低温灌注猪肾脏细胞保护作用

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组蛋白去乙酰基酶及WT1基因对猪睾丸细胞和肾脏细胞凋亡及发育相关基因表达影响的研究

组蛋白去乙酰基酶及WT1基因对猪睾丸细胞和肾脏细胞凋亡及发育相...

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作者：褚美然吉林大学

学位级别：硕士

组蛋白乙酰化是最早发现的一种表观遗传修饰，乙酰化水平与基因的表达有着密切关联，乙酰化酶可以促进基因转录的激活，去乙酰化可以对组蛋白去乙酰基酶产生催化作用，这对基因沉默或者维持基因的抑制状态十分重要。哺乳动物的去乙酰基... 详细信息

组蛋白乙酰化是最早发现的一种表观遗传修饰，乙酰化水平与基因的表达有着密切关联，乙酰化酶可以促进基因转录的激活，去乙酰化可以对组蛋白去乙酰基酶产生催化作用，这对基因沉默或者维持基因的抑制状态十分重要。哺乳动物的去乙酰基酶按照同源性的酵母HDACs可分为三类。I类和II类HDACs对于抑制剂曲古抑菌素A（TSA）十分敏感。III类HDACs需要NAD+作为辅助因子。有报道称组蛋白乙酰化抑制剂曲古菌素A(TSA)、SAHA和丙戊酸盐等均能提高组蛋白乙酰化水平。而Scriptaid是一种新型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂，可诱导组蛋白超乙酰化，最重要的是与TSA相比其对细胞的毒性较小，因此在细胞功能研究上得到广泛的应用。目前对于组蛋白去乙酰基酶的研究大部分集中在肿瘤中的作用，而对于组蛋白去乙酰基酶在泌尿、生殖系统中的功能研究依旧较少，特别是HDACs对于哺乳动物睾丸发育的影响至今尚未见报道。有研究发现在小鼠发育的肾脏中I类HDAC被抑制可引起肾脏发育阻滞，细胞发生凋亡。猪在解剖、生理和代谢等方面与人类十分接近，药物代谢、器官大小和功能也基本相似，常被用来研究异种动物器官移植试验等。本实验通过体外培养猪肾脏细胞（PorcineKidney Cells，PK）及猪睾丸细胞（Swine Testis Cells, ST），用不同浓度的Sriptaid处理这两种细胞，检测I类HDACs中的HDAC1和HDAC2基因的表达水平;观察其对泌尿生殖细胞的增殖、凋亡的影响，以及研究HDAC1和HDAC2基因表达的变化对肾脏、生殖系统的发育相关基因表达的影响。威尔姆氏瘤基因1（wilms’tumor1, WT1）是在对遗传性肾胚胎肿瘤的分子生物学研究中发现的，主要表达于人类的胚胎泌尿生殖系统中，而成熟的肾脏细胞中WT1基因的表达量较低。本实验室在早前的研究中发现，下调WT1基因对泌尿生殖细胞的凋亡及发育基因均有抑制作用，而本实验目前的研究发现，组蛋白去乙酰基酶抑制剂Scriptaid同样对肾脏及睾丸的凋亡有促进作用及对发育基因有抑制作用，因此我们推测组蛋白去乙酰基酶与WT1基因对猪睾丸细胞可能有协同作用，并通过实验对这一假设进行了验证。本实验主要结果如下： 1、Scriptaid处理猪睾丸细胞（ST）后，I类HDACs中的HDAC1和HDAC2基因的表达随着Scriptaid浓度的增多而呈下调趋势;且Scriptaid浓度的升高使ST细胞的形态发生改变，并通过MTT法验证了其对细胞增殖有抑制作用;使用流式细胞术检测细胞的凋亡情况，结果表明ST细胞会随着Scriptaid浓度的增加而发生凋亡，而且用荧光定量PCR方法检测ST细胞的凋亡相关基因的表达变化，发现可导致抗细胞凋亡基因Bcl-2表达下调，而促细胞凋亡基因Bax表达上调，说明了组蛋白去乙酰基酶维持凋亡基因表达的平衡作用，从而维持ST细胞的活性;2、在猪肾脏细胞（PK）中，不同浓度的Scriptaid处理，同样对HDAC1和HDAC2基因的表达有下调作用;通过BrdU细胞免疫荧光染色检测，发现处理组的细胞增殖受到明显的抑制，并且发育相关基因SF1、GDNF、SRY的表达受到抑制;凋亡相关基因的表达也受到了明显的影响，其中抗细胞凋亡基因Bcl-2的表达呈下调趋势，而促细胞凋亡基因Bax的表达则呈上调趋势;3、本实验通过荧光定量PCR方法检测了不同浓度Scriptaid处理ST细胞24h，WT1基因的表达水平降低，乙酰化的组蛋白H4的表达量却随之上升。说明组蛋白去乙酰基酶抑制剂能够提高ST细胞中组蛋白的乙酰化并抑制WT1基因的表达。WT1基因的下调会引起泌尿生殖系统发育相关的基因表达也显著下调，说明组蛋白去乙酰酶抑制剂可能通过抑制WT1基因的表达，下调ST细胞的发育相关基因的表达。

关键词：组蛋白去乙酰基酶猪睾丸细胞猪肾脏细胞 WT1基因细胞凋亡发育相关基因

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蜂胶黄酮对PPV感染PK-15细胞后产生抗感染因子的研究

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黑龙江畜牧兽医（下半月） 2017年第3期 157-159页

作者：马霞郭振环郑宝亮王晓琳刘永录雷连成沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院博士后科研工作站山东滨州256600 吉林大学博士后科研流动站长春130062 河南牧业经济学院郑州450046 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

为了研究蜂胶黄酮对猪肾脏细胞(PK-15细胞)感染猪细小病毒(PPV)后产生抗感染因子的影响,试验将蜂胶黄酮从最大安全浓度250μg/m L倍比稀释5个浓度,分别为250.0,125.0,62.5,31.2,15.6μg/m L,与PPV一起加至长成单层PK-15细胞培养体系中,... 详细信息

为了研究蜂胶黄酮对猪肾脏细胞(PK-15细胞)感染猪细小病毒(PPV)后产生抗感染因子的影响,试验将蜂胶黄酮从最大安全浓度250μg/m L倍比稀释5个浓度,分别为250.0,125.0,62.5,31.2,15.6μg/m L,与PPV一起加至长成单层PK-15细胞培养体系中,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定蜂胶黄酮对PPV感染PK-15细胞后产生β干扰素(IFN-β)、γ干扰素(IFN-γ)和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)抗感染因子含量的变化。结果表明:与病毒对照组比较,在感染PPV后2,12 h,只有较高浓度的蜂胶黄酮具有显著提高PK-15细胞产生IFN-β、IFN-γ和i NOS抗感染因子含量的能力(P细胞在感染病毒后24,48,72 h,蜂胶黄酮对提高PPV感染PK-15细胞后产生抗感染因子能力比较弱。说明蜂胶黄酮提高PPV感染PK-15细胞产生抗感染因子主要集中在感染的早期。

关键词：蜂胶黄酮猪细小病毒猪肾脏细胞 β干扰素(IFN-β) 抗感染因子 γ干扰素(IFN-γ) 诱导型一氧化氮合酶(iN OS)

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