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壳聚糖纳米纤维支架对猪肝细胞分泌猪内源性逆转录病毒的影响

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中国生物医学工程学报 2011年第4期30卷 609-614页

作者：韩冰施晓雷肖江强张悦褚薛慧顾劲扬顾忠泽丁义涛南京大学医学院附属鼓楼医院肝胆外科南京210008 南京医科大学鼓楼临床学院肝胆外科南京210008 东南大学生物电子学国家重点实验室南京210096

探讨壳聚糖纳米纤维支架对肝细胞的PERV分泌量以及其感染性的影响。将新鲜分离的猪肝细胞接种于壳聚糖纳米纤维支架或普通条件下连续培养7 d,分为实验组(Nano组)和对照组(Hep组)。每天收集培养液检测逆转录酶(RT)活性,并通过RT-PCR和实... 详细信息

探讨壳聚糖纳米纤维支架对肝细胞的PERV分泌量以及其感染性的影响。将新鲜分离的猪肝细胞接种于壳聚糖纳米纤维支架或普通条件下连续培养7 d,分为实验组(Nano组)和对照组(Hep组)。每天收集培养液检测逆转录酶(RT)活性,并通过RT-PCR和实时定量PCR测定PERV RNA水平。通过western blot检测细胞裂解液中PERV gag 30蛋白含量。细胞培养液体外孵育HEK293细胞以测定其感染性。结果表明:实时定量PCR、RT活性以及western blot具有相似的变化趋势。在体外培养10 h和2 d出现PERV分泌高峰然后逐渐下降。除第6 dPERV RNA水平和第5 d蛋白水平实验组明显高于对照组外,其余均无明显差异。体外感染实验无HEK293细胞感染。壳聚糖纳米纤维支架会延长猪肝细胞的PERV分泌时间但对分泌量以及体外感染性并无明显影响,可安全用于生物人工肝。

关键词：壳聚糖纳米纤维支架猪肝细胞猪内源性逆转录病毒生物人工肝

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重型肝炎患者血浆对体外培养猪肝细胞的影响

中华肝脏病杂志 2005年第11期13卷 869-870页

作者：程永波王英杰张世昌刘俊陈志第三军医大学附属西南医院全军感染病研究所重庆400038

有研究证实肝衰竭患者血浆或血清对体外培养的HepG2、HHY41细胞有毒性作用[1].现阶段生物人工肝临床研究的主要细胞材料为猪肝细胞,肝衰竭患者血浆对其毒性作用研究鲜见报道,因此研究旨在采用猪肝细胞,观察我国数量众多的慢性乙型病毒... 详细信息

有研究证实肝衰竭患者血浆或血清对体外培养的HepG2、HHY41细胞有毒性作用[1].现阶段生物人工肝临床研究的主要细胞材料为猪肝细胞,肝衰竭患者血浆对其毒性作用研究鲜见报道,因此研究旨在采用猪肝细胞,观察我国数量众多的慢性乙型病毒性重型肝炎患者血浆对其体外影响.

关键词：肝炎血浆肝细胞病毒性重型肝炎猪肝细胞患者血浆体外培养毒性作用 HepG2 生物人工肝

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丙酸对猪肝细胞胆固醇和脂肪酸合成的影响

营养学报 2005年第3期27卷 261-262页

作者：夏枚生孙海香胡彩虹浙江大学动物科学学院浙江大学动物分子营养学教育部重点实验室杭州310029

大鼠日粮中添加0.5%丙酸钠显著降低了血清胆固醇水平,Chen等认为是易发酵纤维在大肠中的发酵产物丙酸介导了易发酵纤维降胆固醇的作用。I1leman等发现18mmol/L丙酸体外灌注大鼠肝脏能显著降低肝脏胆固醇和脂肪酸的合成。Beau1ieu等报道... 详细信息

大鼠日粮中添加0.5%丙酸钠显著降低了血清胆固醇水平,Chen等认为是易发酵纤维在大肠中的发酵产物丙酸介导了易发酵纤维降胆固醇的作用。I1leman等发现18mmol/L丙酸体外灌注大鼠肝脏能显著降低肝脏胆固醇和脂肪酸的合成。Beau1ieu等报道经盲肠导管灌注36mmol/kg bw^0.75丙酸16d,猪的门静脉丙酸浓度远低于18mmol/L。为此,本试验研究丙酸对猪肝细胞脂质合成的影响.[第一段]

关键词：脂肪酸合成细胞胆固醇丙酸 mol/L 发酵纤维胆固醇水平降胆固醇发酵产物大鼠肝脏体外灌注导管灌注猪肝细胞试验研究酸浓度门静脉

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大规模猪肝细胞低温保存方法的建立

解放军医学杂志 2003年第9期28卷 816-818页

作者：周霖薛毅珑田磊李雁凌张佐云解放军总医院北京100853

目的　建立大规模猪肝细胞的低温保存方法以满足生物型人工肝治疗的需要。方法　用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞 ;加入本实验室配制的含有 10 %二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide,DMSO)的营养液中 ;分别采用两种降温方法使 (1... 详细信息

目的　建立大规模猪肝细胞的低温保存方法以满足生物型人工肝治疗的需要。方法　用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞 ;加入本实验室配制的含有 10 %二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide,DMSO)的营养液中 ;分别采用两种降温方法使 (12 )× 10 10 猪肝细胞保存在 - 196℃液氮中 ;1个月后复温 ,观察在同一条件下培养不同时间后猪肝细胞形态、存活率和白蛋白、尿素、葡萄糖合成功能及对利多卡因的转化功能。结果　用两种降温方法保存的肝细胞 ,复温后细胞的存活率均较高 (梯度降温组和程控降温组存活率分别较冻存前降低了 4 7%和 8 6 %) ,其中前者肝细胞的尿素、葡萄糖合成功能较后者高。结论　所建立的冻存方法简单易行 ,可保存大量的猪肝细胞。

关键词：猪肝细胞低温保藏生物型人工肝

28℃条件下短期培养新生广西巴马小型猪肝细胞的初步观察

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第三军医大学学报 2005年第8期27卷 707-709页

作者：张世昌王英杰陈志刘俊程永波刘涛第三军医大学西南医院全军感染病研究所重庆400038

目的　对2 8℃条件下短期培养猪肝细胞的可行性进行初步评价。方法　将刚分离的新生广西巴马小型猪肝细胞采用2 8℃条件下的短期培养1～3d后,恢复3 7℃继续培养,观察升温前后肝细胞的形态及LDH、AST的释放量,检测2 8℃短期培养后肝细胞... 详细信息

目的　对2 8℃条件下短期培养猪肝细胞的可行性进行初步评价。方法　将刚分离的新生广西巴马小型猪肝细胞采用2 8℃条件下的短期培养1～3d后,恢复3 7℃继续培养,观察升温前后肝细胞的形态及LDH、AST的释放量,检测2 8℃短期培养后肝细胞的氨清除率和尿素合成量。结果　在2 8℃短期培养的肝细胞,用倒置相差显微镜观察到典型的形态特征,细胞未见明显增殖,恢复3 7℃继续培养后,肝细胞迅速增殖并维持典型的肝细胞形态;经2 8℃短期培养后的肝细胞和未经2 8℃短期培养的肝细胞均保持较强的尿素合成和氨清除能力,但在2 8℃培养2d和3d后的肝细胞尿素合成量较在2 8℃培养1d后的肝细胞尿素合成量显著降低(P 猪肝细胞的形态学特征和功能,有望成为一种有效的保存和运输生物人工肝细胞材料的方法。

关键词：猪肝细胞低温培养

冷冻猪肝细胞在生物型人工肝系统中的生存状态研究

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第三军医大学学报 2005年第12期27卷 1247-1249页

作者：周霖薛毅珑楼敏田磊李雁凌张佐云杨永平解放军302医院感染内科北京100039 解放军总医院老年医学研究所细胞生物学研究室北京100853

目的　研究冷冻复温后猪肝细胞在生物型人工肝支持系统(BALSS)中的生存状态。方法　用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞;将1×10 1 0 猪肝细胞冷冻保存在-196℃液氮中;1个月后复温,将等量的冷冻和新鲜猪肝细胞分别培养在BALSS... 详细信息

目的　研究冷冻复温后猪肝细胞在生物型人工肝支持系统(BALSS)中的生存状态。方法　用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞;将1×10 1 0 猪肝细胞冷冻保存在-196℃液氮中;1个月后复温,将等量的冷冻和新鲜猪肝细胞分别培养在BALSS中,比较其形态、存活率和白蛋白、尿素、葡萄糖合成功能及对利多卡因的转化功能。结果　冷冻保存的猪肝细胞,复温后其存活率较高;在培养于BALSS时其生化功能、利多卡因转化功能及超微结构与新鲜肝细胞类似。结论　用该冻存方法保存的猪肝细胞可试用于BALSS系统。

关键词：猪肝细胞低温保存生物型人工肝

微囊化猪肝细胞移植对大鼠急性肝功能衰竭的治疗作用

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中华消化杂志 2005年第5期25卷 298-299页

作者：刘菲刘雁冰熊伍军钟岚赵中辛上海市东方医院消化科 200120 上海市东方医院普外科 200120

国内外文献报道异种和同种肝细胞移植对急性药物性肝功能衰竭有相似的疗效.随着免疫隔离技术的发展,国内外已有学者将这一技术应用于同种肝细胞中,并取得了令人鼓舞的成果[1,2],本研究将免疫隔离技术之一的微囊包裹技术应用于猪肝细胞,... 详细信息

国内外文献报道异种和同种肝细胞移植对急性药物性肝功能衰竭有相似的疗效.随着免疫隔离技术的发展,国内外已有学者将这一技术应用于同种肝细胞中,并取得了令人鼓舞的成果[1,2],本研究将免疫隔离技术之一的微囊包裹技术应用于猪肝细胞,制备微囊包裹肝细胞,移植于肝衰竭大鼠体内,观察其逆转药物性肝衰竭的效果,以期为今后过渡到临床应用打下一定基础。

关键词：肝细胞移植急性肝功能衰竭治疗作用大鼠急性药物性肝功能衰竭微囊化免疫隔离技术微囊包裹技术药物性肝衰竭文献报道猪肝细胞临床应用国内外同种

用猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的初步研究

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第三军医大学学报 2003年第6期25卷 484-486页

作者：王英杰何念海刘俊牛润章李嘉佳王宇明李梦东第三军医大学附属西南医院全军感染病研究所重庆400038

目的　对培养猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的可行性进行初步评价。方法　采用自行研制的以新生实验小型猪肝细胞为基础的混合生物人工肝支持系统 ,对 5例慢性重型肝炎患者进行体外人工肝支持 ,综合评价其临床疗效和安全... 详细信息

目的　对培养猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的可行性进行初步评价。方法　采用自行研制的以新生实验小型猪肝细胞为基础的混合生物人工肝支持系统 ,对 5例慢性重型肝炎患者进行体外人工肝支持 ,综合评价其临床疗效和安全性。结果　 5例患者经混合人工肝支持后 ,肝衰竭均得到不同程度的控制 ,表现为临床症状和肝衰竭相关指标好转 ,肝性脑病改善。最终 2例好转出院 ,1例经肝移植存活 ,2例死亡 ,死亡原因与不良反应无关。

关键词：生物人工肝猪肝细胞重型肝炎慢性肝支持

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乳猪肝细胞的低温保存

世界华人消化杂志 2002年第2期10卷 173-176页

作者：陈钟丁义涛张鹤云南京大学医学院附属鼓楼医院肝胆外科江苏省南京市210008 南京大学生化系江苏省南京市210093

目的:探讨简单有效的猪肝细胞低温保存方法.方法:采用改良原位两步胶原酶灌注法分离乳猪肝细胞.将肝细胞接种到含100mL·L-1二甲亚砜?激素?生长因子和新生小牛血清的RPMI1640培养基中,分别用直接冻存法(A组)和短期培养后冻存法(B组)保存... 详细信息

目的:探讨简单有效的猪肝细胞低温保存方法.方法:采用改良原位两步胶原酶灌注法分离乳猪肝细胞.将肝细胞接种到含100mL·L-1二甲亚砜?激素?生长因子和新生小牛血清的RPMI1640培养基中,分别用直接冻存法(A组)和短期培养后冻存法(B组)保存10d.肝细胞复苏后在无血清培养基中培养5d,观察LDH漏出量?肝细胞活率?蛋白质?尿素合成功能?葡萄糖-6-磷酸酶活性及安定转化功能.同时测定新分离?培养肝细胞的上述指标作为对照组(C组).结果:两冻存组复苏后的肝细胞的活率(A组96.1%±19.4%,B组95.8%±20.0%vsC组98.9%±10.3%,P肝细胞活率?蛋白质合成功能?安定转化功能及葡萄糖-6-磷酸酶活性无明显区别,A组尿素合成功能(3.36±0.29nmol·cell-1)低于B组(3.70±0.12nmol·cell-1).结论:将猪肝细胞接种到含100mL·L-1二甲亚砜?激素?生长因子和新生牛血清的RPMI1640培养基中,采用计算机程控的直接冻存和快速解冻方法,复苏后的肝细胞在无血清培养基中培养5d,其活率和功能除尿素合成功能较低外,与短期培养后冻存的肝细胞相仿.

关键词：猪肝细胞生物人工肝暴发性肝衰竭 FHF 冷冻保存