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狐臭柴实时荧光定量PCR内参基因的筛选

植物生理学报 2023年第12期59卷 2309-2319页

作者：阳娇杨宁线王艳秋吴洪丽黄海东刘淼张明生贵州大学生命科学学院山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室贵阳550025

基于狐臭柴转录组数据,本文筛选出肌动蛋白基因(ACT)、18S核糖体RNA基因(18S rRNA)、α-微管蛋白基因(TUA)、β-微管蛋白基因(TUB)、翻译延伸因子基因(EF-1)和泛素连接酶基因(UBC)等6个候选内参基因,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术... 详细信息

基于狐臭柴转录组数据,本文筛选出肌动蛋白基因(ACT)、18S核糖体RNA基因(18S rRNA)、α-微管蛋白基因(TUA)、β-微管蛋白基因(TUB)、翻译延伸因子基因(EF-1)和泛素连接酶基因(UBC)等6个候选内参基因,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测不同处理(暗培养、乙烯处理、模拟干旱处理)下、狐臭柴不同器官中各候选内参基因的表达情况,并运用Ge Norm、Norm Finder和Best Keeper等软件对候选内参基因的表达稳定性进行综合分析。结果表明:在狐臭柴不同器官中,18S rRNA和ACT的表达最稳定;暗培养条件下可选择UBC、18S rRNA和EF-1作为内参基因,ACT、EF-1、UBC可作为在外源乙烯处理下的内参基因,模拟干旱处理需引入第6个基因进行矫正。此外,ACT和EF-1在所有样品中的表达稳定性均较好,可以用于荧光定量表达分析。本研究结果为狐臭柴相关基因的功能分析及其调控机理研究提供了基础。

关键词：狐臭柴内参基因表达稳定性实时荧光定量PCR

狐臭柴茎挥发油体外抗炎活性及基于NF-κB和MAPKs信号通路作用机制的研究

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中国医院药学杂志 2023年第1期43卷 34-41页

作者：付立霞丁芙蓉任娜贾小演田民义邓国栋王慧娟贵州大学酿酒与食品工程学院贵州贵阳550025 贵州大学西南药食两用资源开发利用技术国家地方联合工程研究中心贵州贵阳550025

目的:探究狐臭柴茎挥发油的体外抗炎活性及其作用机制。方法:通过水蒸气蒸馏法制备狐臭柴茎挥发油,采用GC-MS对其化学成分进行分析。通过Griess法和ELISA法测定挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞上清液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α... 详细信息

目的:探究狐臭柴茎挥发油的体外抗炎活性及其作用机制。方法:通过水蒸气蒸馏法制备狐臭柴茎挥发油,采用GC-MS对其化学成分进行分析。通过Griess法和ELISA法测定挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞上清液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平的影响;qRT-PCR检测iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达;Western blot测定挥发油对iNOS、COX-2、NF-κB和MAPKs信号通路蛋白的影响。结果:从挥发油中共鉴定出74种化学成分,其中主要的化学成分是茅术醇(13.50%)。挥发油显著抑制NO、TNF-α和IL-6的分泌(P狐臭柴茎挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型具有较好的抗炎效果,其内在的分子机制与下调NF-κB和MAPKs信号通路有关。

关键词：狐臭柴挥发油抗炎 NF-κB MAPKs

Plackett-Burman联用响应面法优化超声波-酸法提取狐臭柴果胶工艺

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食品与发酵工业 2021年第13期47卷 210-218页

作者：李扬杨宁线谢国芳王艳秋阳娇张明生贵州大学生命科学学院贵州贵阳550025 山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室贵州贵阳550025

探究超声波-酸法果胶提取工艺条件并分析狐臭柴叶片果胶分子结构与理化性质。通过单因素试验确定各因素的范围,再利用Plackett-Burman试验设计筛选影响果胶得率的关键因素,最后采用响应面法进行优化。结果表明,影响果胶提取的关键因素... 详细信息

探究超声波-酸法果胶提取工艺条件并分析狐臭柴叶片果胶分子结构与理化性质。通过单因素试验确定各因素的范围,再利用Plackett-Burman试验设计筛选影响果胶得率的关键因素,最后采用响应面法进行优化。结果表明,影响果胶提取的关键因素为pH、液料比、超声功率和反应时间。优化得到的工艺参数为pH值1.9、液料比12.5∶1(mL∶g)、超声功率450 W、反应时间95 min,在此条件下果胶得率为11.53%。通过高效液相色谱法对果胶分子质量进行测定,其重均分子质量(weight-average molecular weight,M w)为87.90 kDa,数均分子质量(number-average molecular weight,M n)为56.06 kDa,M w/M n为1.57。狐臭柴果胶中的单糖有鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、木糖、葡萄糖和果糖,其中半乳糖醛酸含量为70.64%,酯化度为77.77%,属于高酯果胶。狐臭柴果胶有很好的凝胶和增稠功能,且DPPH自由基清除率EC 50为(269.31±0.26)μg/mL,有良好的抗氧化活性。

关键词：狐臭柴果胶超声波提取工艺

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狐臭柴叶片中果胶提取条件的初步研究

中南林业科技大学学报 2014年第10期34卷 127-131,136页

作者：李祥栋张明生刘诗雅贵州大学生命科学学院贵州省药用植物繁育与种植重点实验室贵州贵阳550025

以狐臭柴叶为原料、柠檬酸为酸解液提取果胶,采用单因素实验、正交实验对酸浓度、提取温度、料液比和提取时间等条件进行探索,并以响应面实验设计方法进行工艺优化。结果表明:酸浓度和料液比是影响果胶酸解的主要因子;一定范围内,酸浓... 详细信息

以狐臭柴叶为原料、柠檬酸为酸解液提取果胶,采用单因素实验、正交实验对酸浓度、提取温度、料液比和提取时间等条件进行探索,并以响应面实验设计方法进行工艺优化。结果表明:酸浓度和料液比是影响果胶酸解的主要因子;一定范围内,酸浓度与果胶粗产率(Y1)呈线性正相关,料液比与果胶粗产率(Y1)呈线性负相关,二者与粗果胶半乳糖醛酸含量(Y2)的关系符合二元二次多项式方程模型,但随着酸浓度的增加和料液比的降低,半乳糖醛酸含量有下降趋势;半乳糖醛酸提取率(果胶有效提取率Y3)的拟合效果是一个平均值模型,即Y3=8.86%。在提取温度、提取时间分别为90℃和120 min,响应面的优化条件为酸浓度3.91%、料液比1∶44.09时,果胶粗产率、半乳糖醛酸含量和果胶有效提取率分别为36.72%、32.09%和11.78%。

关键词：狐臭柴果胶半乳糖醛酸提取条件 Premna puberula Pamp.

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贵州狐臭柴不同部位提取物及其抗氧化活性

食品与机械 2021年第8期37卷 180-184页

作者：杨宁线阳娇王艳秋张明生贵阳护理职业学院药学系贵州贵阳550081 贵州大学生命科学学院贵州贵阳550025

目的:丰富天然抗氧化剂的来源。方法:以贵州地区的狐臭柴(Premna puberula Pamb.)为原料,超声提取并检测了根、茎、叶中总酚和总黄酮含量,比较了根、茎、叶中柚皮素、芹菜素、芦丁、槲皮素4种黄酮类成分含量,测定了提取物对DPPH自由基和... 详细信息

目的:丰富天然抗氧化剂的来源。方法:以贵州地区的狐臭柴(Premna puberula Pamb.)为原料,超声提取并检测了根、茎、叶中总酚和总黄酮含量,比较了根、茎、叶中柚皮素、芹菜素、芦丁、槲皮素4种黄酮类成分含量,测定了提取物对DPPH自由基和ABTS+自由基的清除能力。结果:狐臭柴根、茎、叶中总酚含量分别为3.26,9.58,30.05 mg/g,总黄酮含量分别为0.22,0.58,6.54 mg/g,芦丁和芹菜素含量依次为茎>根>叶。各组织提取物的抗氧化活性均随浓度的升高而增强,与总酚、总黄酮含量呈正相关,其中叶提取物的抗氧化活性最强,当叶质量浓度为0.1 mg/mL时,DPPH自由基和ABTS自由基的清除率分别为82.5%,81.9%,与维生素C的总还原力接近。结论:狐臭柴具有良好的抗氧化活性。

关键词：狐臭柴总酚黄酮类抗氧化活性

狐臭柴果胶负载植物硒蛋白微凝胶生物活性研究

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狐臭柴果胶负载植物硒蛋白微凝胶生物活性研究

作者：向东湖北民族大学

学位级别：硕士

目的:我国野生狐臭柴资源丰富,其叶片中果胶含量高且酯化度较低,具有很高的利用价值。硒作为人体无法合成但必需的微量元素之一,但我国约有72%的地区属国际上公认的缺硒地区,高效、安全的饮食补硒方式成为研究的热点。本研究以狐臭柴果... 详细信息

目的:我国野生狐臭柴资源丰富,其叶片中果胶含量高且酯化度较低,具有很高的利用价值。硒作为人体无法合成但必需的微量元素之一,但我国约有72%的地区属国际上公认的缺硒地区,高效、安全的饮食补硒方式成为研究的热点。本研究以狐臭柴果胶为壁材,包埋植物硒蛋白形成微凝胶,以达到掩盖植物硒蛋白本身的特殊气味及缓释硒蛋白的目的,同时探究其生物活性,为加大狐臭柴与硒资源的深度开发与整合利用力度,以及后续开发富硒保健品提供了理论依据。方法:1.以狐臭柴叶片中果胶的提取率为参考指标,筛选合适的提取溶剂,在考察单因素料液比、提取时间、提取温度、提取液p H对提取率的影响基础上,通过响应面实验进一步优化提取条件,进而对提取的果胶用Sevage法除游离蛋白后,运用顶空固相微萃取法、傅里叶红外光谱和扫描电镜分别测定其酯化度、分子结构和微观结构。2.通过对比分析选择未除蛋白质的果胶作为壁材,包埋植物硒蛋白形成微凝胶,单因素实验结合响应面实验优化包埋工艺,测定其分子结构与微观结构。3.以维生素C为阳性对照,考察微凝胶对DPPH、ABTS的清除作用;人工配制胃液与肠液,体外模拟微凝胶的消化,测定消化液中的硒浓度探究微凝胶的消化吸收率。4.腹腔注射环磷酰胺建立小鼠免疫应激模型,以氢化可的松为阳性对照,检测微凝胶的抗氧化、抗炎及免疫调节作用。结论:1.从五种缓冲溶液(草酸-草酸铵、草酸-柠檬酸、柠檬酸-柠檬酸钠、柠檬酸-磷酸二氢钠、草酸-磷酸二氢钠)中优选出草酸-柠檬酸缓冲溶液作为狐臭柴叶片中果胶适宜的提取液;单因素结合响应面分析得到果胶提取的最佳工艺条件:提取时间93.0 min,料液比为1:50.5,提取温度为99.3℃,提取液p H为4.5,果胶提取率最高为26.3%。2.通过单因素结合响应面分析得到了硒蛋白包埋的最佳工艺条件:果胶浓度4.9%,包埋温度31.4℃,氯化钙浓度1.1%,硒蛋白添加量为0.6%,在最优工艺下,硒蛋白包埋率最大可达93.0%。3.体外抗氧化实验表明,载硒蛋白果胶微凝胶对DPPH、ABTS自由基的清除率强于植物硒蛋白和果胶的混粉(1:8.8),弱于植物硒蛋白和狐臭柴果胶,说明形成的微凝胶具有协同及缓释硒的效果;体外模拟消化实验表明,微凝胶中包埋的植物硒蛋白在模拟胃液中的最高可利用率仅为30.4%,在模拟肠液中的可利用率则达81.1%,且呈浓度依赖性,而植物硒蛋白在模拟胃液中的可利用率便达到74.4%,由此进一步说明载硒蛋白果胶微凝胶具有缓释硒的作用,促进其在肠道中吸收。4.小鼠体内实验表明,载硒蛋白果胶微凝胶能改善雄性小鼠的肝脏指数和脾脏指数,250 mg/kg BW的微凝胶改善效果最好;肝脏组织测定结果表示微凝胶对SOD酶活有促进作用且能显著减少组织中的MDA含量;血清细胞因子测定结果显示载硒蛋白果胶微凝胶能增加血清IL-2的含量,显著减少IL-6含量;与模型组相比,载硒蛋白微凝胶显著提升了血清免疫球蛋白Ig G、Ig M的含量。由此得出结论:载硒蛋白果胶微凝胶具有抗氧化、抗炎和增强体液免疫的功效。

关键词：狐臭柴果胶植物硒蛋白微凝胶生物活性

狐臭柴叶片生物量调控与神仙豆腐产量品质的相关性

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狐臭柴叶片生物量调控与神仙豆腐产量品质的相关性

作者：颜跃跃贵州大学

学位级别：硕士

以生长状态基本一致的三年生狐臭柴植株为材料,通过设施栽培,控制基肥用量、剪枝程度、打顶时期和采叶时间这四个因素,设计L9（34）正交试验。在狐臭柴生长期内定期考查植株形态指标,检测分析叶片生物量和相关生理生化指标,并制作神仙豆... 详细信息

以生长状态基本一致的三年生狐臭柴植株为材料,通过设施栽培,控制基肥用量、剪枝程度、打顶时期和采叶时间这四个因素,设计L9（34）正交试验。在狐臭柴生长期内定期考查植株形态指标,检测分析叶片生物量和相关生理生化指标,并制作神仙豆腐,探索提高叶片生物量的不同调控措施与神仙豆腐产量品质的相关性。主要结果如下:1、影响狐臭柴叶片产量高低的最主要因素为采叶时间,采叶次数越多,叶片产量越高。采叶次数减少后,基肥用量的作用开始突显。1号处理（基肥用量高、重度修剪、早打顶和频繁采叶）叶片产量最高,为69.94 g·株-1。2、狐臭柴叶片中不同生理生化指标的含量受不同因素影响:狐臭柴叶片含水量随植株生长不断降低,施用较多的基肥能够提高狐臭柴叶片的含水量。各处理下叶绿素含量的变化规律基本相同,适当的采叶在植株生长后期有利于延缓叶片衰老。采4次叶的处理在11月叶绿素含量高于其他处理。不同采叶次数对维生素C含量影响明显,采叶7次时8月含量达到最高值（2.0 mg·g-1左右）,然后急速降低,后期随着不断地采摘,含量逐渐上升。其他采叶次数下维生素C含量逐渐降低。频繁采叶下狐臭柴生长前期和中期叶片中的可溶性糖含量相对较高,且含量波动明显,呈先上升,后降低,然后上升的变化,7月和11月的可溶性糖含量较高（均在400～600 mg·g-1）,9月含量最低（200mg·g-1左右）。其他采叶处理下前期叶片中的可溶性糖含量均较低（250～350 mg·g-1）,11月时含量显著升高（﹥500 mg·g-1）。各处理对狐臭柴淀粉含量无显著影响,淀粉的含量在6月前较高（﹥800 mg·g-1）,随后随植株的生长含量逐渐降低。相同采叶次数下可溶性蛋白含量变化规律基本相同,不同处理下含量差异较大。频繁采叶影响叶片中蛋白的积累,适当减少采叶次数会得到改观。各处理的果胶含量变化呈现的规律相似,均呈现先上升后下降的趋势,不同处理下变化的幅度不同。3、狐臭柴生长前期（5月）和后期（10月以后）不能制成神仙豆腐,采叶次数的增多不仅能提高狐臭柴叶片产量,也能提高制成神仙豆腐的叶片质量。神仙豆腐主要由水、可溶性糖、可溶性蛋白、果胶组成。其中果胶含量与叶片中果胶含量呈极显著正相关（相关系数0.44）,其他指标含量与叶片中的含量无显著相关性。以上结果表明:狐臭柴植株在新一轮生长周期前应多施肥料,保证生长过程中的养分供应,以获得更多的叶片。为了培育良好株型,剪枝是必要的处理,如何剪枝可根据植株生长情况而定。待狐臭柴一级枝条长至4～5个节时就可进行打顶处理,保证植株二级分枝的生长。在栽培过程中,从6月起可以进行采叶制作神仙豆腐,采叶时间最好集中在6月月,根据植株生长状况可多次采叶,虽然采叶次数会对叶片相关指标的含量有影响,但并不影响此时期制作神仙豆腐。

关键词：狐臭柴植株处理叶片生物量生理生化指标神仙豆腐

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狐臭柴叶片果胶提取及干燥技术研究

狐臭柴叶片果胶提取及干燥技术研究

作者：李扬贵州大学

学位级别：硕士

本研究以狐臭柴为试验材料,构建了叶片的果胶提取工艺。以此为基础,研究了不同提取方法所得果胶的理化性质、结构、生物活性及干燥技术。主要结果如下:通过单因素试验确定各因素的范围,再利用Plackett-Burman试验设计筛选影响果胶得率... 详细信息

本研究以狐臭柴为试验材料,构建了叶片的果胶提取工艺。以此为基础,研究了不同提取方法所得果胶的理化性质、结构、生物活性及干燥技术。主要结果如下:通过单因素试验确定各因素的范围,再利用Plackett-Burman试验设计筛选影响果胶得率的关键因素,最后采用响应面法优化叶片果胶超声波辅助酸提法。结果表明,影响果胶提取的关键因素为p H值、液料比、超声功率和反应时间。优化得到的工艺参数为p H值1.9、液料比12.5∶1、超声功率450 W、反应时间95 min、超声时间10 min、反应温度85℃,在此条件下果胶得率为11.53%。通过正交试验探索叶片灭酶的条件。结果体现,影响微波灭酶各因素的主次顺序为:微波时间影响最大,其次是叶片质量和微波功率;最佳提取工艺是叶片质量10 g,微波功率420 W,微波时间60 s,微波灭活效果最好。经最优条件验证试验,得出最小的酶活性为22.72μg·min-1·g-1。采用响应面法优化叶片果胶酶提法。结果得出,最优工艺条件为:酶添加量82 U/g、液料比18∶1、反应时间65 min、反应温度55℃、反应p H值5.5,在此条件下果胶得率为7.81%。通过研究不同提取方法对叶片果胶理化性质、结构及生物活性的影响,结果显示:从叶片提取的果胶均为高酯化度果胶,超声辅助酸提法(UAAE)果胶提取率(11.53%)显著高于酸提法(AE)(10.24%)、微波辅助酶提法(MAEE)(9.89%)酶提法(EE)(7.81%)。不同提取方法所得果胶的半乳糖醛酸含量均较高且差异不显著,其中EE(82.05%)和MAEE(81.61%)相对较高;MAEE提取的乳化性和凝胶质量最好;红外谱图与单糖测定结果表明,不同提取方法对果胶的化学结构和单糖组成没有明显影响;四种方法提取的果胶的体外降糖和抗氧化性均具有计量依赖关系,其中MAEE活性最强。不同干燥方法对叶片果胶性质具有显著性影响,且对各指标的影响程度也有较大差异。从果胶纯度、酯化度、复水性、颜色和单位能耗综合考虑,鼓风干燥所需设备简单,但果胶品质较差,耗能较高;真空冷冻干燥的果胶质量最好,但所需设备昂贵,耗时长;真空干燥所需设备相对简单,易于操作,且能耗相对较低,产品品质较好,适合狐臭柴叶片果胶干燥的产业化应用。

关键词：狐臭柴叶片果胶提取条件干燥方法

狐臭柴叶片精油的生物活性及在香蕉保鲜中的应用

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狐臭柴叶片精油的生物活性及在香蕉保鲜中的应用

作者：李爽湖北民族大学

学位级别：硕士

目的:狐臭柴在我国分布广泛,在西南地区已形成产业化种植。狐臭柴作为一种药食兼用植物,目前只有少量初加工产品上市,鉴于狐臭柴含有丰富的功能性成分,值得进行深入研究与开发。植物精油因化学组分丰富多样,使得其具有多种生物活性,包... 详细信息

目的:狐臭柴在我国分布广泛,在西南地区已形成产业化种植。狐臭柴作为一种药食兼用植物,目前只有少量初加工产品上市,鉴于狐臭柴含有丰富的功能性成分,值得进行深入研究与开发。植物精油因化学组分丰富多样,使得其具有多种生物活性,包括抗氧化、抑菌、抗炎、抗癌和驱虫等,在食品、医药及化工行业中发展势头迅猛,而国内外研究对狐臭柴叶片精油生物活性的研究与应用鲜有报道。本文通过水蒸气蒸馏法提取狐臭柴叶片精油,对其化学成分及生物活性进行初步探究,同时将其应用于香蕉贮藏保鲜,以期为狐臭柴的综合开发利用提供一定的研究基础和实际应用。方法:通过气相色谱-质谱(GC-MS)联用仪分析鉴定狐臭柴叶片精油化学成分和相对含量的差异;以体外抗氧化实验初步探究狐臭柴叶片精油的总还原能力、对DPPH和ABTS自由基的清除率;以抑菌圈法确定不同微生物对精油的敏感性;以肉汤稀释法明确精油最小抑菌浓度和最小杀菌浓度;以细胞增殖实验来探究精油对人肺癌A549细胞株的增殖抑制率;制备壳聚糖-狐臭柴叶片精油复合保鲜涂膜,以香蕉采后颜色、重量、质构参数、酶活性及菌落总数的变化为指标,评价精油复合涂膜在香蕉采后储藏保鲜中的效果。结果:狐臭柴叶片精油中共鉴定出主要成分92种,占精油总量的96.42%,主要成分有左旋-β-蒎烯(10.62%)、顺式橙花叔醇(7.44%)、1-石竹烯(7.33%)、棕榈酸(7.15%)、α-石竹烯(6.00%)、蒎烯(5.37%)、α-蒎烯(5.15%)、亚麻酸(3.9%)、亚麻酸甲酯(1.37%)和芳樟醇(1.22%)等;体外抗氧化实验结果表明,狐臭柴叶片精油具有较强的还原能力,且对DPPH及ABTS自由基的半数抑制浓度(IC50)分别为14.34 mg/m L和0.91 mg/m L,对自由基具有较好的清除作用;抑菌圈法实验显示狐臭柴叶片精油对5种细菌的抑菌圈直径从大到小为:金黄色葡萄球菌>大肠杆菌>甲型副伤寒沙门氏菌>枯草芽孢杆菌>铜绿假单胞菌,对应的最小抑菌浓度(MIC)分别为11、44、22、22、44 mg/m L,对应的最小杀菌浓度(MBC)分别为44、88、44、44、88;精油对3种真菌抑菌圈直径从大到小为:黑曲霉>白色念珠菌>酿酒酵母;对应的最小抑菌浓度(MIC)分别为11、22、22mg/m L,对应的最小杀菌浓度(MBC)分别为22、44、44 mg/m L,较一般植物精油,其具有较强的抑菌杀菌能力;通过细胞增殖实验发现,狐臭柴叶片精油对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用具有显著的药物浓度和时间依赖性,2.64 mg/m L是狐臭柴叶片精油抑制人肺癌A549细胞生长的最佳参考浓度。此外,不同浓度狐臭柴叶片精油分别作用于人肺癌A549细胞3 h、4 h和5 h的IC50值分别为0.97、0.88、0.53 mg/m L;在香蕉保鲜实验中,随储藏时间的延长,壳聚糖-狐臭柴叶片精油复合涂膜有助于缓解果实硬度、胶着性及咀嚼性的下降,有利于保持SOD和POD较高的酶活性,可以有效抑制微生物的生长。结论:狐臭柴叶片精油中成分丰富,具有较强的抗氧化、抗菌和抗癌活性,在食品水果保鲜中具有潜在的应用前景。

关键词：狐臭柴精油化学成分生物活性香蕉保鲜