检索结果-南通市图书馆

中国兽医科学 2016年第4期46卷 430-435页

作者：张沁涯倪学勤曾东曾燕周梦佳彭芝榕周毅孙豪谢永斌四川农业大学动物医学院四川成都611130

为了解成都地区犬布氏杆菌病的流行情况并建立一种快速、可靠、特异、灵敏的布氏杆菌的检测方法,对来自宠物医院、狗场等的860份犬血清样品进行了血清学检测,并针对布氏杆菌属保守基因设计1对特异性引物并建立了一种基于SYBR Green的荧... 详细信息

为了解成都地区犬布氏杆菌病的流行情况并建立一种快速、可靠、特异、灵敏的布氏杆菌的检测方法,对来自宠物医院、狗场等的860份犬血清样品进行了血清学检测,并针对布氏杆菌属保守基因设计1对特异性引物并建立了一种基于SYBR Green的荧光定量PCR检测方法。血清学检测结果显示,成都地区存在犬布氏杆菌病的总阳性率为1.51%,其中流浪狗阳性率最高,其次是狗场,宠物医院犬布氏杆菌病的阳性率最低。本研究建立的荧光定量PCR具有较高的特异性,标准曲线相关系数为0.996,扩增效率为91%,能够用于未知样品的定量检测。用建立的荧光定量PCR检测了33份虎红平板凝集试验(RBPT)阳性血清,结果,其中10份呈阳性;检测了30份随机抽取的阴性血清,其中2份呈阳性。结论:本研究建立的荧光定量PCR与RBPT的检测结果有差异,两种方法均检测到成都地区犬布氏杆菌病。

关键词：犬布氏杆菌病血清学荧光定量PCR

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成都地区犬布氏杆菌病血清学调查及Real-time PCR检测方法的研究

成都地区犬布氏杆菌病血清学调查及Real-time PCR检测方法的研究

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作者：张沁涯四川农业大学

学位级别：硕士

犬布氏杆菌病(简称犬布病)是犬感染布氏杆菌后引起的一种传染性疾病,在犬舍中极易流行传播。我国近年来连续分离到犬种布氏杆菌,提示犬布病流行趋势逐渐上升。随着国内饲养宠物犬的家庭日益增多,犬布病的预防与控制也应得到更加密切的... 详细信息

犬布氏杆菌病(简称犬布病)是犬感染布氏杆菌后引起的一种传染性疾病,在犬舍中极易流行传播。我国近年来连续分离到犬种布氏杆菌,提示犬布病流行趋势逐渐上升。随着国内饲养宠物犬的家庭日益增多,犬布病的预防与控制也应得到更加密切的关注。本研究采用虎红平板凝集试验(Rose Bengal Plate Test, RBPT)和试管凝集试验(Standard tube Agglutination Test, SAT)调查了成都市及周边地区犬布病的流行情况,并初步建立了实时荧光定量PCR (Real-time PCR)快速检测方法。1.犬布氏杆菌病流行病学调查：本研究采集了成都市博爱动物医院门诊犬、金堂犬场和流浪犬的血清,共计1010份,分别使用光滑型和粗糙型RBPT对所有临床样本进行初步检测,阳性结果的血清再进一步使用光滑型和粗糙型SAT进行复检。结果显示,RBPT共检测出33份阳性血清,其中光滑型和粗糙型分别为14份和19份,光滑型和粗糙型RBPT阳性率分别为1.39%和1.88%,总RBPT阳性率为3.27%;SAT共检测出13份阳性血清,其中光滑型和粗糙型分别为1份和12份,光滑型和粗糙型SAT阳性率分别为0.10%和1.19%,总SAT阳性率为1.29%。本研究结果表明,流浪犬的布氏杆菌病阳性率最高,其次是犬场,而动物医院门诊犬的阳性率最低。2.布氏杆菌病Real-time PCR检测方法的建立：根据GenBank上提供的布氏杆菌属高度保守基因bcsp31设计一对特异性引物,以犬种布氏杆菌标准株RM6/66 bcsp31基因构建标准质粒pGM-T-bcsp31,并以此建立标准曲线。引物特异性结果表明,8种布氏杆菌标准菌株基因组DNA均扩增出198bp大小的片段,而对照菌株均呈阴性,说明建立的方法特异性好。从犬布氏杆菌病Real-time PCR检测方法的敏感性分析结果看出,普通PCR最低限度只能扩增10-2数量级浓度的DNA,而本次建立的Real-timePCR方法最低限度能够扩增10-4数量级浓度的DNA样本,灵敏度较普通PCR提高了100倍。对33份RBPT阳性血清进行Real-time PCR检测,其中10份呈阳性;对随机抽取的100份阴性血清进行Real-time PCR检测,6份呈阳性。本研究建立的Real-time PCR法能从阴性血清中检测出布氏杆菌,而对于RBPT阳性血清,检测结果与SAT检测结果有差异;两种方法均检测到成都地区犬布氏杆菌病。

关键词：犬布氏杆菌病流行病学调查血清学 Real-time PCR 检测

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