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犬子宫蓄脓大肠杆菌毒力基因及其LD50、耐药性和致病性研究

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犬子宫蓄脓大肠杆菌毒力基因及其LD50、耐药性和致病性研究

作者：蒋春阳南京农业大学

学位级别：硕士

在小动物临床上,犬子宫蓄脓是一种常见的生殖系统疾病,严重影响犬的生殖能力甚至威胁生命。本研究的目的在于：（1）分离鉴定犬子宫蓄脓细菌种类,分析大肠杆菌分离株的同源性;（2）检测和分析犬子宫蓄脓大肠杆菌的毒力基因及其毒力和耐... 详细信息

在小动物临床上,犬子宫蓄脓是一种常见的生殖系统疾病,严重影响犬的生殖能力甚至威胁生命。本研究的目的在于：（1）分离鉴定犬子宫蓄脓细菌种类,分析大肠杆菌分离株的同源性;（2）检测和分析犬子宫蓄脓大肠杆菌的毒力基因及其毒力和耐药性;（3）研究不同毒力的大肠杆菌对复制子宫内膜囊性增生/子宫蓄脓（CEH/P）动物模型及其毒力的影响。为此,本试验采取：（1）对患病犬子宫内容中的细菌进行常规分离培养、生化鉴定,并保存菌种;运用多位点序列分型（MLST）方法分别对大肠杆菌分离株的7个保守基因进行测序,并在数据库中确定大肠杆菌的分型,进行亲缘性比较,绘制同源性进化图;（2）针对大肠杆菌分离株,采用PCR技术检测其毒力基因的分布,选用小鼠半数致死量方法检测其毒力,并对分离株进行20种抗菌药物敏感试验;（3）选取临床表现健康、未有配种生育经历的9只雌性中华田园犬进行CEH/P动物模型复制。试验分3组,每组3只犬。第1、2组为试验组,第3组为对照组。先对试验组和对照组犬进行卵巢摘除术。与此同时,试验组犬左侧子宫角内埋置缝线,术后3-4周,试验组犬注射雌激素和孕酮,在其进入发情后期12d后,将毒力较强的大肠杆菌灌注到第1组试验犬子宫中,将毒力较弱的大肠杆菌灌注到第2组试验犬子宫中;在CEH/P动物模型复制成功后,对试验犬子宫内容物中细菌进行分离培养,采用大肠杆菌MLST方法检验其是否为灌注的大肠杆菌,并对大肠杆菌的毒力进行检测,与灌注前的毒力进行对比。结果表明：（1）在26例犬子宫内容物中有23例分离到病原菌,3例无细菌生长。生化检测显示,其中分离到大肠杆菌11例（47.8%）、金黄色葡萄球菌5例（21.7%）、克雷伯菌3例（13.0%）、,链球菌3例（13.0%）及铜绿假单胞菌1例（4.5%）;MLST分型结果显示,子宫蓄脓中大肠杆菌与肠道内粪源性大肠杆菌的亲缘性进化关系并不密切,但与尿道致病性大肠杆菌的某些菌株进化关系较亲近。（2）发现不同毒力基因分布的大肠杆菌之间存在毒力差异,含有毒力基因较多的分离株毒力相对较强;分离株对青霉素、苯唑西林、红霉素等有较高的耐药性,而对其他药物,尤其是氨基糖苷类抗生素、头孢类抗生素等则有较高的敏感性。（3）两组试验组分别灌注强、弱毒大肠杆菌犬均成功地复制CEH/P模型,说明大肠杆菌的毒力强弱对感染犬致CEH/P的影响不大,其并非致病的决定性因素;复制后CEH/P模型大肠杆菌毒力大部分增强,与灌注前比较差异显著（P＜0.05）,但也有不显著（P＞0.05）。结论：（1）大肠杆菌是犬子宫蓄脓病原菌的优势菌种,同肠道大肠杆菌相比,该菌与UPEC的同源性较近。（2）大肠杆菌中含有毒力基因的数量可能与其毒力呈正比;可采用氨基糖苷类抗生素和头孢类抗生素对大肠杆菌引起的犬子宫蓄脓进行临床治疗。（3）无论毒力强弱,使用大肠杆菌均可成功诱导CEH/P动物模型,且诱导后大部分细菌毒力略有增强。

关键词：犬子宫蓄脓大肠杆菌毒力基因毒力致病性

犬子宫蓄脓4种细菌多重PCR检测方法的建立及溶菌酶抑菌效果观察

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犬子宫蓄脓4种细菌多重PCR检测方法的建立及溶菌酶抑菌效果观察

作者：万圣山东农业大学

学位级别：硕士

犬子宫蓄脓是由于子宫内膜增生并继发化脓性感染而引发的子宫内膜炎，又称为犬囊性子宫内膜炎—子宫积脓综合征，即由内分泌或激素受体的异常导致犬发生子宫内膜囊性增生，在此基础上有微生物介入并大量繁殖造成化脓性感染，是中老龄母... 详细信息

犬子宫蓄脓是由于子宫内膜增生并继发化脓性感染而引发的子宫内膜炎，又称为犬囊性子宫内膜炎—子宫积脓综合征，即由内分泌或激素受体的异常导致犬发生子宫内膜囊性增生，在此基础上有微生物介入并大量繁殖造成化脓性感染，是中老龄母犬常见的生殖系统疾病之一。细菌感染是本病发生的重要因素，人们已从患犬子宫中分离出多种细菌，包括链球菌（Streptococcus）、沙门氏菌（Salmonella）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和大肠杆菌（Escherichia coli）等，建立其多重PCR反应快速检测方法，对该病的分子生物学技术研究具有重要意义。本实验根据链球菌EF-Tu（Elongation Factor Tu）基因、沙门氏菌invA（invasion proteinA）基因、金黄色葡萄球菌nuc（thermostable nuclease）基因和大肠杆菌phoA（Alkalinephosphatase）基因序列，设计并合成了4对引物，通过特异性检测，依次扩增出了166bp、284bp、406bp和555bp大小的目的DNA片段。对该多重PCR反应条件进行了优化，结果得到最佳退火温度为54℃，最佳引物浓度依次为100nmol/L、300nmol/L、400nmol/L和60nmol/L，最佳Mg2+浓度为1.5mmol/L。同时对该反应体系进行了敏感性测定，结果4种细菌的DNA最低检出限度依次为16.5pg/μl、3.11pg/μl、21.0pg/μl和3.52pg/μl。通过对所收集的9份犬子宫蓄脓病料进行多重PCR快速检测，结果4种细菌的检出率依次为88.9%、55.6%、11.1%和33.3%，混合感染占到了2/3。该多重PCR体系成功地从病料中检测出了链球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌，具有操作简便、快速、灵敏度高等优点，为今后人们在该病的微生物研究方面提供了新的思路，同时也为探讨本病的细菌分布、发病规律等提供一定的数据依据。本实验通过建立溶菌酶抑菌培养基，来初步探讨溶菌酶对上述4种细菌的抑菌能力，其浓度在19.5μg/ml0.0mg/ml的范围内按照2倍浓度梯度依次变化。结果溶菌酶抑制金黄色葡萄球菌的效果最佳，抑制沙门氏菌的能力最差，对4种细菌的最小抑菌浓度分别在0.313～0.625mg/ml、2.50～5.00mg/ml、0.0781～0.156mg/ml和0.625～1.25mg/ml之间。

关键词：犬子宫蓄脓多重PCR 链球菌沙门氏菌金黄色葡萄球菌大肠杆菌溶菌酶

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孕酮在犬子宫蓄脓发病过程中的作用

中国兽医学报 2014年第12期34卷 2013-2016页

作者：修小茜马卫明万圣山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

为探讨孕酮在犬子宫蓄脓发病中的作用,无菌采取健康犬与发病犬子宫角,进行常规石蜡切片、HE染色和孕酮受体的免疫组化检测(IHC);取健康犬子宫内膜上皮细胞进行原代培养。试验结果显示发病犬子宫内膜层不完整、脱落以及腺体数量增多、增... 详细信息

为探讨孕酮在犬子宫蓄脓发病中的作用,无菌采取健康犬与发病犬子宫角,进行常规石蜡切片、HE染色和孕酮受体的免疫组化检测(IHC);取健康犬子宫内膜上皮细胞进行原代培养。试验结果显示发病犬子宫内膜层不完整、脱落以及腺体数量增多、增大等;其子宫组织内孕酮受体阳性,并且集中分布在腺体周围;健康犬子宫组织内均未检测到孕酮受体。利用不同质量浓度的孕酮、雌激素对犬子宫内膜原代细胞进行刺激培养,发现孕酮刺激组的细胞体积明显增大。结果表明孕酮可导致内犬子宫内膜细胞病变,从而促进犬子宫蓄脓的发生。

关键词：犬子宫蓄脓犬子宫内膜细胞孕酮孕酮受体

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沈阳市犬子宫蓄脓的流行病学调查及其诊断

中国兽医学报 2024年

作者：刘祥雨赵艺鸿孙真真谢光洪郑慧华吉林大学动物医学学院谢博士动物医院浙江农林大学动物科技学院/动物医学学院

犬子宫蓄脓是一种子宫化脓性细菌感染致使炎症渗出物积聚的疾病，临床上在老年母犬中高发，常见临床症状为厌食、抑郁、嗜睡、多尿、腹围增大等。为进一步了解犬子宫蓄脓的流行病学特点，本研究对沈阳地区的310例健康犬和292例子宫蓄脓... 详细信息

犬子宫蓄脓是一种子宫化脓性细菌感染致使炎症渗出物积聚的疾病，临床上在老年母犬中高发，常见临床症状为厌食、抑郁、嗜睡、多尿、腹围增大等。为进一步了解犬子宫蓄脓的流行病学特点，本研究对沈阳地区的310例健康犬和292例子宫蓄脓病例基本信息进行统计学分析。结果显示子宫蓄脓常发于6～15岁中老年犬，以未绝育母犬为主；不同体型、品种对犬子宫蓄脓有一定影响，小型犬的发病率较高；在生育次数中，无生育史患犬占比最高；在发情周期中，发情后期病例数显著高于泛情期和发情期；且春秋季节是该病的高发时段。此外，本研究进一步利用多种方法对41例子宫蓄脓患犬和32例健康犬进行鉴别与诊断，血液学检查结果显示患犬体内存在严重炎症；阴道涂片证实了子宫蓄脓导致犬阴道炎症反应；影像学检查可见子宫角和子宫体中明显扩张和积液；病理组织学表明子宫蓄脓患犬子宫内膜层有炎性细胞浸润。总之，这一研究为临床子宫蓄脓的发病机理及诊治提供一定的理论依据和参考价值。

关键词：犬子宫蓄脓流行病学临床检查诊断

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微生物组技术分析犬子宫蓄脓宫内菌群特征

山西农业大学学报（自然科学版） 2022年第2期42卷 73-78页

作者：张玉珠郑慧华刘祥雨杨泞毓杜崇涛谢光洪吉林大学动物医学学院吉林长春130062 谢博士动物医院吉林长春130062

[目的]子宫蓄脓是犬常发的生殖系统疾病,对犬的生命健康造成了严重的影响,而细菌作为导致犬子宫蓄脓的重要原因之一,但目前其宫内菌群特征是不清楚的。因此,本文采用16S rRNA高通量测序技术对子宫蓄脓患犬的宫内菌群进行分析,为小动物... 详细信息

[目的]子宫蓄脓是犬常发的生殖系统疾病,对犬的生命健康造成了严重的影响,而细菌作为导致犬子宫蓄脓的重要原因之一,但目前其宫内菌群特征是不清楚的。因此,本文采用16S rRNA高通量测序技术对子宫蓄脓患犬的宫内菌群进行分析,为小动物临床子宫疾病的微生物学防治提供一种新思路。[方法]通过采集子宫蓄脓患犬的19份子宫内脓液和9份子宫内膜组织,分别提取其基因组总DNA,随后进行文库构建以及16S rRNA高通量测序,最后结合数据分析子宫蓄脓患犬的子宫内脓液和子宫内膜组织的菌群特征。[结果]Alpha多样性表明2组菌群的丰富度指数(Ace、Chao1)和多样性指数(Shannon、Simpson)无显著性差异(P>0.05);物种相对丰度表明两组样本在门水平的菌群主要是变形菌门、厚壁菌门和拟杆菌门,其中脓液组中的变形菌门含量显著低于内膜组织组,而厚壁菌门高于子宫内膜(P脓液组中志贺氏杆菌属和大肠埃希菌属的含量显著高于子宫内膜组,而绿脓杆菌属和嗜血杆菌属显著低于后者(P子宫蓄脓患犬的子宫内脓液和子宫内膜组织均存在特异的微生物菌群,但它们在犬子宫蓄脓中发生的作用仍有待进一步研究。

关键词：犬子宫蓄脓菌群 16S rRNA 脓液子宫内膜

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48例犬子宫蓄脓的中西医治疗体会

动物医学进展 2010年第11期31卷 123-125页

作者：倪艳沈留红余树民曹随忠四川农业大学动物医学院四川成都625014

收集了前来我校动物医院就诊的48例犬子宫蓄脓病例,随机分成A、B、C 3组,分别采用中医疗法15例、激素疗法20例和手术疗法13例。结果表明,中医疗法治愈率为33.3%,激素疗法治愈率为50%,手术疗法治愈率为84.6%。

关键词：犬子宫蓄脓中医激素手术

低频脉冲电刺激配合冲洗按摩治疗1例犬子宫蓄脓术后并发尿潴留

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中国兽医杂志 2019年第4期55卷 90-91页

作者：杨丽华陈贝妮温伟长春科技学院生命科学学院吉林长春130600 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118

犬子宫蓄脓是临床上常见的产科疾病,尤其没有配过种的老年犬较易发生。因患犬子宫内蓄积大量脓性分泌物不能排出,极易继发子宫内膜炎、脓毒败血症等,严重者甚至死亡,最好的根治方法是尽早实施卵巢子宫全摘除手术。

关键词：犬子宫蓄脓尿潴留并发脓性分泌物子宫内膜炎脓毒败血症产科疾病摘除手术

3例犬子宫蓄脓的细菌分离鉴定与病理组织学观察

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畜牧与兽医 2010年第8期42卷 111-112页

作者：徐瑞陈菁李建基扬州大学兽医学院江苏扬州225009

犬子宫蓄脓在临床上是常见的生殖道疾病,以中小型犬发病较多,主要表现出:精神沉郁、食欲不振、呕吐、腹泻、烦渴、多尿、阴道有排泄物等.引起子宫感染的细菌主要是大肠杆菌,其次是葡萄球菌、链球菌等.在实习期间,见到的3例犬子宫蓄脓病... 详细信息

犬子宫蓄脓在临床上是常见的生殖道疾病,以中小型犬发病较多,主要表现出:精神沉郁、食欲不振、呕吐、腹泻、烦渴、多尿、阴道有排泄物等.引起子宫感染的细菌主要是大肠杆菌,其次是葡萄球菌、链球菌等.在实习期间,见到的3例犬子宫蓄脓病例,通过对病犬子宫蓄脓细菌分离、生化试验,确诊为大肠杆菌和链球菌感染,并对子宫壁进行了组织学观察,现报告如下.

关键词：犬子宫蓄脓子宫蓄脓症细菌分离闭锁型