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抗吗啡疫苗抗体的制备及其特性鉴定

细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 368-370页

作者：马丽霞周起郑海波李生斌西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室陕西西安710061 西安市公安局刑事技术处陕西西安710061

目的制备高效价的抗吗啡疫苗的抗体,并对其特性进行鉴定。方法将人工合成的6-琥珀酰吗啡(M-6-S)与BSA在pH9.0碳酸盐缓冲液中交联成M-6-S-BSA。经凝胶柱过滤和硫酸铵法纯化后,用两种不同方案免疫BALB/c小鼠和SD大鼠,用ELISA法和中和抑制... 详细信息

目的制备高效价的抗吗啡疫苗的抗体,并对其特性进行鉴定。方法将人工合成的6-琥珀酰吗啡(M-6-S)与BSA在pH9.0碳酸盐缓冲液中交联成M-6-S-BSA。经凝胶柱过滤和硫酸铵法纯化后,用两种不同方案免疫BALB/c小鼠和SD大鼠,用ELISA法和中和抑制试验分别测定抗体的滴度和进行特异性鉴定;用辐射热甩尾(TF)反射试验检测M-6-S-BSA疫苗的免疫效果。结果用合成的M-6-S-BSA疫苗连续免疫小鼠8次,所获抗血清的效价可达1∶200000,大鼠免疫4次后抗血清的效价超过1∶20000。中和抑制试验表明,抗M-6-S抗体对吗啡和与吗啡有共同母环结构的6-单乙酰吗啡、海洛因及可待因具有较高的特异性。免疫大鼠腹腔注射2mg/kg的吗啡后,其甩尾(TF)反射受到明显抑制,最大效应百分率(%MPE)减少了74.7%,TF潜伏期回到基线水平的时间明显快于对照组。结论成功地制备M-6-S-BSA疫苗,用其免疫小鼠和大鼠均可产生高滴度和特异性抗吗啡抗体。该抗体可明显减低大鼠对吗啡的抗伤害感受,为进一步研究吗啡疫苗抗体对抗吗啡的成瘾作用奠定了基础。

关键词：吗啡疫苗抗体制备特性鉴定

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抗死亡受体-5单克隆抗体的制备及特性鉴定

细胞与分子免疫学杂志 2006年第4期22卷 514-516,520页

作者：白慧玲赵粤萍刘广超马远方河南大学免疫学研究所细胞与分子免疫学实验室河南开封475001 河南大学细胞与分子免疫学实验室河南开封475001

目的：研制抗DR5单克隆抗体（mAb），并鉴定其特性。方法：以纯化的DR5免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗DR5mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DR5mAb的亚类。用ELISA法测定sDR5对抗DR5 mAb与DR5结合的阻断作用及流式细胞术检测与Jur... 详细信息

目的：研制抗DR5单克隆抗体（mAb），并鉴定其特性。方法：以纯化的DR5免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗DR5mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DR5mAb的亚类。用ELISA法测定sDR5对抗DR5 mAb与DR5结合的阻断作用及流式细胞术检测与Jurkat细胞膜上DR5结合的阻断作用。以鉴定mAb的特异性。用间接ELISA法检测腹水mAb的效价、亲和常数并进行表位分析。结果：获得4株可分泌抗DR5 mAb的的杂交瘤细胞系YM366EC、YM366ED、YM369F5和YM369E6。4株mAb的Ig亚类均为IgG1；腹水mAb效价为1×10^-4-5×10^-6；亲和常数为1×10^9水平，4株mAb可识别2种不同的抗原表位。结论：获得4株抗DR5的mAb，为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件。

关键词： DR5 单克隆抗体特性鉴定亲和常数

抗MDV-1 VP22羧基端单克隆抗体的制备与免疫学特性鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第3期23卷 249-252页

作者：宋翠萍陈鸿军秦爱建张晨飞扬州大学兽医学院江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009

目的:制备抗血清I型马立克氏病病毒(MDV-1)VP22的单克隆抗体(mAb),并鉴定其免疫学特性。方法:在原核系统中表达VP22羧基端区域(94-243aa),获得融合表达产物GST-VP22C。将该表达产物切胶免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备抗MDV-1 VP22C的mAb,... 详细信息

目的:制备抗血清I型马立克氏病病毒(MDV-1)VP22的单克隆抗体(mAb),并鉴定其免疫学特性。方法:在原核系统中表达VP22羧基端区域(94-243aa),获得融合表达产物GST-VP22C。将该表达产物切胶免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备抗MDV-1 VP22C的mAb,并通过ELISA、间接免疫荧光(IFA)、Western blot鉴定其特性。结果:获得了2株可稳定分泌抗MDV-1 VP22C的mAb的杂交瘤细胞,命名为3F7、4E4。IFA鉴定表明,两株mAb均能与感染MDV-1的成纤维细胞反应,其中,3F7 mAb染色呈现MDV空斑,而4E4mAb呈现整个单层的细胞核荧光。ELISA和Western blot分析表明,3F7能与杆状病毒表达的VP22反应,4E4不具备该特性。对3F7 mAb进一步鉴定,确定了该mAb针对的具体位置在94-193aa处,是蛋白转导域的预测位置。结论:成功地制备了抗MDV-1 VP22C的mAb,为深入研究VP22蛋白的转导功能提供了有用的试剂。

关键词：马立克氏病病毒 VP22羧基端单克隆抗体特性鉴定

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抗白念珠菌芽管单克隆抗体的制备及特性鉴定

细胞与分子免疫学杂志 2007年第4期23卷 350-352页

作者：孙仁美宋秋荷唐玮王鲁叶庆佾第三军医大学西南医院皮肤科重庆400038 九江学院医学院江西九江332000 重庆市第一人民医院皮肤科重庆400011

目的制备抗白念珠菌芽管的单克隆抗体mAb03.2C1-C2,并对其特性进行分析,以探讨其应用于实验室检测的可行性。方法利用杂交瘤技术制备分泌抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原mAb的杂交瘤细胞株,对mAb的Ig亚类进行鉴定。用间接免疫荧光(IIF)法对... 详细信息

目的制备抗白念珠菌芽管的单克隆抗体mAb03.2C1-C2,并对其特性进行分析,以探讨其应用于实验室检测的可行性。方法利用杂交瘤技术制备分泌抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原mAb的杂交瘤细胞株,对mAb的Ig亚类进行鉴定。用间接免疫荧光(IIF)法对mAb的抗体活性及特异性进行测定。在白念珠菌芽管形成条件下,加入mAb,观察其对白念珠菌芽管诱导的抑制及白念珠菌对上皮细胞、内皮细胞黏附的抑制。复苏冻存的杂交瘤细胞株,分析其持续分泌mAb的能力。结果获得1株mAb03.2C1-C2,其Ig亚类为IgG1。该mAb仅与白念珠菌芽管特异性结合,并能显著降低白念珠菌芽管的生成率以及在芽管形成条件下对上皮细胞、内皮细胞的黏附,其抑制作用与该mAb的浓度呈正比。结论制备的mAb03.2C1-C2抗体效价高,在体外能抑制白念珠菌芽管的形成,降低白念珠菌的侵袭力。而且其对白念珠菌芽管具有高度的特异性,可用于白念珠菌和都柏林念珠菌的快速鉴别。

关键词：白念珠菌芽管单克隆抗体特性鉴定

抗肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA单克隆抗体的制备及其特性鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第7期23卷 657-659页

作者：余抒罗萍陈洪章李海侠毛旭虎第三军医大学临床微生物学教研室重庆400038

目的:制备抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA单克隆抗体(mAb)。方法:以重组EspA蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术并且联合间接ELISA筛选只针对EspA的杂交瘤细胞株。以Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类,ELISA、Western blot... 详细信息

目的:制备抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA单克隆抗体(mAb)。方法:以重组EspA蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术并且联合间接ELISA筛选只针对EspA的杂交瘤细胞株。以Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类,ELISA、Western blot及免疫荧光技术鉴定抗体的免疫学特性。结果:获得3株稳定分泌抗EspA杂交瘤细胞的mAb,Ig亚型分别为IgG1κ型、IgG2aκ型、IgG2bκ型。Western blot和免疫荧光分析表明,3株杂交瘤细胞制备的mAb腹水都能特异地结合重组EspA蛋白和识别O157:H7的EspA成分。结论:成功地制备了抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA的mAb,并证明了该mAb的生物学活性,为深入研究肠出血性大肠杆菌O157:H7的致病机制提供新的手段。

关键词： EspA 单克隆抗体特性鉴定

甘薯及其近缘野生种Ipomoea lacunosa种间体细胞杂种的特性鉴定和遗传组成分析

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植物生理学报 2017年第5期53卷 839-848页

作者：贾礼聪翟红何绍贞孙亚萍杨育峰刘庆昌中国农业大学农业部甘薯生物学与生物技术重点实验室/教育部作物杂种优势研究与利用重点实验室/北京市作物遗传改良重点实验室北京100193

以甘薯(Ipomoea batatas)品种‘徐薯18’(2n=6x=90)及其近缘野生种I.lacunosa(K61,2n=2x=30)的种间体细胞杂种XL1为材料,利用形态学与细胞学分析、酯酶同工酶、重金属离子胁迫的离体鉴定、扩增片段长度多态性(AFLP)、甲基化敏感扩增多态... 详细信息

以甘薯(Ipomoea batatas)品种‘徐薯18’(2n=6x=90)及其近缘野生种I.lacunosa(K61,2n=2x=30)的种间体细胞杂种XL1为材料,利用形态学与细胞学分析、酯酶同工酶、重金属离子胁迫的离体鉴定、扩增片段长度多态性(AFLP)、甲基化敏感扩增多态性(MSAP)等技术对XL1的特性和遗传组成进行了分析。结果表明,XL1对铝和铬的耐受性显著高于‘徐薯18’,胁迫条件下,XL1的超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性显著高于‘徐薯18’,而丙二醛(MDA)含量显著低于‘徐薯18’。XL1的基因组含有双亲的特异条带和改变的条带,XL1的胞嘧啶甲基化位点由双亲的特异位点和改变的位点组成,XL1中‘徐薯18’特异的基因组条带和甲基化位点比例显著高于I.lacunosa的比例。XL1具有与‘徐薯18’相同的叶绿体和线粒体基因组组成。本研究进一步证明了体细胞杂交在甘薯遗传改良上的重要作用,同时,本研究结果将有助于甘薯近缘野生种中的有益基因发掘,也有助于进一步理解甘薯栽培种的进化和系统发育。

关键词：甘薯 I.lacunosa 体细胞杂种特性鉴定遗传和表观遗传变异

青蒿花粉变应原Art a1基因的克隆、表达及特性鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第9期25卷 768-772页

作者：何毅华刘志刚高波吉坤美邢苗深圳大学生命科学学院 518060 深圳市微生物基因工程重点实验室

目的克隆、表达和鉴定青蒿花粉变应原Arta1。方法在成功构建青蒿花粉cDNA文库的基础上,用蒿属花粉过敏患者的阳性混合血清进行免疫学筛选,所获阳性克隆亚克隆入pET24a(+),经IPTG诱导表达后,通过Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化,并采... 详细信息

目的克隆、表达和鉴定青蒿花粉变应原Arta1。方法在成功构建青蒿花粉cDNA文库的基础上,用蒿属花粉过敏患者的阳性混合血清进行免疫学筛选,所获阳性克隆亚克隆入pET24a(+),经IPTG诱导表达后,通过Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化,并采用Westernblot和ELISA检测其IgE结合活性。结果选用阳性血清从青蒿花粉cDNA文库中筛选到1个阳性克隆,经序列测定,该基因与GenBank中已知基因无明显同源性,含有长度为609bp的开放阅读框,编码203个氨基酸,命名为Arta1;该重组变应原在大肠杆菌中高效表达为相对分子质量(Mr)为22.7×103蛋白,进一步在Ni2+亲和层析柱得到高度纯化;免疫学分析表明重组变应原有良好的IgE结合活性。结论本研究克隆和鉴定了一个青蒿花粉主要变应原Arta1(登录号为:CK700713),为花粉过敏性疾病的诊断和免疫治疗及进一步的实验研究奠定基础。

关键词：青蒿花粉重组变应原 IgE 基因克隆花粉变应原青蒿花粉特性鉴定 Art 亚克隆 1基因 cDNA文库重组变应原 Western

CTD格式申报资料中原料药特性鉴定部分的解读

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中国新药杂志 2016年第18期25卷 2109-2112页

作者：康建磊国家食品药品监督管理总局药品审评中心北京100038

通用技术文件(CTD)作为一种注册申报资料的格式,可提升申报资料的质量,提高技术审评的质量和效率。根据笔者对《化学药品新注册分类申报资料要求(试行)》的理解,结合几年来CTD格式申报资料的审评体会,就原料药特性鉴定部分资料的撰写要... 详细信息

通用技术文件(CTD)作为一种注册申报资料的格式,可提升申报资料的质量,提高技术审评的质量和效率。根据笔者对《化学药品新注册分类申报资料要求(试行)》的理解,结合几年来CTD格式申报资料的审评体会,就原料药特性鉴定部分资料的撰写要求和相关研究技术要求进行解读和分析,希望有助于提升申请人对特性鉴定相关研究工作的认识,提高该部分资料的撰写质量。

关键词：通用技术文件(CTD) 特性鉴定解读

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优质高淀粉甘薯新品种金薯3号特性鉴定

江西农业大学学报 2018年第1期40卷 66-71页

作者：陈海洲黄哲鸿林彩玲陈选阳福建农林大学作物科学学院/作物生物技术福建省高校重点实验室/福建省作物设计育种重点实验室福建福州350002

为研究甘薯新品种金薯3号的产量、品质和适应性等特性,采用田间观察和定期挖根考种的方法,检测了各项生理指标。结果显示,金薯3号属于优质高淀粉甘薯新品种,可作为鲜食与淀粉加工在生产上应用。薯块干率达31.38%,薯干产量10 984.2 kg/hm... 详细信息

为研究甘薯新品种金薯3号的产量、品质和适应性等特性,采用田间观察和定期挖根考种的方法,检测了各项生理指标。结果显示,金薯3号属于优质高淀粉甘薯新品种,可作为鲜食与淀粉加工在生产上应用。薯块干率达31.38%,薯干产量10 984.2 kg/hm^2,淀粉含量22.11%,淀粉产量7 328.85 kg/hm^2。薯块食味品质优,高抗蔓割病,耐贮藏。该品种结薯浅,薯块纺锤形、大小中等,短蔓,适合于轻简化栽培。研究结果明确了金薯3号的生长发育特性,为其在生产上推广应用提供参考。

关键词：甘薯新品种金薯3号特性鉴定