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特异种质烟草HZNH的Fe-SOD基因的克隆与表达

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第6期21卷 840-845页

作者：高健许晓风陈学平南京师范大学生命科学学院中国科学技术大学经济技术学院合肥230052

A new Fe-SOD gene from a native Chinese tobacco germplasm namely HZNH has been successfully cloned and expressed. Full-length cDNA sequences of the Fe-SOD gene was obtained by employing the 5′ and 3′end RACE method from the HZNH′s cDNA library. The full sequence was 1145 bp in length, including 170 bp of 5′untranslated region, 288 bp of 3′untranslated region and 687 bp of coding region. The coding region encoded a peptide of 228 amino acid residues, in which there was a signal peptide with 26 amino acids and a mature peptide of 202 amino acids. The full-length cDNA sequence was compared with all other reported plants’ Fe-SOD genes’. The result of Blast analysis showed that they shared high homology(>80%) ,the highest one was to N. plumbaginifolia’s with the homology as high as 97.69%. This cDNA was constructed into the prokaryotic expression vector, pQE30a/FeSOD, and transformed into *** M15 which was induced with IPTG. SDS-PAGE showed that 27 kD proteins was expressed. The soluble proteins showed the Fe-SOD enzyme activities on PAGE-based isozyme spectrum indicating that this expressed soluble protein is indeed the Fe-SOD enzyme.

关键词： SOD基因基因克隆特异种质超氧阴离子自由基 CuZn-SOD Mn-SOD 超氧化物歧化酶烟草 Fe-SOD 自身免疫疾病

特异种质烟草全长cDNA文库构建及FeSOD基因的克隆与表达

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特异种质烟草全长cDNA文库构建及FeSOD基因的克隆与表达

作者：高健南京师范大学

学位级别：硕士

病虫害和各种恶劣环境是造成包括烟草在内的绝大多数农作物减产的主要因素，在烟草生产上，仅烟草花叶病一项每年造成的经济损失就十分巨大。因此，培育抗病、抗虫和抗逆的作物品种是育种工作者长期而艰巨的任务。要培育出高质量的抗病... 详细信息

病虫害和各种恶劣环境是造成包括烟草在内的绝大多数农作物减产的主要因素，在烟草生产上，仅烟草花叶病一项每年造成的经济损失就十分巨大。因此，培育抗病、抗虫和抗逆的作物品种是育种工作者长期而艰巨的任务。要培育出高质量的抗病、抗虫和抗逆品种，除了拥有抗性种质资源外，还必须建立抗性资源合理开发利用的有效途径和方法。我国特有的地方烟草品种HZNH具有很强的抗病、抗逆能力，含有丰富的抗病、抗逆基因和发达的保护酶系统。为了研究其抗病、抗逆的分子机制和分离、克隆其中的抗病、抗逆基因，我们采用SMART(Switching Mechanism At 5’ end of RNA Transcript)技术构建了HZNH的全长cDNA基因文库。大肠杆菌XL1-Blue平皿测定和PCR快速鉴定表明，文库的库容量为2.47×10pfu／ml，重组率为98.4％，所构建的文库达到了用于目的基因的分离筛选和克隆表达的建库要求。以所建文库的噬菌体DNA为模板，根据国外已报道的FeSOD的保守序列先扩增到FeSOD部分cDNA序列，在其内部设计了两个特异性引物，分别与文库载体臂上的通用接头引物配对，运用RACE的方法，分别扩增出cDNA的3’端和5’端，从而得到全长cDNA序列，与国外已报道的FeSOD cDNA序列同源性达97.69％，因此成功的克隆到了烟草特异品种HZNH的FeSOD cDNA全长基因，为今后研究FeSOD的结构与功能提供了更多的信息，从而为进一步开展FeSOD的基因工程研究打下了良好基础。以克隆的特异种质烟草HZNH的FeSOD基因为基础，构建了原核表达载体PQE30a／FeSOD，经限制性内切酶BamH Ⅰ、Pst Ⅰ双酶切鉴定后，再转化入大肠杆菌M15中，通过IPTG诱导，得到高效体外表达，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，表达的目的蛋白占总菌体蛋白的37％，可溶性和包涵体两种形式均有存在，上清中的可溶性蛋白经FeSOD酶活测定和同工酶活性谱带分析，表明诱导表达的上清中的目的蛋白为有活性的FeSOD酶。

关键词：特异种质烟草:cDNA文库 FeSOD基因克隆表达

专题与述评具有野生棉外源基因的陆地棉特异种质创造与利用进展

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棉花学报 2005年第3期17卷 171-177页

作者：庞朝友杜雄明马峙英中国农业科学院棉花研究所河北农业大学保定071001

总结了优质纤维、自然抗虫、抗病、高衣分等具有野生棉外源基因的陆地棉种质的创造,及其在棉花常规育种、杂种优势利用、分子生物学等方面的研究进展,并分析了该类种质资源的利用前景,以期促进该类种质在棉花育种改良中发挥更大的作用。

关键词：外源基因陆地棉野生棉利用进展特异种质杂种优势利用分子生物学优质纤维常规育种研究进展利用前景种质资源棉花育种抗虫抗病

西藏玉米地方品种表型性状的综合评价与特异种质筛选

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2017年第8期45卷 56-68,75页

作者：蒙祖庆宋丰萍西藏农牧学院西藏林芝860000

【目的】研究西藏玉米地方品种表型特点,为西藏玉米地方品种的整理、鉴定、评价及优异种质资源的挖掘提供理论依据。【方法】于2014-2015年,采用大田试验,对179份西藏玉米地方品种的出苗至抽雄时间、抽雄至散粉时间、散粉至吐丝时间、... 详细信息

【目的】研究西藏玉米地方品种表型特点,为西藏玉米地方品种的整理、鉴定、评价及优异种质资源的挖掘提供理论依据。【方法】于2014-2015年,采用大田试验,对179份西藏玉米地方品种的出苗至抽雄时间、抽雄至散粉时间、散粉至吐丝时间、吐丝至成熟时间、生育期、雄穗一级分枝数、雄穗长、茎粗、株高、穗位高、主茎叶片数、果穗长、穗粗、穗行数、行粒数、百粒质量、出籽率、双穗率、空秆率、雄穗护颖颜色、花药颜色、花丝颜色、穗型、粒型、籽粒颜色、籽粒形状、穗轴颜色27个表型性状进行系统鉴定,根据其地理来源,计算各性状的分布范围及平均值,分析各表型的整体分布特征。【结果】西藏玉米地方品种以中、早熟品种为主,平均生育期109~170d;含部分晚熟品种,其生育期大于170d,主要来自察隅县和墨脱县。西藏玉米地方品种植株高大、主茎叶片数丰富、雄穗分枝较多的品种主要分布在林芝市察隅县和墨脱县,其玉米平均株高、主茎叶片数、雄穗一级分枝数分别为257.20~297.88cm,15~17片,14~18个;植株较矮、主茎叶片数较少、雄穗分枝较少的品种主要分布在昌都市八宿县和芒康县,其玉米平均株高、主茎叶片数、雄穗一级分枝数分别为203.96~223.69cm,13~14片,12~14个。西藏玉米地方品种的果穗长、果穗粗、穗行数、行粒数、百粒质量分别集中在14.24~20.15cm,3.89~4.75cm,11~15行,26~37粒,21.22~36.86g。大粒和大穗品种主要分布在昌都市芒康县,长穗品种主要分布在林芝市察隅县。通过2年重复试验,共鉴定出89份特异资源,其中双穗品种2份,大粒品种6份,大穗品种1份,长穗品种8份,早熟品种17份,特殊籽粒颜色品种17份,雄穗多分枝型品种35份,雄穗少分枝型品种3份。【结论】西藏玉米地方品种表型遗传多样性丰富,存在部分有价值的表型特异种质,可为我国玉米种质资源遗传多样性研究和利用提供重要种质基础。

关键词：西藏玉米地方品种表型鉴定特异种质

不同特异种质罗汉果的遗传差异及杂交优势预测

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江苏农业学报 2018年第2期34卷 425-431页

作者：覃信梅蒋水元韩愈向巧彦李虹甘金佳梁勇诗黄夕洋广西师范大学生命科学学院广西桂林541004 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所广西桂林541006 广西植物功能物质研究与利用重点实验室广西桂林541006

利用简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)技术分析了罗汉果航天、无籽、野生、栽培4类种质的遗传差异,构建DNA指纹图谱和UPGMA聚类图,并进行杂交优势预测的应用研究。结果表明,筛选出的19个ISSR引物中的5个可直接鉴别罗汉果21份特异种质,... 详细信息

利用简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)技术分析了罗汉果航天、无籽、野生、栽培4类种质的遗传差异,构建DNA指纹图谱和UPGMA聚类图,并进行杂交优势预测的应用研究。结果表明,筛选出的19个ISSR引物中的5个可直接鉴别罗汉果21份特异种质,种质间的遗传相似性系数为0.656~0.896,在相似性系数为0.795处的聚类结果分为5类。不同种质间存在一定的遗传变异,尤其是广西金秀(S17)、湖南永州(S18)和广西百色(S19)的野生种质与桂林主产区种质间,航天种质内以及雌雄株间都产生了较大的遗传差异。根据遗传差异的大小,对9个雌株预测了20个可能获得理想杂交优势的组合,推测雄株S13、S7和S9是较好的父本材料。该研究补充完善了罗汉果种质资源的遗传背景信息,从而为罗汉果种质的保护、创新和利用提供了理论基础及依据。

关键词：罗汉果特异种质遗传差异简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)指纹图谱杂交预测

棉花种间杂交渐渗系创新效果评价及特异种质筛选

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科学通报 2006年第1期51卷 55-62页

作者：庞朝友杜雄明马峙英中国农业科学院棉花研究所农业部棉花遗传改良重点开放实验室安阳455112 河北农业大学保定071001

收集了155份棉属种间杂交基因渐渗系,试图评价棉花远缘杂交对陆地棉种质创新的效果,筛选出具有较大利用价值的特异种质,促进该类种质在棉花育种改良中广泛有效利用.通过对主要农艺性状的鉴定,结果表明,不同野生种在陆地棉优质纤维、抗... 详细信息

收集了155份棉属种间杂交基因渐渗系,试图评价棉花远缘杂交对陆地棉种质创新的效果,筛选出具有较大利用价值的特异种质,促进该类种质在棉花育种改良中广泛有效利用.通过对主要农艺性状的鉴定,结果表明,不同野生种在陆地棉优质纤维、抗病、抗逆和抗虫种质改良上发挥了不同的作用.利用SSR分子标记检测种间杂交渐渗系中的外源种遗传成分,在15对SSR引物中发现了两类25个SSR特异位点,海岛棉、亚洲棉、瑟伯氏棉等8个棉属外源种的外源遗传成分向陆地棉种质有不同程度的渗入.制定了利用分子标记高效筛选具有外源基因特异种质的策略,并筛选了18份优质纤维特异种质和4份耐枯黄萎病特异种质.

关键词：棉属种间杂交种质创新特异种质 SSR

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棉花特异种质资源的创造与利用研究

棉花学报 2005年第5期17卷 304-308页

作者：周宝良张天真南京农业大学棉花研究所作物遗传与种质创新国家重点实验室南京210095

对棉花特异种质资源的类型、创造和培育方法及其在棉花研究中的应用情况进行了分析。采用人工诱变、航天搭载、组织培养、转基因技术和杂交等,创造和培育出了包括突变体、近等基因系、重组自交系、染色体变异体、同核异质系、加倍单倍... 详细信息

对棉花特异种质资源的类型、创造和培育方法及其在棉花研究中的应用情况进行了分析。采用人工诱变、航天搭载、组织培养、转基因技术和杂交等,创造和培育出了包括突变体、近等基因系、重组自交系、染色体变异体、同核异质系、加倍单倍体等在内的棉花特异种质资源,应用于棉花遗传研究、图谱构建、基因定位和功能基因组研究。提出了今后棉花种质资源研究和发展的关键是发掘新基因源、提高转基因效率以创造更多更有价值的特异种质资源。

关键词：棉花特异种质培育利用

枳属36份特异种质的AFLP指纹图谱构建与分析

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园艺学报 2003年第4期30卷 394-398页

作者：庞晓明邓秀新胡春根华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室国家农作物育种中心武汉430070

从 4 0个PstI/MseI酶切的AFLP引物对中筛选出多态性高的 7个 ,对 36份枳属特异种质进行了指纹分析。 7个引物对共获得 5 39条带 ,其中 14 6条带具有多态性。各种质材料之间的遗传相似性在 0 2 3～ 0 98之间 ,只需结合其中的 3个引物... 详细信息

从 4 0个PstI/MseI酶切的AFLP引物对中筛选出多态性高的 7个 ,对 36份枳属特异种质进行了指纹分析。 7个引物对共获得 5 39条带 ,其中 14 6条带具有多态性。各种质材料之间的遗传相似性在 0 2 3～ 0 98之间 ,只需结合其中的 3个引物对即可区分所有的材料。根据 7个AFLP引物对所得谱带的UPGMA聚类分析表明 ,聚类结果与地理来源没有明显的联系 ,这可能正反映了近时间内地区之间枳资源的频繁交流。

关键词：柑橘砧木枳属特异种质 AFLP指纹图谱构建遗传相似性 UPGMA聚类分析聚类结果地理来源

古银杏种质遗传关系及特异种质的AFLP分析

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山东农业大学学报（自然科学版） 2009年第2期40卷 209-213页

作者：王利邢世岩陈述刘兆伟郭泗亭李东发山东农业大学林学院山东泰安271000 山东临沂市林业局山东临沂276001 山东沂水县林业局山东沂水276400 山东平阴县园森处山东平阴250400

从64对EcoRI／MseI引物（其中Msel引物为荧光标记物）中筛选出7对扩增产物多态性高、谱带清晰的引物，对来自山东的29个古银杏种质的遗传关系及特异种质进行了研究。结果表明：7对引物共产生1003条谱带，138个特异位点（其中缺失带36条... 详细信息

从64对EcoRI／MseI引物（其中Msel引物为荧光标记物）中筛选出7对扩增产物多态性高、谱带清晰的引物，对来自山东的29个古银杏种质的遗传关系及特异种质进行了研究。结果表明：7对引物共产生1003条谱带，138个特异位点（其中缺失带36条、单态带102条），多态带915条，多态带的比例为91．21％；每对引物鉴别效率为100％。29个古银杏种质之间相似系数为0．43～0．84，来自不同地区的银杏种质遗传变异程度不同。当相似系数为0．71时，供试种质可分为四类，古银杏种质的聚类与地理位置的远近并不完全相关。根据对古银杏种质的特异位点、相似系数、聚类结果等进行综合分析表明，‘任城’、‘胶州’、‘崂山2’、‘诸城2’、‘安山1’、‘安山2’、‘蒙阴’、‘郯城1’、‘郯城2’、‘叶籽银杏1’10个种质是山东古银杏种质中的重要特异种质。

关键词：银杏遗传关系特异种质 AFLP