检索结果-南通市图书馆

生物信息学分析CysC特异性肽段及质谱验证

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

临床检验杂志 2017年第6期35卷 444-447页

作者：沈蕾王惠民季伙燕沈培王建新南通大学附属医院检验科江苏南通226001

目的用生物信息学技术分析半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)的特异性肽段及其性质,并用质谱技术验证预测结果。方法用在线软件工具分析胰蛋白酶水解Cys C产生的肽段和同源性,预测特异性肽段质谱扫描离子化碎片信息;对人工合成的特异性多肽... 详细信息

目的用生物信息学技术分析半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)的特异性肽段及其性质,并用质谱技术验证预测结果。方法用在线软件工具分析胰蛋白酶水解Cys C产生的肽段和同源性,预测特异性肽段质谱扫描离子化碎片信息;对人工合成的特异性多肽样品进行母离子扫描和子离子扫描,人重组Cys C和血清样品经胰蛋白酶水解后分析质谱,比较分析结果与预测结果。结果选择T3(ALDFAVGEYNK)肽段作为Cys C的特异性肽段,用串联质谱对T3样品[M+2H]^(2+)进行子离子扫描,几乎可发现Skyline软件预测的所有b离子和y离子。人重组Cys C和血清样品经胰蛋白酶水解出的肽段与T3*在同一时间出峰。结论用生物信息学技术快速准确地筛选出了Cys C特异性肽段并准确预测该肽段质谱扫描离子化碎片。

关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂C 生物信息学技术特异性肽段质谱

高效液相色谱-串联质谱法结合稳定同位素标记肽段同时测定稻米及其制品中3种过敏蛋白质

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

色谱 2021年第12期39卷 1314-1323页

作者：杨欢曹赵云马有宁陈铭学农业农村部稻米及制品监督检验测试中心中国水稻研究所浙江杭州310006 江西农业大学江西南昌330000

基于稳定同位素标记特征肽段和液相色谱-质谱联用仪建立稻米及制品中3种过敏蛋白质的同时定量方法。稻米及制品样品经盐溶液提取,赖氨酰基内切酶(Lys-C)和胰蛋白酶依次水解,C18-SD柱净化后,采用纳升高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道... 详细信息

基于稳定同位素标记特征肽段和液相色谱-质谱联用仪建立稻米及制品中3种过敏蛋白质的同时定量方法。稻米及制品样品经盐溶液提取,赖氨酰基内切酶(Lys-C)和胰蛋白酶依次水解,C18-SD柱净化后,采用纳升高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱(NanoLC-LTQ-Orbitrap)采集和Protein Discovery软件鉴定,NCBI和Uniprot数据库的基本局部搜索比对工具(BLAST)筛选验证,最终获得表征稻米及制品中α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂类蛋白质(seed allergenic protein RAG2,RAG2)、乙二醛酶Ⅰ活性蛋白(glyoxalaseⅠ)和α-球蛋白(19 kDa globulin)3种过敏蛋白质的特异性肽段。3个特异性肽段经液相色谱梯度洗脱,在Poroshell色谱柱上实现完全分离,由三重四极杆质谱仪分析。实验通过优化多反应监测(MRM)质谱参数,比较不同溶剂体系、水解酶种类和酶量等酶解条件,结合内标法定量,实现对稻米及制品中3种蛋白质的绝对定量。实验结果表明,当酶解溶剂中含1 g/L十二烷基硫酸钠,采用Lys-C和胰蛋白酶组合消化策略,可有效提高3种蛋白质的酶切效率至65.7%~97.3%。该方法在1~200 nmol/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9972,3种蛋白质的检出限和定量限分别为3 mg/kg和10 mg/kg。3种蛋白质在空白稻米制品基质中3个水平下的加标回收率为80.6%~103.7%,日间和日内精密度均小于11.5%。该方法稳定性好,检测灵敏度高,操作简便,在分析各类稻米及制品中3种过敏蛋白质含量具有广泛的应用前景。

关键词：液相色谱-串联质谱特异性肽段稳定同位素标记肽段酶解条件过敏蛋白质稻米

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

褐黄血蜱卵蛋白质组分析

畜牧兽医学报 2019年第3期50卷 627-636页

作者：徐律程天印湖南农业大学动物医学院长沙410128 湖南畜禽安全生产协同创新中心长沙410128 兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室长沙410128

本研究旨在探明褐黄血蜱卵内蛋白组分,揭示蜱胚胎发育中的关键营养物质,为筛选可干扰胚胎发育的抗原分子奠定基础。采用液相色谱-串联质谱法对新鲜褐黄血蜱的卵蛋白成分进行分析,基于该蜱的唾液腺转录组翻译文库、中肠转录组翻译文库和U... 详细信息

本研究旨在探明褐黄血蜱卵内蛋白组分,揭示蜱胚胎发育中的关键营养物质,为筛选可干扰胚胎发育的抗原分子奠定基础。采用液相色谱-串联质谱法对新鲜褐黄血蜱的卵蛋白成分进行分析,基于该蜱的唾液腺转录组翻译文库、中肠转录组翻译文库和Uniprot数据库对各蛋白成分进行鉴定。结果显示:从褐黄血蜱卵黄蛋白提取液中检出特异性肽段221条,由此鉴定蛋白53种,其中高可信蛋白12种,能够确定的功能蛋白有肌动蛋白(actin)和卵黄蛋白原Ⅱ(vitellogenin 2,Vg-2),且Vg-2与卵黄蛋白(vitellins, Vn)一级结构相同。蜱卵原生质所含蛋白较少;Vg-2是蜱卵内存在的唯一一种卵黄蛋白原。

关键词：褐黄血蜱卵液相色谱-串联质谱卵黄蛋白原特异性肽段

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

氨基磁珠偶联法解析地榆皂苷Ⅱ作用蛋白

华西药学杂志 2020年第1期35卷 43-49页

作者：曾艳安静林肖小帆赵丽郄鹏璠黄胜刘进阳泰许高洁成都医学院药学院四川成都610500 成都医学院科研实验中心四川成都610500

目的采用磁珠偶联法解析地榆皂苷Ⅱ作用蛋白。方法地榆皂苷Ⅱ具有羧基端,将其活化后,羧基端与氨基磁珠的氨基端偶联。将0、2、10 mmol·L-1地榆皂苷Ⅱ与磁珠形成配合物后,与等量TF-1细胞蛋白裂解产物共孵育,使地榆皂苷Ⅱ结合潜在作用靶... 详细信息

目的采用磁珠偶联法解析地榆皂苷Ⅱ作用蛋白。方法地榆皂苷Ⅱ具有羧基端,将其活化后,羧基端与氨基磁珠的氨基端偶联。将0、2、10 mmol·L-1地榆皂苷Ⅱ与磁珠形成配合物后,与等量TF-1细胞蛋白裂解产物共孵育,使地榆皂苷Ⅱ结合潜在作用靶蛋白;利用磁力架捕获上述磁珠,解离地榆皂苷Ⅱ的结合蛋白;经过SDS-PAGE电泳分离,采用高分辨质谱鉴定PAGE胶上的蛋白,呈现与地榆皂苷Ⅱ相结合的蛋白;通过基因本体论和京都基因与基因组百科全书数据库分析差异蛋白;通过特异性肽段数量及基于强度的绝对蛋白质定量(IBAQ)值的高低,从中筛选可信度较高的地榆皂苷Ⅱ作用蛋白。结果鉴定空白磁珠及化合物偶联磁珠结合蛋白共计226种。扣除空白磁珠结合蛋白本底,鉴定出66种地榆皂苷Ⅱ特异性作用蛋白,通过特异性肽段与IBAQ值综合分析可知:与地榆皂苷Ⅱ作用相关的蛋白主要为DNA依赖性蛋白激酶催化亚基、翻译激活剂GCN1及酰基甘油激酶等。结论利用氨基磁珠偶联法解析地榆皂苷Ⅱ的潜在作用蛋白,可为进一步阐释地榆皂苷Ⅱ及地榆的作用机制提供依据。

关键词：地榆地榆皂苷Ⅱ 磁珠靶蛋白银染差异蛋白机制基因本体论京都基因与基因组百科全书特异性肽段基于强度的绝对蛋白质定量磁珠-化合物偶联技术

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于质谱技术的肉类掺假定量新方法研究

基于质谱技术的肉类掺假定量新方法研究