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西南大学学报（自然科学版） 2013年第1期35卷 10-15页

作者：张伟宏廖芳罗加凤李关荣西南大学南方山地农业教育部工程研究中心重庆400716 天津市出入境检验检疫局天津300461

向日葵黑茎病菌Leptosphaeria lindguistii和向日葵茎溃疡病菌Diaporthe helianthi是向日葵上寄生的2种重要的检疫性真菌病害.针对这2种致病菌,目前国内外已有形态学鉴定和危害的研究报道以及向日葵黑茎病菌的ITS序列分析和RFLP初步研究... 详细信息

向日葵黑茎病菌Leptosphaeria lindguistii和向日葵茎溃疡病菌Diaporthe helianthi是向日葵上寄生的2种重要的检疫性真菌病害.针对这2种致病菌,目前国内外已有形态学鉴定和危害的研究报道以及向日葵黑茎病菌的ITS序列分析和RFLP初步研究,但未见有2种病原菌同步分子检测的报道.本研究首先通过培养,观察比较了2种病原菌的菌落和形态特征.发现前者菌落絮状,分生孢子器深褐球型,分生孢子为单胞肾形;后者菌落短绒毛状,分生孢子器柠檬黄,分生孢子为线型.通过油菜黑茎病菌***的肌动蛋白基因设计供试材料的通用引物act F/act R,扩增产物片段约为720bp,然后采用真菌通用引物ITS1/ITS4和引物act F/act R,针对所有菌株菌丝DNA进行ITS区域和Actin基因PCR扩增,经克隆测序结果比对分析发现,向日葵黑茎病菌和向日葵茎溃疡病菌的ITS区域存在极高的相似度.因此,依据Actin基因特异位点分别设计出向日葵黑茎病菌和向日葵茎溃疡病菌的特异引物LLF/LLR和DHF/DHR.在同一PCR管中3组引物(ITS1/ITS4,LLF/LLR和DHF/DHR)经优化体系后,ITS1/ITS4扩增序列作为所有菌株菌丝基因组DNA提取模板的质量监控,针对向日葵黑茎病菌和向日葵茎溃疡病菌单一模板的ITS区域与Actin基因中的两个位点同时进行三重PCR扩增.利用此方法检测向日葵黑茎病菌出现580bp的ITS保守区扩增片段和255bp的Actin基因的特异扩增带,向日葵茎溃疡病菌出现580bp的ITS保守区扩增片段和394bp的Actin基因特异扩增带.所有菌株均未见非特异性片段的干扰.此三重PCR检测体系的建立为此两种检疫性真菌病害的同步分子检测提供了特异方法.

关键词：向日葵黑茎病菌向日葵茎溃疡病菌检疫性真菌三重PCR 特异分子检测

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柑橘上两种检疫性疫霉的三重PCR分子检测

柑橘上两种检疫性疫霉的三重PCR分子检测

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中国植物病理学会第十二届青年学术研讨会

作者：廖芳刘跃庭戴世泰罗加凤天津出入境检验检疫局

冬生疫霉（Phytophthorahibernalis）和丁香疫霉（Phytophthor-asyringae）是柑橘属植株上寄生的两种重要检疫性真菌病害。针对两种致病菌,目前国内外已有形态学鉴定和危害的研究报道以及冬生疫霉病菌的ITS序列分析和RFLP初步研究,但未... 详细信息

冬生疫霉（Phytophthorahibernalis）和丁香疫霉（Phytophthor-asyringae）是柑橘属植株上寄生的两种重要检疫性真菌病害。针对两种致病菌,目前国内外已有形态学鉴定和危害的研究报道以及冬生疫霉病菌的ITS序列分析和RFLP初步研究,但未见有两种病原菌的同步分子检测的报道。本研究首先通过培养,观察比较了两种病原菌的菌落和形态特征。发现前者菌落呈玫瑰花瓣状,孢子囊呈长卵圆形或椭圆形,分生孢子为卵圆形;后者菌落呈菊花花瓣状,孢子囊呈宽卵圆形或倒梨形至椭圆形,分生孢子为单胞肾形。通过比对GenBank上公布的柑橘属水果上15株疫霉菌的18S rDNA基因序列、ITS序列、heat shock protein基因序列分别设计了疫霉的通用引物18SF/18SR、冬生疫霉的特异性引物GPHF/GPHR和丁香疫霉特异性引物GPSF/(GPSR。在同一PCR管中3组引物（18SF/18SR、GPH-F/GPHR和GPSF/GPSR）经优化体系后,18SF/18SR扩增序列作为所有菌株菌丝基因组DNA提取模板的质量监控,针对冬生疫霉和丁香疫霉病菌单一模板的18S区域、ITS区域和heat shock protein区域同时进行三重PCR扩增。利用此方法检测,冬生疫霉病菌出现884 bp的18S保守区扩增片段和232 bp的ITS基因的特异扩增带,丁香疫霉病菌出现884 bp的18S保守区扩增片段和683 bp的heat shock protein基因特异扩增带。所有菌株均未见非特异性片段的干扰。此三重PCR检测体系的建立为此两种检疫性真菌病害的同步分子检测提供了特异方法。

关键词：冬生疫霉丁香疫霉检疫性真菌三重PCR 特异分子检测

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检疫性柑橘冬生疫霉和丁香疫霉的三重PCR同步检测

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西南大学学报（自然科学版） 2015年第5期37卷 1-8页

作者：朱林慧郭京泽廖芳罗加凤黄国明任学毅李关荣西南大学农学与生物科技学院重庆400716 天津出入境检验检疫局天津300461 重庆市食品药品检验所重庆401121

全世界危害柑橘的疫霉有14种,其中冬生疫霉Phytophthora hibernalis和丁香疫霉Phytophthora syringae为我国规定禁止进境的两种检疫性柑橘真菌病害,目前尚未见有此两种病原菌的同步分子检测报道.该研究根据14种柑橘疫霉的18SrRNA,ITS,he... 详细信息

全世界危害柑橘的疫霉有14种,其中冬生疫霉Phytophthora hibernalis和丁香疫霉Phytophthora syringae为我国规定禁止进境的两种检疫性柑橘真菌病害,目前尚未见有此两种病原菌的同步分子检测报道.该研究根据14种柑橘疫霉的18SrRNA,ITS,heat shock protein 90(HSP 90)等基因分别设计了疫霉属的通用引物和此两种检疫性疫霉的特异引物,通过进行反应体系优化,建立了同时检测柑橘上两种检疫性疫霉的特异三重PCR检测方法,并进行了灵敏度试验.用15个柑橘疫霉菌株与甜橙的混合DNA做模板进行模拟带菌试验,结果表明该三重PCR分子检测能实现两种检疫性疫霉菌的同步特异检测,这两种检疫性柑橘疫霉提供了特异、可靠、便捷、适于口岸应用的检测方法,可有效促进柑橘类水果的快速通关.

关键词：柑橘属冬生疫霉丁香疫霉检疫性真菌三重PCR 特异分子检测

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