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作者：郭红壮长春理工大学

学位级别：硕士

特定蛋白,是一些来源于组织细胞,广泛存在于血清之中的含有特定功能的蛋白质,很多疾病都可以引起血清蛋白质的变化,特定蛋白也因此成为重要的临床检验指标。蛋白质具有良好的抗原性,可以采用抗原—抗体反应对具有某一特定抗原性的蛋白... 详细信息

特定蛋白,是一些来源于组织细胞,广泛存在于血清之中的含有特定功能的蛋白质,很多疾病都可以引起血清蛋白质的变化,特定蛋白也因此成为重要的临床检验指标。蛋白质具有良好的抗原性,可以采用抗原—抗体反应对具有某一特定抗原性的蛋白质进行测定,故又称特定蛋白检测。中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、微量白蛋白、肌酐、肌酸激酶等蛋白质或化学物质的检测对早期肾损伤、糖尿病肾病、心肌疾病的诊断具有重要意义。本文采用朗伯-比尔定律为基本检测原理,设计并开发了一款针对上述物质检测的全自动特定蛋白检测装置。装置利用光电传感器的光电效应,采用比浊法或比色法检测透过样本的相对吸光度或绝对吸光度的方法定量检测样本中的物质含量。装置主要包括光学系统设计、液路系统设计、机械结构设计、硬件电路设计及嵌入式编程等几部分,具有体积小、检测速度快、检测精准度高等特点。性能验证实验结果表明,依据文章所述设计方案搭建的全自动特定蛋白检测装置具有良好的非生物性能及生物性能。光源恒流源最大电流差值7 m A,100μL取液量误差值小于4μL,恒温区域控温稳定性±0.1℃,信号检测单元输出稳定性±10 m V,三维运动平台重复运动最大误差76.667μm;装置在检测中性粒细胞运载蛋白(NGAL)、微量白蛋白(m ALB)、肌酐(CRE)、肌酸激酶(CK)等生化项目线性较好,R分别为0.990、0.987、0.987、0.989。与日立7180全自动生化分析仪进行临床对比,检测结果符合度较高,白蛋白(ALB)阴性符合率92.06%,阳性符合率89.36%,ALB/CRE阴性符合率87.18%,阳性符合率92.96%。按文中所述方案搭建的全自动特定蛋白检测装置的各项参数满足中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、微量白蛋白、肌酐、肌酸激酶等生化指标的检测需求。本文的研究结果为全自动特定蛋白检测装置的开发提供了实验基础。

关键词：特定蛋白检测光信号检测即时检测三维运动平台

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全层析工艺制备10%静脉注射用水痘-带状疱疹人免疫球蛋白的质量控制

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微生物学免疫学进展 2024年第05期 48-55页

作者：周志军岳胜兰彭焱陈克金陈曦李娟汪菲菲李策生胡勇张金国药集团武汉生物制药有限公司科研开发部

目的用全层析工艺制备10%静脉注射人水痘-带状疱疹免疫球蛋白[human varicella zoster immune globulin for intravenous administration, VZIG(IV)],对其纯化过程的关键步骤进行质量控制(包括IgG相对纯度、抗原回收率、杂质去除情况... 详细信息

目的用全层析工艺制备10%静脉注射人水痘-带状疱疹免疫球蛋白[human varicella zoster immune globulin for intravenous administration, VZIG(IV)],对其纯化过程的关键步骤进行质量控制(包括IgG相对纯度、抗原回收率、杂质去除情况及半成品检定)。方法取100袋含高效价水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus, VZV-IgG),ELISA效价>1.500 IU/mL的原料血浆融化后制备约50 L合并血浆，按照全层析工艺进行10%VZIG(IV)的制备，对其关键步骤样品用免疫比浊法进行特定血浆蛋白的蛋白含量检测，计算目标组分中各种蛋白的占比、IgG步骤回收率和工艺总回收率；用BCA法进行总蛋白含量检测，计算IgG相对纯度；对合并血浆和半成品按照《中华人民共和国药典》2020版(三部)(简称《中国药典》)要求进行关键项目(蛋白含量、分子大小分布、纯度、抗A抗B血凝素、激肽释放酶原激活剂)检测，同时增加半成品的辛酸钠、IgG亚类、IgA、IgM、ALB的蛋白含量检测，合并血浆及半成品的VZV-IgG的ELISA效价检测。结果全层析工艺中A50吸附主要去除的是CER、FNC、C1I,去除率分别是39.321%、46.407%、74.132%;IgG步骤回收率为97.44%,相对纯度为15.17%。亲和层析主要去除了血浆中大部分杂蛋白，其洗脱液中主要成分为IgG和FIB(占比分别为69.891%和17.994%),其他蛋白占比均蛋白，仅有微量IgM(占比0.607%)和ALB(占比0.229%)残留，IgG的步骤回收率为81.00%,相对纯度为98.98%。DEAE离子交换层析主要去除的是IgM,IgG的步骤回收率为95.69%,相对纯度为95.01%。半成品的相对纯度为98.79%,整个工艺IgG的总回收率达到46.26%。全层析工艺将原料血浆的VZV-IgG的ELISA效价提高了18.33倍，抗原浓度浓缩了10.8倍，比活性从0.047 IU/mg提高到0.533 IU/mg。半成品各项关键指标检测合格，辛酸钠残留量<8.3 mg/L,IgA、IgM和ALB的残留量分别为21.500、0.609、57.500 mg/L,IgG亚类分布分别为：68.550、29.000、5.085、3.840 g/L。结论用全层析工艺制备的10%VZIG(IV),关键指标均符合《中国药典》和《欧洲药典》11.0版的要求。

关键词： 10%静脉注射用水痘-带状疱疹人免疫球蛋白全层析工艺特定蛋白检测 BCA试验杂质去除回收率比活性

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全层析工艺制备10%静脉注射用水痘-带状疱疹人免疫球蛋白的质量控制

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微生物学免疫学进展 2024年

作者：周志军岳胜兰彭焱陈克金陈曦李娟汪菲菲李策生胡勇张金国药集团武汉生物制药有限公司科研开发部

目的用全层析工艺制备10%静脉注射人水痘-带状疱疹免疫球蛋白[human varicella zoster immune globulin for intravenous administration， VZIG(IV)]，对其纯化过程的关键步骤进行质量控制（包括IgG相对纯度、抗原回收率、杂质去除情... 详细信息

目的用全层析工艺制备10%静脉注射人水痘-带状疱疹免疫球蛋白[human varicella zoster immune globulin for intravenous administration， VZIG(IV)]，对其纯化过程的关键步骤进行质量控制（包括IgG相对纯度、抗原回收率、杂质去除情况及半成品检定）。方法取100袋含高效价水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus）抗体（VZV-IgG）ELISA效价>1.500 IU/mL的原料血浆融化后制备约50 L合并血浆，按照全层析工艺进行10%VZIG(IV)的制备，对其关键步骤样品用免疫比浊法进行特定血浆蛋白的抗原含量检测，计算目标组分中各种蛋白的占比、IgG步骤回收率和工艺总回收率；用BCA法进行总蛋白含量检测，计算IgG相对纯度；对合并血浆和半成品按照《中华人民共和国药典》2020版（三部）（简称《中国药典》）要求进行关键项目（蛋白含量、分子大小分布、纯度、抗A抗B血凝素、激肽释放酶原激活剂）检测，同时增加半成品的辛酸钠、IgG亚类、IgA、IgM、ALB的含量检测，合并血浆及半成品的VZV-IgG的ELISA效价检测。结果全层析工艺中A50吸附主要去除的是CER、FNC、C1I，去除率分别是39.321%、46.407%、74.132%；IgG步骤回收率为97.44%，相对纯度为15.17%。亲和层析主要去除了血浆中大部分杂蛋白，其洗脱液中主要成分为IgG和FIB（占比分别为69.891%和17.994%），其他蛋白占比均蛋白，仅有微量IgM（占比0.607%）和ALB（占比0.229%）残留，IgG的抗原步骤回收率为81.00%，相对纯度为98.98%。DEAE离子交换层析主要去除的是IgM，IgG的抗原步骤回收率为95.69%，相对纯度为95.01%。半成品的相对纯度为98.79%，整个工艺IgG的抗原总回收率达到46.26%。全层析工艺将原料血浆的VZV-IgG的ELISA效价提高了18.33倍，抗原浓度浓缩了10.8倍，比活性从0.047 IU/mL提高到0.533 IU/mL。半成品各项关键指标检测合格，辛酸钠残留量<8.3 mg/L，IgA、IgM和ALB的残留量分别为21.500、0.609、57.500 mg/L，IgG亚类分布分别为：68.550、29.000、5.085、3.840 g/L。结论用全层析工艺制备的10% VZIG(IV)，关键指标均符合《中国药典》和《欧洲药典》11.0版的要求。

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