检索结果-南通市图书馆

作者：胡人阁吉林农业大学

学位级别：硕士

牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）是我国牛呼吸系统疾病（BRD）的主要病原之一,近年来在我国“北牛南运,西牛东运”的养殖运输模式下发生了跨地区的广泛传播。现在针对牛A型Pm的防控手段仍然以使用广谱抗生素为主,... 详细信息

牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）是我国牛呼吸系统疾病（BRD）的主要病原之一,近年来在我国“北牛南运,西牛东运”的养殖运输模式下发生了跨地区的广泛传播。现在针对牛A型Pm的防控手段仍然以使用广谱抗生素为主,但抗生素的过度使用势必导致细菌的耐药性增加。前期研究发现,在低浓度抗生素（如氟喹诺酮类、大环内酯药物）作用下,牛A型Pm极易形成耐药性及耐受性突变,这也给牛A型Pm的防控带来了难题。因此在规范化使用抗生素的同时,开发新型抗生素耐药抑制剂以减缓耐药形成具有着重要意义。相关研究发现,SOS修复系统关键分子的缺失突变可以在一定程度上影响细菌对氟喹诺酮类药物的耐药性与耐受性,并独立于已知的药物靶点突变介导耐药性产生。有研究者提出,通过靶向抑制SOS修复通路相关分子,可以在一定程度上降低细菌的抗生素耐受性并抑制耐药性的产生,从而增强抗生素类药物的抗菌效果。为此,本研究以课题组前期筛选得到的强致病性牛A型Pm氟喹诺酮敏感株P3及P3经亚抑菌浓度恩诺沙星诱导形成的耐药株P32作为研究对象。对P3、P32经氟喹诺酮类药物处理后的组学分析结果中筛选得到的SOS通路差异基因recO进行功能验证,主要试验内容如下:（1）以牛A型Pm氟喹诺酮敏感株P3为模板,分别扩增其recO上、下游同源臂基因,通过重叠PCR连接并导入自杀质粒p RE112中,构建p RE112-（?）recO重组自杀质粒。通过接合转移将该质粒引入菌株P3及P32中,经两次同源重组过程构建基因缺失株,最终获得recO基因缺失株O3、O32。同时,构建p UC18-Ptpi AT牛A型Pm组成型启动子增强表达载体,并将recO编码基因引入其中用于O3、O32菌株recO基因的回补,最终获得了recO基因回补菌株C3、C32。（2）对牛A型Pm氟喹诺酮敏感株P3及耐药株P32及recO基因缺失株O3、O32以及回补株C3、C32进行生物学特性鉴定,证实recO基因的缺失及回补并未对牛A型Pm基本生长特性产生影响。此外通过MIC、MBC、诱导耐药形成时间、时间杀伤曲线、氟喹诺酮类药物耐受性等试验检测recO基因缺失对牛A型Pm氟喹诺酮类抗菌药物耐药、耐受性的影响,发现recO基因的缺失未能影响牛A型Pm对氟喹诺酮类药物的耐药性,但减弱了牛A型Pm对氟喹诺酮类药物的耐受性并有效延长了氟喹诺酮类药物的耐药形成时间。（3）通过q PCR及构建荧光报告载体并检测荧光报告活性评估recO基因缺失对SOS修复反应的影响,发现recO基因缺失使得牛A型Pm SOS修复反应水平发生显著性减弱,但rec BCD通路基因在一定程度上弥补了recO基因缺失对于SOS修复反应的影响。此外通过检测小鼠感染及氟喹诺酮治疗模型下牛A型Pm耐药突变菌形成频率的变化,证实在1/2 MIC及1 MIC氟喹诺酮类药物体内治疗条件下牛A型Pm更易形成耐药突变,且recO基因的缺失能够有效降低牛A型Pm的体内耐药突变形成频率。总之,本研究通过recO基因缺失株的构建与表型分析,发现抑制recO基因不仅能够降低牛A型Pm SOS修复反应的水平,还可以降低其对氟喹诺酮类药物的耐受性,延长低水平氟喹诺酮类药物作用下的耐药性形成时间,由此推测recO基因是一个潜在的氟喹诺酮类药物抗菌增效剂靶标,本研究为牛A型Pm氟喹诺酮类药物抗菌增效剂靶标的筛选奠定基础。

关键词：牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌 SOS修复 recO基因缺失氟喹诺酮类药物耐受

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牛溶血性曼氏杆菌及牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗对小鼠的保护性研究

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畜牧兽医学报 2021年第9期52卷 2579-2588页

作者：李甜杨洋谢黎卿王远兰李攀彭远义李能章西南大学动物医学院重庆市牧草与食草动物重点实验室重庆400715

牛溶血性曼氏杆菌及牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌是导致牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease,BRD)的重要细菌性病原,每年给养牛业带来巨大的经济损失,目前对其疫苗研究仍显不足。本研究选用牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh... 详细信息

牛溶血性曼氏杆菌及牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌是导致牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease,BRD)的重要细菌性病原,每年给养牛业带来巨大的经济损失,目前对其疫苗研究仍显不足。本研究选用牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)Mh422株和牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)PmCQ2株作为疫苗菌株,分别制备了2种菌体浓度的Mh和Pm单价灭活菌苗及3种菌量配比(1∶1、2∶1和3∶1)的Mh-Pm二联灭活苗,以小鼠为模型,皮下多点免疫(0.2 mL),加强免疫2次,免疫剂量均为首免的一半。首免后第7天及其后每隔5 d,小鼠尾静脉采血分离血清,ELISA方法检测抗体效价,三免后第20天,分别以Mh422或PmCQ2进行腹腔攻毒测定免疫保护效果。结果显示,所有小鼠接种疫苗均无不良反应,二免后第10天抗体达较高水平,三免后抗体水平持续升高,第15天到达高峰,其后25 d维持高水平,后缓慢下降。Mh单菌苗的2种免疫剂量对Mh422株攻毒的免疫保护率均为0,而Pm单菌苗的2种免疫剂量对PmCQ2株攻毒的免疫保护率全为100%;Mh和Pm间无交叉免疫保护作用;3种菌量配比的Mh-Pm二联疫苗对Mh422株和PmCQ2株攻毒的各自免疫保护率分别为53%~71%和100%。该研究结果表明,所制备的Mh422单菌苗对同型攻毒无免疫保护作用,在诱导机体抗体产生方面,Mh和Pm间无相互抑制作用,PmCQ2株具有促进Mh422株灭活疫苗对Mh422的免疫保护作用,这为牛溶血性曼氏杆菌和牛多杀性巴氏杆菌二联疫苗的进一步研究提供了理论基础。

关键词：牛溶血性曼氏杆菌牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗免疫保护

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牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌SOS应答系统相关基因缺失株构建及其对耐药适应性影响研究

牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌SOS应答系统相关基因缺失株构建及其对耐...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：张海朋孔令聪胡仁阁刘树明马红霞吉林农业大学动物科学技术学院

[目的]SOS应答及同源重组代谢通路在多种细菌耐药性形成的过程中发挥至关重要的作用,但不同菌属细菌SOS应答机制存在较大差异,为此该研究拟对SOS应答介导的牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌对喹诺酮类药物耐药适应性的机制进行初步确证。[方法]... 详细信息

[目的]SOS应答及同源重组代谢通路在多种细菌耐药性形成的过程中发挥至关重要的作用,但不同菌属细菌SOS应答机制存在较大差异,为此该研究拟对SOS应答介导的牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌对喹诺酮类药物耐药适应性的机制进行初步确证。[方法]采用转录组学方法对喹诺酮类药物敏感株、耐药株、高度耐药株SOS应答及介导通路差异表达基因进行筛选,进一步通过同源重组技术构建差异表达基因缺失株,通过对缺失株生物学特性、最小抑菌浓度、体外诱导突变频率等进行测定。[结果]敏感株与耐药株相比,基因表达趋势较接近,重复相关性较高,共富集到535个差异表达基因,其中SOS应答相关通路部分基因发生了显著上调、下调,包括(recO、ruvA、priB、ssB等);目前已成功构建了敏感株、耐药株recO、vurA等基因的缺失株(PmSΔrecO、PmRΔrecO、PmSΔruvA、PmRΔruvA),上述基因缺失株并未降低菌株对喹诺酮类药物的敏感性,但敏感株PmSΔrecO显著降低了其对喹诺酮类药物的体外诱导突变频率。[结论]SOS应答与牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌对喹诺酮类药物耐药适应性相关,其中recO基因的缺失可显著降低其对喹诺酮类药物的突变频率,其是否可作为新型耐药抑制剂靶点还需进一步研究。

关键词：牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌 SOS应答耐药性

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基于牛A型巴氏杆菌recA氟喹诺酮类药物耐药抑制剂筛选研究

基于牛A型巴氏杆菌recA氟喹诺酮类药物耐药抑制剂筛选研究

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作者：徐冠艺吉林农业大学

学位级别：硕士

近年来,随着世界范围内抗生素的不合理使用导致兽医临床主要致病菌对常用药物产生了严重的耐药性,而反观近年来的新药研发速率却呈逐年下降趋势,对畜牧养殖业造成了严重威胁。针对这一困境,筛选现处于耐药窗口期的常用药物耐药抑制剂靶... 详细信息

近年来,随着世界范围内抗生素的不合理使用导致兽医临床主要致病菌对常用药物产生了严重的耐药性,而反观近年来的新药研发速率却呈逐年下降趋势,对畜牧养殖业造成了严重威胁。针对这一困境,筛选现处于耐药窗口期的常用药物耐药抑制剂靶点,研发新型抗菌增效剂延缓现有药物使用寿命已迫在眉睫。其中牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella mutocida,Pm)作为牛呼吸系统疾病的主要病原菌之一,对兽医临床常用药物产生了严重的耐药性。课题组前期研究表明不同耐药表型牛荚膜A型Pm SOS通路基因(rec O、ruv A等)的表达介导了牛荚膜A型Pm的持留,可作为潜在的耐药抑制剂靶点。为此,本研究以SOS反应关键启动基因rec A为靶点,筛选潜在药源分子以期增强氟喹诺酮类药物的治疗作用,并延长其使用寿命。主要研究内容包括以下三部分:首先,以牛荚膜A型Pm的rec A基因为靶基因,采用生物信息学方法对其进行同源建模;通过分子对接的不同精度打分原则从小分子化合物库中筛选靶向Rec A蛋白的抑制剂,结果显示小分子化合物B4964打分较低(glide gscore=-7.916),推测其可能作用于Rec A蛋白;通过q PCR方法在m RNA水平对B4964抑制rec A基因的作用进行了确证,结果显示,亚抑菌浓度的B4964可极显著抑制由环丙沙星引起的牛荚膜A型Pm rec A基因的表达(P牛荚膜A型Pm耐药形成时间、突变选择窗、突变频率、生物被膜形成能力、抗生素耐受性及细菌持留性的影响,结果显示B4964可抑制rec A基因的表达,延长牛荚膜A型Pm对环丙沙星的耐药形成时间,降低环丙沙星的突变选择窗和不同耐药表型牛荚膜A型Pm的突变频率,抑制了牛荚膜A型Pm生物被膜的形成能力,并抑制了牛荚膜A型Pm持留菌的形成;同时基于牛荚膜A型Pm构建的SOS反应启动子荧光活性报告载体和Rec A蛋白的表达载体,发现B4964与环丙沙星联合用药可显著抑制由环丙沙星诱导的SOS反应的启动,并抑制Rec A的表达。最后,通过细胞毒性试验以及溶血活性试验初步检测了B4964与环丙沙星联合使用的安全性,结果显示联用后并未对RAW264.7细胞以及293细胞产生毒性作用,未对兔红细胞出现溶血活性;构建了小鼠P3-肺炎感染模型以及治疗模型,发现联合用药可增强小鼠的存活率,快速杀灭靶器官组织的病原菌,抑制环丙沙星治疗所诱导的体内持留菌的形成,抑制了突变菌株的形成,以及降低了体内病原菌的突变频率,增强了环丙沙星的体内治疗效果。总之,本研究以牛荚膜A型Pm为模式菌,构建了SOS反应耐药抑制剂筛选平台,筛选获得了能抑制SOS反应潜在药源分子B4964,并证明了其可抑制牛荚膜A型Pm持留菌的产生,为氟喹诺酮类药物耐药抑制剂的研发奠定了基础。

关键词：牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌氟喹诺酮类药物耐药抑制剂靶点耐药抑制剂

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牛支原体、A型巴氏杆菌二联灭活疫苗模型动物免疫保护性评价

牛支原体、A型巴氏杆菌二联灭活疫苗模型动物免疫保护性评价

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作者：李轩宇吉林农业大学

学位级别：硕士

牛呼吸道疾病综合征(Bovine Respiratory Disease,BRD)是危害肉牛产业的重要疾病,其主要病原为牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)、牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌(P.multocida)等,其中,由M.bovis、P.multocida混合感染引发的BRD具有更高的发病率、死亡率,给肉牛产业以及“政银担保联盟”造成了巨大经济损失。目前,针对M.bovis、P.multocida引发的疾病主要采用抗菌药物进行治疗,但随着药物的不合理使用,已导致这两种致病菌对常用药物产生了耐药性,因耐药性造成的抗感染失败已屡见不鲜。筛选获得免疫原性好的疫苗候选菌株,研发M.bovis、P.multocida二联灭活疫苗,是有效预防M.bovis、P.multocida混合感染的重要策略。为此,本研究对课题组已筛选获得的生产用、检验中菌株进行验证,建立二联苗原始、基础和生产用种子批,制备M.bovis、P.multocida二联灭活疫苗,并采用模型动物对二联灭活疫苗的免疫保护性进行测定,主要试验内容如下:(1)基于课题组前期筛选获得的检验用M.bovis CC200910株、Mb1株和P.multocida YT150616株进一步对其毒性进行确证,建立家兔感染模型,分别设M.bovis CC200910株感染组、M.bovis Mb1株感染组、P.multocida YT150616株感染组以及空白对照组。通过临床观察、饮食情况、肺脏评分及致死率判定等实验证明M.bovis CC200910株(4.04分)和P.multocida YT150616株(致死率达75%)具有较强毒力,可作为二联苗检验用菌株。(2)基于课题组已筛选获得的疫苗用菌株M.bovis TL140428株和P.multocida YT150616株,本研究采用冷冻干燥技术对两株疫苗用菌株的原始、基础、生产用种子批进行建立,对M.bovis TL140428株和P.multocida YT150616株种子批的纯粹性、安全性及免疫原性等进行测定,结果显示,上述种子批均符合标准,为M.bovis、P.multocida二联灭活疫苗的制备提供了保障。(3)采用M.bovis TL140428株和P.multocida YT150616株生产用种子制备二联灭活疫苗,通过M.bovis CC200910株和P.multocida YT150616株检验用种子建立的家兔感染模型对二免灭活苗的免疫保护性进行评价,采用5.5分制对M.bovis感染肺脏病变程度进行评分,统计P.multocida感染家兔模型的致死率。结果显示,二联灭活疫苗对M.bovis CC200910株的保护率为73.4%,对P.multocida YT150616株的保护率为87.5%,说明制备的二联灭活疫苗具备良好的免疫保护力,为后期靶动物试验奠定了坚实基础。

关键词：牛支原体牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌种子批二联灭活疫苗

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拮抗牛呼吸系统疾病主要病原菌乳酸菌的筛选及特性研究

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中国兽医杂志 2020年第9期56卷 26-29,33页

作者：党乔吴信豪贾博岩刘磊马珺杨刘树明孔令聪马红霞吉林农业大学食品科学与工程学院吉林长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 动物生产及产品质量安全教育部重点实验室吉林长春130118

为了从发酵食品中筛选出对牛支原体、牛溶血性曼氏杆菌、牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌有拮抗功能的乳酸菌,并进一步对其生物学特性及抑菌特性进行研究。采用牛津杯法抑菌试验筛选得到1株具有优良抑菌活性的鼠李糖乳杆菌,该菌无溶血活性,其... 详细信息

为了从发酵食品中筛选出对牛支原体、牛溶血性曼氏杆菌、牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌有拮抗功能的乳酸菌,并进一步对其生物学特性及抑菌特性进行研究。采用牛津杯法抑菌试验筛选得到1株具有优良抑菌活性的鼠李糖乳杆菌,该菌无溶血活性,其抑菌产物具有良好的热稳定性和抗紫外照射活性,抑菌能力随pH降低而增强,经蛋白酶酶解后,抑菌活性有不同程度降低。该株乳酸菌可作为潜在益生菌株防治牛呼吸系统疾病。

关键词：乳酸菌牛支原体牛溶血性曼氏杆菌牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌

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