检索结果-南通市图书馆

新疆一例牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体混合感染的病例初报

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国动物检疫 2024年第1期41卷 112-119页

作者：葛婷宋瑞其石河子大学医学院新疆石河子832003

2021年8月17日,新疆托克逊县一头西门塔尔母牛出现高热、瘤胃胀气、肌肉震颤、呼吸急促、结膜黄染和血红蛋白尿等临床症状。为确认发病原因,采集该牛全血和体表蜱虫样品进行光学显微镜观察、血常规检测和聚合酶链式反应(PCR)检测。血涂... 详细信息

2021年8月17日,新疆托克逊县一头西门塔尔母牛出现高热、瘤胃胀气、肌肉震颤、呼吸急促、结膜黄染和血红蛋白尿等临床症状。为确认发病原因,采集该牛全血和体表蜱虫样品进行光学显微镜观察、血常规检测和聚合酶链式反应(PCR)检测。血涂片镜检结果显示,患牛疑似牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体混合感染;血常规检测显示,血红蛋白、血红细胞压积、平均血红蛋白浓度和中性粒细胞等指标下降,血小板和淋巴细胞百分比等指标上升,提示该牛机体存在贫血和炎症反应;血液样品PCR结果显示,牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体检测均呈阳性;蜱虫样品PCR结果显示,牛环形泰勒虫检测为阳性。综上,患牛最终被诊断为牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体混合感染。目前,此3种病原共同感染牛的案例极为少见。本研究为今后牛混合感染牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体的临床诊断提供了参考。

关键词：牛环形泰勒虫念珠菌绵羊无浆体混合感染进化树分析

牛环形泰勒虫enolase基因的原核表达及生物信息学分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2022年第10期49卷 3972-3981页

作者：郑会珍普浩缪荣浩甘露葛晓敏巴音查汗李永畅郭庆勇新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

【目的】获得牛环形泰勒虫(Theileria annulata)新疆株enolase基因,并分析其生物学特性及反应原性。【方法】对牛环形泰勒虫enolase基因进行扩增和克隆,构建原核表达载体pGEX-4T-1-enolase,诱导表达enolase重组蛋白并进行蛋白纯化,通过W... 详细信息

【目的】获得牛环形泰勒虫(Theileria annulata)新疆株enolase基因,并分析其生物学特性及反应原性。【方法】对牛环形泰勒虫enolase基因进行扩增和克隆,构建原核表达载体pGEX-4T-1-enolase,诱导表达enolase重组蛋白并进行蛋白纯化,通过Western blotting验证enolase重组蛋白反应原性。利用生物信息学方法对enolase基因编码蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区、信号肽、磷酸化、亚细胞定位及蛋白互作网络进行预测分析。【结果】PCR扩增出大小为1248 bp的牛环形泰勒虫enolase基因片段,enolase重组蛋白大小约70 ku;Western blotting结果表明,该重组蛋白与牛环形泰勒虫阳性血清发生反应。enolase基因编码416个氨基酸,理论等电点为5.91,有38个磷酸化位点;二级结构主要由α-螺旋(43.03%)和无规则卷曲(33.17%)组成;具有17个B细胞抗原表位,亚细胞定位主要位于细胞质中;enolase蛋白与磷酸甘油酸变位酶(PGAM)、二磷酸核苷激酶(NDK)、磷酸甘油酸激酶(PGK)、热休克蛋白70(HSP70)存在相互作用。【结论】本试验成功克隆出新疆牛环形泰勒虫enolase基因,蛋白互作网络预测其与糖酵解和能量代谢相关的蛋白相互作用。研究结果为牛环形泰勒虫能量代谢途径基因的相关研究奠定基础。

关键词：牛环形泰勒虫 enolase基因重组蛋白生物学特性

牛环形泰勒虫enolase基因的克隆表达及其重组蛋白免疫反应的初步研究

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

牛环形泰勒虫enolase基因的克隆表达及其重组蛋白免疫反应的初步...

作者：郑会珍新疆农业大学

学位级别：硕士

牛环形泰勒虫病又称热带泰勒虫病,该病在国内外经璃眼蜱属广泛传播,由于高死亡率、治疗和控制措施的高成本等负面影响引起全球畜牧业的关注。防治该疾病的措施主要包括疫苗预防、药物灭蜱和治疗3个方面。现如今,国内外均出现布帕伐醌耐... 详细信息

牛环形泰勒虫病又称热带泰勒虫病,该病在国内外经璃眼蜱属广泛传播,由于高死亡率、治疗和控制措施的高成本等负面影响引起全球畜牧业的关注。防治该疾病的措施主要包括疫苗预防、药物灭蜱和治疗3个方面。现如今,国内外均出现布帕伐醌耐药虫株的报道,人们急需研制具有不同作用机制的新型药物或化合物。烯醇化酶(Enolase)在病原体的能量代谢、感染宿主过程及与宿主的互作等方面存在重要地位,且具有较好的免疫原性,可作为候选疫苗或治疗药物靶标。故本研究将Enolase蛋白表达纯化及免疫,检测免疫动物Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体水平、T细胞增殖情况及淋巴细胞亚群分布等指标,评估重组蛋白对试验动物体液和细胞免疫水平的影响,为其能否成为抗牛环形泰勒虫候选抗原提供依据,为有效地防控牛环形泰勒虫病提供数据资料。(1)本研究对环形泰勒虫(Theileria annulata,***)enolase基因进行克隆,构建原核表达载体p ET-32a-enolase和真核表达载体p EGFP-enolase,诱导表达enolase重组蛋白并进行蛋白纯化,通过Western blotting验证enolase重组蛋白反应原性。利用生物信息学方法对enolase基因编码蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区、信号肽、磷酸化、亚细胞定位及蛋白互作网络进行预测分析。结果显示PCR扩增出大小为1 248 bp的环形泰勒虫enolase基因片段,enolase重组蛋白大小约68 k Da;Western blotting结果表明,该重组蛋白与环形泰勒虫阳性血清发生反应。二级结构主要由α-螺旋(43.03%)和无规则卷曲(33.17%)组成;具有17个B细胞抗原表位,亚细胞定位主要位于细胞质中;enolase蛋白与磷酸甘油酸变位酶(PGAM)、二磷酸核苷激酶(NDK)、磷酸甘油酸激酶(PGK)、热休克蛋白70(HSP70)存在相互作用。(2)本实验使用His纯化柱和超滤管对p ET-32a-enolase进行纯化和浓缩,利用牛环形泰勒虫重组蛋白(r-Ta-enolase)免疫BALB/c鼠制备多克隆抗体,经间接ELISA方法检测免疫前后血清的特异性抗体水平,通过间接免疫荧光(Immunofluorescent antibody,IFAT)和Western blotting验证该蛋白免疫原性及亚细胞定位。结果显示,ELISA检测其特异性抗体Ig G水平高达1∶6 553 600,与对照组相比差异极显著(P<0.01),免疫后Ig G1和Ig G2a水平均与对照组差异极显著(P<0.01),免疫后Ig G1水平显著高于Ig G2a水平(P<0.01),表明免疫后小鼠可引起极高的体液免疫水平;IFAT表明enolase主要于293T细胞的细胞核和细胞质中表达,Western blotting验证鼠抗r-Ta-enolase多克隆抗体可与p EGFP-enolase反应,具有良好的免疫反应。(3)本实验取免疫前后小鼠脾脏制备淋巴细胞悬液,使用流式细胞术检测脾脏T细胞亚群分群情况;将r-Ta-enolase蛋白继续加强刺激脾脏淋巴细胞后,运用MTT试剂盒检测淋巴细胞的增殖情况;使用SPSS ANOVA单因素检验进行差异显著性分析。结果显示,免疫组和对照组小鼠脾脏淋巴细胞CD4+/CD8+T细胞的比值分别为2.53±0.11和1.85±0.11,差异极显著(P<0.01);使用r-Taenolase重组蛋白刺激小鼠脾脏淋巴细胞后明显促进其增殖(P<0.05),研究结果表明r-Ta-enolase免疫小鼠能够诱导细胞免疫应答,细胞免疫应答偏向于CD4+T cell细胞,不会造成机体的免疫抑制或过度反应,为后续其在疫苗中的免疫功能提供数据资料。

关键词：牛环形泰勒虫 enolase 生物信息学特异性抗体水平免疫应答

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

牛环形泰勒虫诊断性靶基因片段的筛选及鉴定

中国兽医科学 2013年第12期43卷 1231-1235页

作者：曹雯丽林涛郭庆勇王冰洁张杨巴音查汗新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

通过对牛环形泰勒虫Tams1基因的不同片段进行克隆表达,以期得出该基因疏水区对蛋白表达的影响及筛选的目的蛋白作为ELISA抗原的特异性。利用3对不同的特异性引物对Tams1基因的三段区域(全长基因、无N端及C端疏水区、仅缺乏N端的疏水区)... 详细信息

通过对牛环形泰勒虫Tams1基因的不同片段进行克隆表达,以期得出该基因疏水区对蛋白表达的影响及筛选的目的蛋白作为ELISA抗原的特异性。利用3对不同的特异性引物对Tams1基因的三段区域(全长基因、无N端及C端疏水区、仅缺乏N端的疏水区)进行克隆,最终构建三种重组表达载体。经电泳分析筛选获得可溶性表达重组质粒,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western-blot分析。结果显示,在37℃条件下,经终浓度为1mmol/L IPTG诱导表达4h后,无疏水区的靶重组质粒表达出53ku的可溶性蛋白,其表达量达1.39mg/mL;而含全长基因或C端疏水区的质粒分别表达55ku、56ku的包涵体蛋白。Western-blot分析结果表明,筛选得到的可溶性蛋白能被环形泰勒虫阳性血清特异性识别,具有良好的反应原性。结果表明,该蛋白可作为潜在的进行牛环形泰勒虫病流行病学调查的候选抗原。

关键词：牛环形泰勒虫 Tams1基因片段筛选重组质粒可溶性蛋白

牛环形泰勒虫GST-Tams1融合蛋白间接ELISA检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

新疆农业科学 2011年第3期48卷 578-583页

作者：简子健马素贞黄家雨孙其吉吉沈炯玉苗中秋吕伟新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

【目的与方法】以纯化的牛环形泰勒虫GST-Tams1融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,建立检测牛环形泰勒虫血清特异性抗体的间接ELISA方法。【结果】方阵试验确定的GST-Tams1抗原的最适包被浓度为10μg/mL,血清最佳稀释倍数为80... 详细信息

【目的与方法】以纯化的牛环形泰勒虫GST-Tams1融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,建立检测牛环形泰勒虫血清特异性抗体的间接ELISA方法。【结果】方阵试验确定的GST-Tams1抗原的最适包被浓度为10μg/mL,血清最佳稀释倍数为80倍,ELISA阳性反应的临界值为OD450≥0.282,批内和批间重复试验的变异系数均小于15%。Tams1间接ELISA方法能排除GST的干扰,与其它梨形虫病无交叉反应,与环形泰勒虫病巢式PCR检测方法的阳性符合率为96%。【结论】建立的Tams1间接ELSIA检测法重复性好、特异性强、灵敏度高。这是国内首次利用重组蛋白建立的牛环形泰勒虫病血清学诊断方法,为大规模地进行牛环形泰勒虫病的流行病学调查和血清学诊断提供有效的技术手段。

关键词：牛环形泰勒虫裂殖子表面抗原1 重组抗原间接ELISA 建立

牛环形泰勒虫新疆株Tams1基因真核表达载体的构建及免疫反应性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

新疆农业科学 2009年第3期46卷 651-656页

作者：简子健苗中秋马素贞谷思燚新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 辽宁农业职业技术学院辽宁营口115009

研究采用PCR方法从焦虫病患牛的全血基因组中扩增得到846 bp的Tams1基因片段,将其克隆至真核表达载pcDNA3.1(+),构建Tams1基因的真核表达质粒。经测序验证后,将Tams1基因的真核表达质粒尾静脉注射小白鼠进行Tams1基因的瞬时表达。取接... 详细信息

研究采用PCR方法从焦虫病患牛的全血基因组中扩增得到846 bp的Tams1基因片段,将其克隆至真核表达载pcDNA3.1(+),构建Tams1基因的真核表达质粒。经测序验证后,将Tams1基因的真核表达质粒尾静脉注射小白鼠进行Tams1基因的瞬时表达。取接种小鼠的肝脏提取总RNA,采用RT-PCR扩增目的条带;用重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1皮下注射免疫小白鼠4次后,进行免疫抗体检测。试验结果表明重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1含有完整的Tmas1基因片段。用该重组质粒免疫小鼠56 d后,小鼠血清中抗重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1的抗体效价可达1∶12 000以上,说明该重组质粒具有很强的抗原性。经Western-blot检验可得到抗原-抗体复合物产生的特异性条带,说明该重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1具有免疫原性。

关键词：牛环形泰勒虫 Tams1基因表达载体构建免疫印迹法

牛环形泰勒虫HSP70基因的克隆表达、特性分析及互作蛋白网络构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2021年第1期48卷 1-11页

作者：樊新丽宋瑞其呼尔查李敏翟雪洁郝蕴伟巴音查汗张杨新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 新疆农业大学动物科学学院乌鲁木齐830052

为了表达牛环形泰勒虫(Theileria annulata)截短HSP70基因编码蛋白并研究该蛋白的结构与功能特性,本研究扩增牛环形泰勒虫HSP70目的基因并构建重组质粒pMD18-T-HSP70,选取其他种的同源HSP70蛋白序列构建系统进化树;利用生物信息学方法分... 详细信息

为了表达牛环形泰勒虫(Theileria annulata)截短HSP70基因编码蛋白并研究该蛋白的结构与功能特性,本研究扩增牛环形泰勒虫HSP70目的基因并构建重组质粒pMD18-T-HSP70,选取其他种的同源HSP70蛋白序列构建系统进化树;利用生物信息学方法分析HSP70基因编码蛋白的氨基酸组成、基本理化性质、亲疏水性、跨膜区结构、信号肽、可能的磷酸化位点、亚细胞定位及蛋白的二级结构和三级结构;对重组蛋白HSP70进行蛋白互作网络分析;构建原核表达载体pET28a-HSP70,筛选诱导表达条件,镍柱纯化重组蛋白及检测反应原性。结果显示,牛环形泰勒虫HSP70蛋白序列与小泰勒虫的序列同源性较高,蛋白分子质量为42 ku,理论等电点(pI)为5.61,属于酸性亲水性蛋白,无跨膜区及信号肽;蛋白功能预测结果显示,HSP70包含32个可能的磷酸化位点,亚细胞定位分析显示该蛋白主要分布于细胞质。蛋白质二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲、延伸链分别占39.18%、8.51%、30.41%和21.91%。蛋白互作网络构建结果显示,与HSP70相互作用的蛋白主要为HSP90家族成员,另外还有伴侣蛋白GrpE同系物,预示着HSP70可能在细胞内与HSP90形成复合体发挥作用。本试验成功构建原核表达载体,获得了大小约为48 ku的融合蛋白,以0.6 mmol/L IPTG于37℃诱导5 h,蛋白表达较好;点状印迹及Western blotting结果表明,表达产物可被自然感染的牛环形泰勒虫阳性血清识别,具有良好的反应原性。本试验结果为进一步探讨牛环形泰勒虫HSP70功能机制提供了理论依据。

关键词：牛环形泰勒虫 HSP70基因原核表达反应原性生物信息学分析

牛环形泰勒虫裂殖子/梨浆虫表面抗原基因非疏水区的克隆及GST-P27重组蛋白的高效表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2014年第3期41卷 49-53页

作者：曹雯丽王真沙它尔.卡哈尔王冰洁巴音查汗新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 吐鲁番市畜牧兽医站新疆吐鲁番838000

试验据GenBank登载的牛环形泰勒虫裂殖子/梨浆虫表面抗原(the merozoite/piroplasm surface antigen,Tams1)基因序列(登录号:AF214842),设计1对特异性引物,经PCR扩增出696bp的Tams1基因片段,将其插入pGEX-4T-2表达载体,提取质粒进行双酶切鉴定并测序,同源性达98%;将插入阳性质粒的BL21(DE3)菌种诱导表达重组蛋白,经优化后在37℃、0.5mmol/L IPTG诱导4h的表达条件下获得了表达量达1.39mg/mL的可溶性融合蛋白,大小为53ku;表达产物在Glutathione Sepharose 4B柱上纯化后,免疫印迹检测结果表明重组蛋白GST-P27具有良好的反应原性。

关键词：牛环形泰勒虫 Tams1基因克隆 GST-P27 高效表达

牛环形泰勒虫昆明白小鼠繁殖模型与间接荧光抗体检测法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

牛环形泰勒虫昆明白小鼠繁殖模型与间接荧光抗体检测法的建立

作者：林涛新疆农业大学

学位级别：硕士

牛梨形虫病是由泰勒虫和巴贝斯虫引起的一种蜱传血液原虫病的总称（旧称焦虫病），在我国（包括我区）致病率及其危害最严重的是牛环形泰勒虫（Theileria annulata），OIE将其列为B类疫病。多呈急性经过，以高热、贫血、出血、消瘦和体... 详细信息

牛梨形虫病是由泰勒虫和巴贝斯虫引起的一种蜱传血液原虫病的总称（旧称焦虫病），在我国（包括我区）致病率及其危害最严重的是牛环形泰勒虫（Theileria annulata），OIE将其列为B类疫病。多呈急性经过，以高热、贫血、出血、消瘦和体表淋巴结肿胀为特征，急性病例死亡率较高;主要流行于我国西北、华北和东北的一些省、自治区，在我区广泛流行，其感染率可达60%以上，严重威胁养殖牛业的健康发展。因此，将牛环形泰勒虫地方流行株接种于试验动物进行扩繁，研制玻片裂殖子抗原的基础上，建立准确、灵敏、快速的间接荧光抗体检测方法（IFAT）等，对该病的早期诊断、流行病学研究和综合防治提供技术支持。（Ⅰ）本试验研究，对同胎、体重20g左右、雌雄对半的40只昆明白小鼠进行摘除脾脏的手术，并以被去除脾脏的昆明白小鼠为实验动物，接种牛环形泰勒虫地方流行株，进行体内扩繁试验（invivo），并每隔8h、12h、24h、8h及3d0d观察分析其染虫率，在小鼠体内扩繁情况等;经小鼠心脏、眼球采血的方法收集其最高染虫率（15%以上）的血液内裂殖子，并进行冻存，摸索其保存、复苏条件等。试验结果显示，术后有37只鼠存活，检测其呼吸、心跳、食欲、精神状态皆良好，说明摘脾手术成功;接种后的第2d可在小鼠血液里观察到裂殖子，第5dd每组小鼠的平均染虫率可达15%0%（最高峰），第10d后染虫率开始下降，渐渐在血液涂片中观察不到裂殖体;经试验发现牛源性环形泰勒虫在除脾脏昆明白小鼠体内能被置换、增值;在雌雄昆明白小鼠体内的扩繁率差异极显著（P=0.007＜0.01），而去脾昆明白与未去脾昆明白小鼠的染虫率极显著（P=0.0002＜0.01）;染虫率为15%以上时的昆明白小鼠血液里的裂殖子可用冷冻法（-80℃）保存，亦可制作玻片裂殖子抗原备用，保存后的半年内的裂殖体复苏活性良好。该试验数据可为建立牛环形泰勒虫动物模型，为教学、科研提供丰富的虫株资源。（Ⅱ）本试验研究，应用阳性牛环形泰勒虫病例的血液源性裂殖子和经昆明白小鼠扩繁的裂殖子（试验Ⅰ方法制作的玻片抗原，保存于-80°C备用）作为已知抗原，经十字交叉法分别将一抗（1:20～1:640）和二抗（1:20～1:1600）梯度稀释，摸索和确其最佳工作浓度，建立牛环形泰勒虫病的间接荧光抗体检测方法（IFAT）;经特异性（观察其与牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫是否有交叉反应）、重复性试验等验证其重复性及灵敏度，并运用所建立的方法对疑似牛环形泰勒虫抗体样品（n=290）进行了检测。试验结果显示：自制的牛环形泰勒虫玻片裂殖子抗原在-80℃条件下能保存半年之久，复苏后仍然具有较好的抗原性;牛环形泰勒虫间接荧光抗体检测方法的一抗（被检血清）和二抗（荧光标记兔抗牛IgG）最佳工作浓度分别为1:80和1:100稀释度;该方法检测样品，与牛巴斯虫、双芽巴贝斯虫未出现交叉反应;被检测血清稀释到1:1600仍然可以检测到裂殖子荧光;批内和批间重复检测，变异系数均小于10%;应用所建立的方法成功检测了采自疑似区牛被检血清样品290份，阳性率为72.4%（210／290），本次牛环形泰勒虫的检出率高于血液涂片染色镜检法阳性率为27.6％（80／290）。本试验研究可为牛环形泰勒虫病的诊断提供玻片裂殖子抗原资源;所建立的IFAT方法，其敏感性较高、特异性和重复性较好，可用于该病的早期诊断，可为综合防控奠定基础。

关键词：牛环形泰勒虫昆明白小鼠接种地方株的扩繁玻片裂殖子抗原间接荧光抗体法