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牛溶血性曼氏杆菌及牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗对小鼠的保护性研究

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畜牧兽医学报 2021年第9期52卷 2579-2588页

作者：李甜杨洋谢黎卿王远兰李攀彭远义李能章西南大学动物医学院重庆市牧草与食草动物重点实验室重庆400715

牛溶血性曼氏杆菌及牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌是导致牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease,BRD)的重要细菌性病原,每年给养牛业带来巨大的经济损失,目前对其疫苗研究仍显不足。本研究选用牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh... 详细信息

牛溶血性曼氏杆菌及牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌是导致牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease,BRD)的重要细菌性病原,每年给养牛业带来巨大的经济损失,目前对其疫苗研究仍显不足。本研究选用牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)Mh422株和牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)PmCQ2株作为疫苗菌株,分别制备了2种菌体浓度的Mh和Pm单价灭活菌苗及3种菌量配比(1∶1、2∶1和3∶1)的Mh-Pm二联灭活苗,以小鼠为模型,皮下多点免疫(0.2 mL),加强免疫2次,免疫剂量均为首免的一半。首免后第7天及其后每隔5 d,小鼠尾静脉采血分离血清,ELISA方法检测抗体效价,三免后第20天,分别以Mh422或PmCQ2进行腹腔攻毒测定免疫保护效果。结果显示,所有小鼠接种疫苗均无不良反应,二免后第10天抗体达较高水平,三免后抗体水平持续升高,第15天到达高峰,其后25 d维持高水平,后缓慢下降。Mh单菌苗的2种免疫剂量对Mh422株攻毒的免疫保护率均为0,而Pm单菌苗的2种免疫剂量对PmCQ2株攻毒的免疫保护率全为100%;Mh和Pm间无交叉免疫保护作用;3种菌量配比的Mh-Pm二联疫苗对Mh422株和PmCQ2株攻毒的各自免疫保护率分别为53%~71%和100%。该研究结果表明,所制备的Mh422单菌苗对同型攻毒无免疫保护作用,在诱导机体抗体产生方面,Mh和Pm间无相互抑制作用,PmCQ2株具有促进Mh422株灭活疫苗对Mh422的免疫保护作用,这为牛溶血性曼氏杆菌和牛多杀性巴氏杆菌二联疫苗的进一步研究提供了理论基础。

关键词：牛溶血性曼氏杆菌牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗免疫保护

牛溶血性曼氏杆菌白细胞毒素、脂蛋白E和外膜蛋白A的免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2021年第7期43卷 753-758页

作者：李奕欣姜志刚于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069

在应激条件下,溶血性曼氏杆菌(Mh)能够引起牛的纤维素性肺炎或胸膜肺炎,对全球养牛业危害严重,免疫接种是防控Mh病的主要手段。为了评价牛源A1型Mh脂蛋白E(PlpE)、外膜蛋白A(OmpA)以及白细胞毒素(LKT)的免疫原性,本研究分别将PlpE、Omp... 详细信息

在应激条件下,溶血性曼氏杆菌(Mh)能够引起牛的纤维素性肺炎或胸膜肺炎,对全球养牛业危害严重,免疫接种是防控Mh病的主要手段。为了评价牛源A1型Mh脂蛋白E(PlpE)、外膜蛋白A(OmpA)以及白细胞毒素(LKT)的免疫原性,本研究分别将PlpE、OmpA以及LKT的毒力效应蛋白LKTA的编码基因克隆至原核表达载体pET-28a,并在大肠杆菌中表达,采用亲和层析或电洗脱的方法对重组蛋白进行提纯。将纯化的重组蛋白rPlpE、r OmpA和rLKTA分别或组合接种BALB/c小鼠,首次免疫14 d后采用相同方法加强免疫,分别于首次免疫后14 d、21 d、28 d和35 d采集小鼠血清。采用间接ELISA方法检测小鼠血清中针对Mh的特异性IgG抗体水平,结果显示各重组蛋白均能够诱导小鼠产生针对Mh的特异性IgG抗体,而rPlpE和rLKTA诱导的抗体水平明显高于r OmpA。采用牛淋巴细胞中和试验检测rLKTA免疫小鼠血清中针对LKT的中和抗体水平,结果显示rLKTA能够诱导小鼠产生高水平的中和抗体,二免后21 d小鼠血清中的平均中和抗体滴度可达363。以致死剂量的A1型Mh菌液对免疫小鼠进行攻击,结果显示rPlpE对小鼠的保护率为50%(2/4),而rOmpA对小鼠无保护作用。综上所述,r LKTA和r PlpE能够诱导小鼠产生针对Mh的保护性免疫应答,是A1型Mh的优势保护性免疫原组分,本研究为全面了解牛源A1型Mh主要免疫保护性抗原以及Mh新型疫苗的研究奠定了实验基础。

关键词：牛溶血性曼氏杆菌白细胞毒素脂蛋白E 外膜蛋白A 免疫原性

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牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗的制备与检定

中国生物制品学杂志 2014年第8期27卷 990-993页

作者：高佳滨陈为宏尹辉乔波陈楠楠朱战波黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

目的制备牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗,并进行检定。方法从黑龙江某牛场发病牛病变的肺组织中分离溶血性曼氏杆菌,经各项鉴定合格后,制备种子液。确定甲醛灭活牛溶血性曼氏杆菌的最佳浓度,将最佳浓度甲醛灭活24 h的牛溶血性曼氏杆菌菌液分... 详细信息

目的制备牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗,并进行检定。方法从黑龙江某牛场发病牛病变的肺组织中分离溶血性曼氏杆菌,经各项鉴定合格后,制备种子液。确定甲醛灭活牛溶血性曼氏杆菌的最佳浓度,将最佳浓度甲醛灭活24 h的牛溶血性曼氏杆菌菌液分别与弗氏佐剂和灭菌Al(OH)3佐剂混合乳化,制备弗氏佐剂灭活疫苗和铝佐剂灭活疫苗,对两种佐剂灭活疫苗进行无菌检验、物理性状检查、安全性观察和效力检验。结果甲醛灭活牛溶血性曼氏杆菌的最佳终浓度为0.3%。制备的两种佐剂疫苗在5%绵羊血琼脂平板上培养24 h,均无细菌生长;物理性状良好;疫苗注射昆明小鼠后,弗氏佐剂灭活疫苗组小鼠除在注射部位部分产生结节外,无其他副作用,而铝佐剂灭活疫苗组小鼠注射部位产生了脓肿和结块;弗氏佐剂灭活疫苗对经牛溶血性曼氏杆菌强毒菌液攻击的小鼠的保护效果较明显,保护率为90%;铝佐剂灭活疫苗产生的保护作用较弱,保护率为80%。结论成功制备了弗氏佐剂和铝佐剂的牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗,其中弗氏佐剂灭活疫苗效果较好,可用于临床溶血性曼氏杆菌引起的呼吸道传染病的预防。

关键词：牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗弗氏佐剂 A(lOH)3佐剂

我国东北部分地区牛溶血性曼氏杆菌的分子流行病学研究

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中国预防兽医学报 2020年第6期42卷 555-560页

作者：姜志刚李奕欣于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069

为了解牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)在我国牛群中的流行情况,本研究于2014年~2019年在东北部分地区采集健康牛、患病牛的鼻拭子和肺脏样品进行细菌的检测、分离和鉴定,并对分离株进行遗传进化分析。对牛溶血性曼氏杆菌... 详细信息

为了解牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)在我国牛群中的流行情况,本研究于2014年~2019年在东北部分地区采集健康牛、患病牛的鼻拭子和肺脏样品进行细菌的检测、分离和鉴定,并对分离株进行遗传进化分析。对牛溶血性曼氏杆菌的检测结果显示,不同年份、不同地区采集样品的总检出率为23.5%(28/119),其中健康牛的检出率为13.46%(7/52),明显低于临床发病或死亡牛样品的检出率31.34%(21/67)。采用特异性分型PCR检测发现,Mh分离株分为A1、A2和A6三个血清型,从健康牛分离的Mh株的主要血清型为A2型,而从发病或死亡牛主要分离的Mh是A1和A6型。遗传进化分析表明,A1和A6型分离株位于同一进化分支,菌株间16S rDNA和lktA基因的序列同源性均为100%;而它们与A2型分离株的亲缘关系较远,16S rDNA和lktA基因的序列同源性分别为99.8%~99.9%和85.8%~86.7%;此外,A1和A6型分离株的lktA同属于lktA1等位基因亚型,而A2型分离株属于lktA2和lktA8亚型,与A1和A6型相比呈现出较强的序列多样性。综上所述,Mh在我国东北部分地区牛群中的存在较为普遍,且A1和A6血清型是牛群中Mh的主要致病血清型。本研究获得的流行病学数据为我国牛群中溶血性曼氏杆菌的病原学以及疫苗研究提供科学依据。

关键词：牛溶血性曼氏杆菌流行病学调查血清型鉴定进化分析

牛呼吸疾病综合征七病原联合检测多重qPCR方法的建立

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华中农业大学学报 2023年第2期42卷 38-47页

作者：徐恩红祁明普项志杰胡长敏陈颖钰陈建国陈曦郭爱珍华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室武汉430070 湖北洪山实验室武汉430070 湖北省兽医流行病学国际科技合作基地/农业农村部兽用诊断制剂创制重点实验室/农业农村部反刍动物生物制品重点实验室武汉430070

为了提高牛呼吸疾病综合征多病原混合感染的临床诊断效率,以牛支原体(Mycoplasma bovis,M.b)oppD/F基因、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,P.m)ompH基因、溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,M.h)gcp基因、牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gB基因、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)以及牛副流感病毒(bovine parainfluenza virus type,BPIV) 3型a和c基因型(BPIV-3a,-3c)的N基因等为检测靶标,分别设计特异性引物和Taqman探针,通过优化反应条件,采用3管7联的组合方式建立了7种病原体的多联实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法仅对本试验的7种病原有特异性反应,与其他常见病原无交叉反应。对M.b、P.m、M.h、IBRV、BRSV、BPIV-3a和BPIV-3c质粒标准品的最低检测限分别为102、102、101、102、102、102和101拷贝/μL。组内变异系数小于2.5%,组间变异系数小于5.5%。平行应用该方法和常规PCR方法对临床采集的115份有呼吸道症状牛的鼻拭子进行检测,P.m阳性率36.65%,M.b阳性率27.83%,M.h阳性率25.22%,IBRV阳性率11.30%,BPIV-3c阳性率8.57%,BRSV阳性率0.95%;其中混合感染率为26.1%。共检测到11种混合感染模式,主要由M.b与其他病原体的混合感染,占72.7%(8/11);M.b/P.m混合感染的检出率最高,占60%(18/30);M.b、P.m、M.h在混合感染中出现率排前三,其占比分别为73.3%(22/30)、73.3%(22/30)和43.3%(13/30);其次为IBRV,占26.7%(8/30);BPIV-3c占13.3%(4/30)。以上结果表明,该方法具有较高的分析敏感性和特异性,可用于牛呼吸疾病综合征多病原感染的联合检测。

关键词：多联实时荧光定量PCR方法牛呼吸疾病综合征混合感染牛支原体多杀性巴氏杆菌牛溶血性曼氏杆菌多病原联合检测

拮抗牛呼吸系统疾病主要病原菌乳酸菌的筛选及特性研究

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中国兽医杂志 2020年第9期56卷 26-29,33页

作者：党乔吴信豪贾博岩刘磊马珺杨刘树明孔令聪马红霞吉林农业大学食品科学与工程学院吉林长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 动物生产及产品质量安全教育部重点实验室吉林长春130118

为了从发酵食品中筛选出对牛支原体、牛溶血性曼氏杆菌、牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌有拮抗功能的乳酸菌,并进一步对其生物学特性及抑菌特性进行研究。采用牛津杯法抑菌试验筛选得到1株具有优良抑菌活性的鼠李糖乳杆菌,该菌无溶血活性,其... 详细信息

为了从发酵食品中筛选出对牛支原体、牛溶血性曼氏杆菌、牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌有拮抗功能的乳酸菌,并进一步对其生物学特性及抑菌特性进行研究。采用牛津杯法抑菌试验筛选得到1株具有优良抑菌活性的鼠李糖乳杆菌,该菌无溶血活性,其抑菌产物具有良好的热稳定性和抗紫外照射活性,抑菌能力随pH降低而增强,经蛋白酶酶解后,抑菌活性有不同程度降低。该株乳酸菌可作为潜在益生菌株防治牛呼吸系统疾病。

关键词：乳酸菌牛支原体牛溶血性曼氏杆菌牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌