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目的:建立一种快速且精准的方法,以确定水解乳蛋白婴幼儿配方粉的免疫反应性。方法:首先采用直接免疫斑点印迹法,利用牛奶过敏患儿血清初步评估待测样品的免疫反应性;然后通过间接竞争免疫斑点印迹法以市售普通牛奶粉为阳性对照,评估水解乳蛋白婴幼儿配方粉与血清免疫球蛋白E(IgE)的结合能力;最后采用间接和间接竞争酶联免疫检测法,以佐证免疫斑点印迹结果。结果:部分水解乳蛋白婴配粉仍可以结合IgE以诱发过敏反应,而深度水解乳蛋白婴配粉不具有免疫反应性。免疫斑点印迹和酶联免疫检测评价免疫反应性结果显著且一致。结论:免疫斑点印迹技术操作性强,周期短,成本低,结果可靠,为利用较难获取的婴幼儿过敏患儿血清初步评估乳蛋白产品致敏性提供了新思路。

关键词：牛奶过敏免疫斑点印迹酶联免疫吸附间接和间接竞争过敏血清

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儿童误食牛奶制品过敏致死1例

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人民军医 1991年第10期 61-62页

作者：彭国英丁小萍海军总医院儿科

牛奶过敏国外屡有报道,在健康儿中的发生率约为0.3%～7%。国内报道不多。其症状多为哮喘、皮肤粘膜症状及消化道症状。我们曾遇到1例牛奶过敏致死的患儿。现报告如下。病历摘要患儿张某,男,6岁。第一胎足月顺产。生后母乳喂养,满月时曾... 详细信息

牛奶过敏国外屡有报道,在健康儿中的发生率约为0.3%～7%。国内报道不多。其症状多为哮喘、皮肤粘膜症状及消化道症状。我们曾遇到1例牛奶过敏致死的患儿。现报告如下。病历摘要患儿张某,男,6岁。第一胎足月顺产。生后母乳喂养,满月时曾吃牛奶1次,无反应。3～5岁间先后4次食牛奶制品(面包,蛋糕、冰棒等)均

关键词：牛奶蛋白过敏牛奶过敏乳球蛋白乳蛋白哮喘气喘病阻塞性肺疾病牛奶制品

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牛奶中主要过敏原的消除及检测技术的研究

牛奶中主要过敏原的消除及检测技术的研究

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作者：白振宇天津商业大学

学位级别：硕士

本论文使用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对市售牛奶进行水解,通过正交实验优化,并用牛奶过敏者血清测定其水解效果。研究表明,胰蛋白酶的最适水解条件为温度在40℃,pH8.0,酶与底物质量比为5%,水解时间为3小时,木瓜蛋白酶的水解最... 详细信息

本论文使用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对市售牛奶进行水解,通过正交实验优化,并用牛奶过敏者血清测定其水解效果。研究表明,胰蛋白酶的最适水解条件为温度在40℃,pH8.0,酶与底物质量比为5%,水解时间为3小时,木瓜蛋白酶的水解最佳条件为65℃,pH6.5,酶与底物质量比为4%,水解时间为3小时,菠萝蛋白酶的最佳水解条件为60℃,pH6.5,酶与底物质量比为4%,水解时间为2小时。在酶的最佳水解条件下,用三种酶依次对牛奶进行水解,水解后的奶液对牛奶过敏者血清特异性IgE的抗原性最小,在可测定的范围内,几乎已经不表现出抗原性。经分析表明,牛奶中的几种主要的过敏原表位存在着上述实验用酶的识别位点,用蛋白酶水解时,酶分子对过敏原的表位进行攻击,破坏过敏原表位的结构,从而消弱或消除了牛奶蛋白的过敏原性。本实验利用建立的过敏性动物模型的血清,作为参照血清,对实验所用的过敏者血清的特异性进行了验证。结果表明,此例牛奶过敏者血清中的抗体,对牛奶中过敏原蛋白是特异性的,并且初步建立了利用牛奶过敏者血清对酶解后的牛奶中过敏原抗原性程度的ELISA检测。本实验通过动物模型,检测了几种细胞因子对机体免疫功能的调节作用。结果表明,豚鼠分别口服和注射抗原后,佐剂、干扰素、白介素-2可以提高体内特异性IgE和IgG的含量,白介素-11对体内特异性IgE和IgG有降低的效果。

关键词：牛奶过敏过敏原表位血清特异性IgE ELISA 蛋白质的酶解

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儿童与青少年牛奶致敏特征分析

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中华预防医学杂志 2021年第9期55卷 1077-1082页

作者：陈力嘉陈俊何思楠普晓瑜王晓艳王洪田王学艳首都医科大学附属北京世纪坛医院变态反应科北京100038 山东省滨州市中心医院皮肤性病科滨州251700 首都医科大学附属北京世纪坛医院耳鼻喉科北京100038

目的调查儿童及青少年人群牛奶过敏原致敏阳性率,探讨牛奶致敏的年龄、疾病分布特征和致敏特点。方法回顾性研究。本研究共纳入2018年6月至2020年11月就诊于北京世纪坛医院变态反应科门诊的818例疑诊食物过敏的未成年患者。采用ImmunoCA... 详细信息

目的调查儿童及青少年人群牛奶过敏原致敏阳性率,探讨牛奶致敏的年龄、疾病分布特征和致敏特点。方法回顾性研究。本研究共纳入2018年6月至2020年11月就诊于北京世纪坛医院变态反应科门诊的818例疑诊食物过敏的未成年患者。采用ImmunoCAP荧光酶联免疫法对患者血清进行牛奶sIgE检测,定义sIgE 1级为轻度致敏,2~3级为中度致敏,4~6级为重度致敏。并采用χ^(2)检验、独立样本t检验、单因素方差分析、Spearman相关性分析等统计学方法对牛奶致敏患者的年龄分布、临床症状及多重致敏特征进行回顾性分析。结果纳入研究的患者中,牛奶致敏率为25.7%(210/818)。0~3岁组婴幼儿患者牛奶致敏率为39.2%、牛奶sIgE水平[0.93(0.52,2.62)kU/L]、中重度致敏患者比例23.5%,均高于其他年龄组。牛奶致敏率及致敏程度随年龄增长呈逐渐下降趋势。牛奶致敏以皮肤过敏症状最常见(50.0%),其次是呼吸道(38.9%)和胃肠道症状(36.1%)。0~3岁组以皮肤症状最常见(47.3%),4~6岁和7~18岁组以呼吸系统症状多见(58.7%,56.0%)。中重度牛奶致敏患者的多重致敏率达74.1%,其中70.4%合并其他食物过敏原致敏,31.5%合并其他吸入性过敏原致敏。结论18岁以下人群中,婴幼儿患者牛奶致敏率高、致敏程度严重,随年龄增长逐渐减轻。牛奶致敏患者以皮肤过敏症状最常见。

关键词：牛奶过敏特异性免疫球蛋白E 致敏

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不同喂养方式对牛奶蛋白诱导食物蛋白性直肠结肠炎免疫耐受的影响

不同喂养方式对牛奶蛋白诱导食物蛋白性直肠结肠炎免疫耐受的影响

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作者：朱俐光重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨不同喂养方式对牛奶蛋白诱导食物蛋白性直肠结肠炎患儿远期免疫耐受结局的影响。方法:采用回顾性队列研究设计,以2015年1月1日至2016年12月31日重庆医科大学附属儿童医院消化科确诊并有效随访的牛奶蛋白诱导食物蛋白性直肠结... 详细信息

目的:探讨不同喂养方式对牛奶蛋白诱导食物蛋白性直肠结肠炎患儿远期免疫耐受结局的影响。方法:采用回顾性队列研究设计,以2015年1月1日至2016年12月31日重庆医科大学附属儿童医院消化科确诊并有效随访的牛奶蛋白诱导食物蛋白性直肠结肠炎患儿85例作为研究对象,根据喂养方式分为母乳组(n=18)、深度水解奶粉组(n=22)、氨基酸奶粉组(n=17)、母乳+深度水解奶粉组(n=17)、母乳+氨基酸奶粉组(n=7)、深度水解奶粉+氨基酸奶粉组(n=4),比较分析5年随访期内研究对象免疫耐受获得、后续过敏食物及过敏性疾病的情况。Logistic回归评估与晚期免疫耐受及发生其他过敏食物、疾病相关的儿童特征。结果:6组研究对象一般情况比较差异无统计学意义(P过敏食物、过敏疾病率比较差异无统计学意义(P过敏家族史(OR=6.497,95%CI:1.539～27.434,P=0.011)、血便(OR=4.685,95%CI:1.006～21.829,P=0.049)是患儿后续合并其他食物过敏的危险因素;血便(OR=0.107,95%CI:0.024～0.468,P=0.003)是患儿后续合并其他过敏性疾病的影响因素。结论:牛奶蛋白诱导食物蛋白性直肠结肠炎一般预后良好,不同喂养方式对远期耐受结局无明显影响,合并过敏家族史、血便症状较明显患儿后续合并其他过敏食物风险相对更高,无典型血便消化道症状患儿后续可能更容易合并累及其他系统的过敏性疾病。

关键词：牛奶过敏食物蛋白性直肠结肠炎免疫耐受喂养方式

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牛奶致敏原Casein真实表位介导免疫耐受及其调控生物钟机制研究

牛奶致敏原Casein真实表位介导免疫耐受及其调控生物钟机制研究

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作者：谢强浙江工商大学

学位级别：硕士

牛奶是世界公认的八大致敏原之一,牛奶过敏在婴幼儿人群中发病率极高。酪蛋白(Casein,CN)是牛奶中最丰富的蛋白,在食品工业中被作为原料广泛应用,但其致敏性亦不容忽视,而不同加工方式是否会影响CN致敏性尚缺乏系统性研究。另一方面,研... 详细信息

牛奶是世界公认的八大致敏原之一,牛奶过敏在婴幼儿人群中发病率极高。酪蛋白(Casein,CN)是牛奶中最丰富的蛋白,在食品工业中被作为原料广泛应用,但其致敏性亦不容忽视,而不同加工方式是否会影响CN致敏性尚缺乏系统性研究。另一方面,研究表明,牛奶过敏患者在夜间的睡眠质量下降,有频繁的翻身动作,但其机理尚未阐明。鉴于此,本研究以CN为对象,探究不同加工形式CN的致敏性差异,并对CN诱导的过敏反应影响机体生物节律的机制进行研究,以期为低敏性牛奶产品的开发以及牛奶过敏患者的生物钟紊乱研究提供理论依据。本研究主要内容如下:首先,通过模拟食品加工方式制备不同加工形式CN(Treated-CN,t-CN):分别为线性化CN(Linear-CN,L-CN)、交联化CN(Transglutaminase crosslinked-CN,TG-CN)和糖基化CN(Glycated-CN,Gly-CN)。在此基础上,通过SDS-PAGE、圆二色光谱、红外光谱和扫描电镜分别对t-CN的分子量大小、二级结构、化学基团和表面微观结构进行表征。其次,通过蛋白免疫印迹法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、肥大细胞脱颗粒和胃肠道模拟消化试验,进一步对t-CN的体外致敏性进行研究。结果表明,与未处理CN相比,t-CN的Ig E结合能力均显著下降,且Gly-CN下降程度最大。通过相关性分析,发现t-CN的Ig E结合能力与二级结构中α-螺旋和β折叠含量呈负相关,与无规则卷曲含量呈正相关。此外,胃肠道消化模拟结果表明Gly-CN具有显著更弱的消化稳定性。再者,通过建立CN致敏Balb/c小鼠模型,对t-CN体内致敏性进行表征。结果表明,与未处理CN相比,t-CN处理后的小鼠过敏症状评分显著下降;t-CN致敏小鼠血清中CN特异性抗体(Ig E、Ig G1和Ig E2a)和炎性细胞因子(IL-4)水平均被显著抑制,其中,Gly-CN的抑制效果最显著;t-CN,尤其是Gly-CN致敏小鼠体内Th2型细胞增殖分化能力被显著抑制,Th1型细胞增殖分化能力被显著促进。最后,在成功建立CN致敏小鼠模型的基础上,进一步对小鼠生物节律进行探究。我们发现褪黑素受体基因表达水平在小鼠肝脏、下丘脑、小肠部位显著下降,在大肠显著上升;通过位于褪黑素上游的生物钟核心基因和转录阻遏基因的测定,发现Per与Cry基因表达水平在小鼠下丘脑和小肠部位显著升高,在大肠部位显著降低,且BMAL1基因表达水平趋势和Per与Cry一致;通过免疫印迹法和免疫组化,发现BMAL1和CLOCK蛋白表达与基因表达结果完全一致。上述结果证明,CN致敏通过影响生物钟基因表达,干扰褪黑素生成,进而影响小鼠正常昼夜节律。

关键词：牛奶过敏食品加工酪蛋白生物钟 BMAL1

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