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中国畜牧兽医 2013年第5期40卷 165-172页

作者：韩猛立康立超钟发刚黄新谭鹏飞新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室新疆石河子832000

牛呼吸道疾病(BRD)是由多种病毒和细菌与外界环境相互作用而引起的一种严重的呼吸系统疾病,是引起舍饲牛发病和死亡的主要原因,给北美和世界养牛业造成巨大的经济损失。作者就引起BRD的主要细菌性病原体如溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆... 详细信息

牛呼吸道疾病(BRD)是由多种病毒和细菌与外界环境相互作用而引起的一种严重的呼吸系统疾病,是引起舍饲牛发病和死亡的主要原因,给北美和世界养牛业造成巨大的经济损失。作者就引起BRD的主要细菌性病原体如溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、昏睡嗜血杆菌、牛支原体及其他相关病原体和临床症状、病理学变化、饲养管理和治疗药物的选择等进行了阐述,以期为该病的治疗和防控提供参考。

关键词：细菌病原体牛呼吸道疾病综合症

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多杀性巴氏杆菌OmpH与溶血性曼氏杆菌lktA蛋白的融合表达与免疫原性研究

多杀性巴氏杆菌OmpH与溶血性曼氏杆菌lktA蛋白的融合表达与免疫原...

引用

作者：高佳滨黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

牛呼吸道疾病综合症（Bovine respiratory disease complex，BRDC）是牛的一种急性呼吸道疾病，目前国内外学者普遍认为它是由于环境的突然变化、应激、运输等多种因素引发的，每年给养牛业带来巨大损失。多杀性巴氏杆菌（Pasteurella m... 详细信息

牛呼吸道疾病综合症（Bovine respiratory disease complex，BRDC）是牛的一种急性呼吸道疾病，目前国内外学者普遍认为它是由于环境的突然变化、应激、运输等多种因素引发的，每年给养牛业带来巨大损失。多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）和溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica）是引起牛呼吸道疾病综合症（BRDC）的重要病原，还可引起牛的出血性败血症（Haemorrhagic Septicaemia）和纤维素性肺炎（Fibrinouspneumonia），给养牛业带来巨大损失。临床抗生素的滥用使得耐药菌株不断的出现，给临床治疗带来巨大困难。因此，疫苗接种有望成为预防和控制这两种病原感染的主要措施。研究表明OmpH是多杀性巴氏杆菌最主要的免疫原，可以刺激机体产生保护性抗体，能抵抗病原菌的挑战，白细胞毒素（LKT）是溶血性曼氏杆菌最重要的毒力因子，LKT的多克隆抗体能够对同源的其他血清型提供交叉保护。本研究拟通过大肠杆菌表达系统表达出具有生物学活性的***白细胞毒素蛋白（lktA）及lktA与*** OmpH的重组融合蛋白（lktA-OmpH），分别构建既能调节天然免疫，还能诱导获得性免疫的亚单位疫苗，通过实验研究分析融合蛋白lktA-OmpH与OmpH蛋白和lktA蛋白三者所激发和诱导的天然免疫应答与获得性免疫应答规律，以及各个蛋白对小鼠的免疫保护作用之间存在的差异，以论证融合蛋白lktA-OmpH是否具有既能抵抗多杀性巴氏杆菌又能抵抗溶血性曼氏杆菌的双重挑战，为牛呼吸道疾病综合症新型亚单位疫苗的研制提供新认识和新途径。首先，通过PCR的方法扩增溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica）的白细胞毒素合成基因lktA，扩增后连接到pMD18-T载体上，经双酶切和测序鉴定正确后克隆到pET28-a表达载体上，转化入大肠杆菌感受态BL-21(DE3)PlyS中，经IPTG诱导后，SDS-PAGE鉴定蛋白的表达及其生物学活性。其次，通过overlap PCR基因融合技术扩增融合基因lktA-OmpH，鉴定正确后克隆到表达载体pET28-a，转化到感受态BL-21(DE3)PLYS进行诱导表达，利用镍柱纯化技术纯化lktA蛋白和融合蛋白lktA-OmpH，并检测两种蛋白的生物学活性。最后，通过以小鼠作为动物模型，检测免疫小鼠后血清中的抗体、淋巴细胞增殖情况、INF-γ分泌状态以及细胞因子IL-4的含量，最后用溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌分别攻毒，进而评估融合蛋白与单个蛋白的免疫保护效果。结果，成功构建具有生物学活性的lktA蛋白和融合蛋白lktA-OmpH。小鼠实验结果表明，与对照组PBS相比，OmpH蛋白+佐剂组、lktA蛋白+佐剂组和lktA-OmpH+佐剂组的抗体消长曲线明显，差异显著（P牛牛呼吸道疾病综合症疫苗提供了一定的参考。

关键词：牛呼吸道疾病综合症溶血性曼氏杆菌多杀性巴氏杆菌 lktA蛋白融合蛋白疫苗

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