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内蒙古地区牛乳腺炎粪肠球菌临床分离株全基因组测序与生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2021年第12期16卷 1409-1413页

作者：邢家辉锡林高娃吴金花王赞嘉代牡兰布日额石竞楠内蒙古民族大学生命科学与食品学院内蒙古通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古通辽028043 内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所内蒙古通辽028043

目的对内蒙古地区奶牛乳腺炎临床分离粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的基因组进行测序,并预测和分析其生物信息学特征。方法本实验以“内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心”分离的粪肠球菌临床分离菌株FC(BME1708)为对象,... 详细信息

目的对内蒙古地区奶牛乳腺炎临床分离粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的基因组进行测序,并预测和分析其生物信息学特征。方法本实验以“内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心”分离的粪肠球菌临床分离菌株FC(BME1708)为对象,利用PacBio RS II平台进行全基因组测序,分别使用RNAmmer和tRNAscan-SE软件对菌株基因组中的rRNA和tRNA进行预测,并对测序基因序列进行数据分析、基因注释、耐药性及毒力因子分析。结果测序组装后结果显示,该菌株基因组大小为2934454 bp,其中包含5个双股环状质粒DNA、61个tRNA、12个rRNA,蛋白总数为3151个。耐药性及毒力因子基因预测结果显示,该菌株对庆大霉素、链霉素、β内酰胺、青霉素、四环素、万古霉素等27类抗生素耐药,存在cyl、esp、ace、gel、efaA等82个相关毒力因子。结论已将本次分离的粪肠球菌基因组测序结果登录于GenBank(登录号:CP028835.1),该实验结果将为后续致病及免疫调控机理研究,以及防控策略的制定提供了可靠的生物信息数据。

关键词：牛乳腺炎粪肠球菌全基因组测序

基于奶牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿rAP1-BP-AP2重组蛋白的间接ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2018年第7期40卷 611-615页

作者：朝洛蒙王金良布日额吴金花孙立杰锡林高娃陈金龙内蒙古民族大学动物科技学院内蒙古通辽028043 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 内蒙古民族大学生命科学学院内蒙古通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古通辽028043 内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所内蒙古通辽028043 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600

为建立一种快速准确高效的检测奶牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿抗原相应抗体的检测方法,本研究以牛乳腺炎无乳链球菌Ia型PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白AP1、AP2及骨架蛋白BP 3基因串联表达的重组蛋白为ELISA包被抗原,通过方阵滴定法优化反... 详细信息

为建立一种快速准确高效的检测奶牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿抗原相应抗体的检测方法,本研究以牛乳腺炎无乳链球菌Ia型PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白AP1、AP2及骨架蛋白BP 3基因串联表达的重组蛋白为ELISA包被抗原,通过方阵滴定法优化反应条件,建立了奶牛乳腺炎无乳链球菌抗体的间接ELISA检测方法。优化后抗原的最佳包被量为5.0μg/孔,血清样品最佳稀释倍数为1∶40,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶5 000。对***、***、***、***、***阳性血清进行检测结果显示,后4种阳性对照血清未出现阳性反应,表明该方法具有良好的特异性;对已知牛无乳链球菌阳性血清倍比稀释后进行检测时,当稀释倍数达到1:12 800时仍出现阳性结果,表明该方法具有较高的敏感度;重复性试验显示批内变异系数为2.41%~8.89%,批间试验变异系数为7.53%~10.46%;用该方法对426份临床样品进行奶牛无乳链球菌抗体检测,结果显示,其样品阳性检出率为45.07%。本研究首次基于乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿三联重组蛋白建立的间接ELISA方法为奶牛无乳链球菌的快速检测提供了一种准确、可靠的检测方法。

关键词：牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a 重组蛋白AP1-BP-AP2 ELISA

奶牛乳腺炎无乳链球菌Hly基因抗原表位的截短序列表达及抗原性研究

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中国病原生物学杂志 2018年第1期13卷 5-10页

作者：吴金花陈金龙锡林高娃王金良布日额于辰龙内蒙古民族大学生命科学学院内蒙古通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所山东绿都生物科技有限公司山东省滨州畜牧兽医研究院

目的截短克隆奶牛乳腺炎无乳链球菌溶血素(Hly)基因抗原优势区域,构建重组表达载体,实现原核细胞高效表达,进而对表达产物进行抗原性分析。方法根据GenBank公布的牛源无乳链球菌(CP018623.1)hly基因序列设计引物,以牛乳源性无乳链球菌1... 详细信息

目的截短克隆奶牛乳腺炎无乳链球菌溶血素(Hly)基因抗原优势区域,构建重组表达载体,实现原核细胞高效表达,进而对表达产物进行抗原性分析。方法根据GenBank公布的牛源无乳链球菌(CP018623.1)hly基因序列设计引物,以牛乳源性无乳链球菌1886菌株基因组DNA为模板,PCR扩增hly基因片段,构建重组质粒pET-30a-hly并转化至***/BL21(DE3)中,经IPTG诱导高效表达后,并进行SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定。表达产物纯化后经水溶性501佐剂乳化,免疫昆明小白鼠,采用间接ELISA法测定血清抗体滴度。结果成功克隆奶牛乳腺炎无乳链球菌1886菌株hly基因,其碱基长度513bp,编码171个氨基酸殘基,与GenBank公布的牛源无乳链球菌(CP018623.1)Hly基因核苷酸序列及其编码氨基酸序列相似性为100%。重组质粒表达的重组蛋白分子质量单位约为30×103,纯化蛋白含量为1.2mg/ml。Western blot检测重组蛋白可被相应抗体识别。ELISA检测重组蛋白免疫小鼠血清抗体滴度为1∶25 600。结论内蒙古分离株无乳链球菌Ia型hly基因抗原优势序列编码多肽具有良好的抗原性,可以作为候选免疫抗原,为研究其致病机制及新型疫苗奠设计奠定了基础。

关键词：牛乳腺炎无乳链球菌溶血素抗原性

益生菌缓解金黄色葡萄球菌感染牛乳腺炎的研究与应用进展

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中国乳品工业 2024年第1期52卷 33-39页

作者：朱妍刘慧燕闫丹丽赵春光滕政蓉张英刘晓燕方海田武俊瑞沈阳农业大学食品学院辽宁省食品发酵技术工程研究中心沈阳市微生物发酵技术创新重点实验室沈阳110866 宁夏食品微生物应用技术与安全控制重点实验室宁夏大学食品与葡萄酒学院银川750021 宁夏伊品生物科技股份有限公司银川750001

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S. aureus)感染牛乳腺引发炎症。研究表明益生菌对缓解牛乳腺炎有一定作用,且相对于抗生素更加安全。本文对S. aureus的致病机理、益生菌在牛乳腺炎中的作用机制及应用等进行了综述。明确S. aureu... 详细信息

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S. aureus)感染牛乳腺引发炎症。研究表明益生菌对缓解牛乳腺炎有一定作用,且相对于抗生素更加安全。本文对S. aureus的致病机理、益生菌在牛乳腺炎中的作用机制及应用等进行了综述。明确S. aureus通过释放毒力因子,其中黏蛋白帮助病原菌定植细胞表面同时大量S. aureus生成生物膜破坏细胞结构引发“细胞因子风暴”,干扰机体免疫系统识别。S. aureus入侵牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,bMEC)后激活信号通路以及相关蛋白的表达,通过分析其入侵乳腺上皮细胞后能够破坏上皮细胞屏障,干扰机体免疫系统3个方面说明S. aureus能够在bMEC存活的干扰因素。并且从益生菌角度总结已有发现益生菌在体内定植可增强肠道完整性、抑制病原菌的生长,提高机体免疫力从而抑制S. aureus对bMEC的黏附和侵染,降低S. aureus生物膜的形成,以减少S. aureus在乳腺内的定植,从而起到减轻乳腺感染效果。

关键词：金黄色葡萄球菌牛乳腺炎益生菌发病机制机体免疫

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乳酸菌与牛乳腺炎的相关性研究及应用

中国兽医学报 2018年第11期38卷 2227-2233页

作者：姚国强张和平内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室/国家奶牛产业技术体系乳制品加工实验室

牛乳腺炎通常由病原菌微生物导致,是造成牧场损失最严重的疾病。临床上多采用抗生素方法治疗乳腺炎,但存在产生细菌耐药性、食品及生态安全等诸多弊端,且复发率较高。乳酸菌具有抑制病原菌、改善微生态环境和提高机体免疫力等优势,利用... 详细信息

牛乳腺炎通常由病原菌微生物导致,是造成牧场损失最严重的疾病。临床上多采用抗生素方法治疗乳腺炎,但存在产生细菌耐药性、食品及生态安全等诸多弊端,且复发率较高。乳酸菌具有抑制病原菌、改善微生态环境和提高机体免疫力等优势,利用乳酸菌微生态制剂替代抗生素,用于奶牛健康养殖具有研究和应用价值。本研究对乳酸菌在牛乳腺炎中的生物多样性、作用机理和应用情况等方面做了论述,以期为今后研究乳酸菌防治牛乳腺炎提供借鉴。

关键词：乳酸菌牛乳腺炎研究应用

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌临床分离株生化特性与菌体蛋白免疫原性分析

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农业生物技术学报 2006年第6期14卷 970-975页

作者：钟辉姚火春南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是奶牛乳腺炎的最主要致病菌之一。从53株金黄色葡萄球菌乳样分离株中挑选了培养特性和形态典型的6株进行生化和传代稳定性试验,研究了6株菌的凝固酶、溶血素等致病性因子和耐药性。对菌体裂解产... 详细信息

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是奶牛乳腺炎的最主要致病菌之一。从53株金黄色葡萄球菌乳样分离株中挑选了培养特性和形态典型的6株进行生化和传代稳定性试验,研究了6株菌的凝固酶、溶血素等致病性因子和耐药性。对菌体裂解产物进行蛋白凝胶电泳分析发现,6株菌体蛋白电泳条带具有很高的相似性,其中TQ-1株电泳蛋白条带密度较其它几株高。用其中4株生化特性典型、传代稳定和致病因子较多的菌株免疫兔,制备高免血清,分析全菌抗原的蛋白转印图谱,发现XG-2株在52kD处有特异蛋白条带。综合以上结果,确定以TQ-1和XG-2株为疫苗候选株。以TQ-1和XG-2株为疫苗株,按常规方法制备金黄色葡萄球菌灭活疫苗,在鼠关节炎模型中进行攻毒保护试验,证实了以这两株菌制备的疫苗接种小鼠可有效地抵抗同源和异源金黄色葡萄球菌的攻击。

关键词：金黄色葡萄球菌致病因子牛乳腺炎

奶牛乳腺炎粪肠球菌溶血素cylA基因逃逸奶牛巨噬细胞完全吞噬功能的分子机制研究

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奶牛乳腺炎粪肠球菌溶血素cylA基因逃逸奶牛巨噬细胞完全吞噬功能...

作者：王赞嘉内蒙古民族大学

学位级别：硕士

本实验为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cylA基因对牛巨噬细胞吞噬功能和免疫调节的分子机制。利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株及cylA基因缺失突变株对牛巨噬细胞进行侵染。利用MTT检测法检测细胞活性,在明确细胞活性不受影响... 详细信息

本实验为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cylA基因对牛巨噬细胞吞噬功能和免疫调节的分子机制。利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株及cylA基因缺失突变株对牛巨噬细胞进行侵染。利用MTT检测法检测细胞活性,在明确细胞活性不受影响的条件下,进行下列检测。提取被侵染的巨噬细胞总m RNA,利用RT-qPCR手段检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12和TNF-α,以及NOS2的转录水平差异。利用ELISA方法检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12和TNF-α的表达情况。利用Western blot检测牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对p38 MAPK信号通路的磷酸化水平,以明确其调控该信号通路的分子机制。在侵染实验前加入p38 MAPK信号通路抑制剂孵育巨噬细胞后,进行侵染实验,利用ELISA方法检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12和TNF-α的表达情况,以研究p38 MAPK信号通路抑制剂对细胞因子表达的影响。经过RT-qPCR检测结果发现,与cylA基因敲除菌株组相比,cylA阳性的粪肠球菌野生型菌株组在IL-10和TNF-α转录水平上调,IL-4、IL-8、IL-12以及NOS2转录水平下调,并且均具有统计学意义。ELISA结果与RT-qPCR基本一致,其中TNF-α的表达水平提高,但是不具有统计学意义。Western blot检测p38 MAPK磷酸化水平,与cylA阳性的粪肠球菌野生型菌株组相比,cylA基因敲除菌株组p-p38的表达量降低,并且差异极显著。在加入p38 MAPK抑制剂后,ELISA结果显示与不添加p38MAPK抑制剂组相比,添加p38 MAPK抑制剂组的IL-10、TNF-α的表达量降低,IL-4、IL-8、IL-12的表达水平提高,并且具有统计学意义。根据上述结果表明,p38 MAPK信号通路为粪肠球菌β溶血素cylA基因发挥免疫调节机制的重要通路,该结论为奶牛乳腺炎的治疗及防控提供新的靶位,为通过其毒力的钝化以及对p38 MAPK信号通路进行识别及信号通路封闭,对粪肠球菌感染进行有效防控,为解决由粪肠球菌引起的乳源安全问题提供新的科学思路。

关键词：牛乳腺炎粪肠球菌溶血素cylA基因细胞因子 p38MAPK

牛乳腺炎粪肠球菌逃逸巨噬细胞的分子机制研究

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内蒙古民族大学学报（自然科学版） 2024年第6期39卷 90-96页

作者：王赞嘉锡林高娃吴金花布日额石竞楠代牡兰内蒙古民族大学生命科学与食品学院内蒙古通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古通辽028043 内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所内蒙古通辽028043

为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cylA基因对牛单核巨噬细胞(BMC-7)吞噬功能和免疫调节的分子机制,利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株(BME1708)及cylA基因缺失突变株(BME1708△cylA)对牛巨噬细胞进行侵染,利用MTT检测法检测细胞... 详细信息

为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cylA基因对牛单核巨噬细胞(BMC-7)吞噬功能和免疫调节的分子机制,利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株(BME1708)及cylA基因缺失突变株(BME1708△cylA)对牛巨噬细胞进行侵染,利用MTT检测法检测细胞活性;在明确细胞活性不受影响的条件下,提取被侵染的BMC-7总mRNA,利用RT-qPCR检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α以及NOS2的转录水平差异,采用ELISA法检测相应表达水平;利用Western blot检测牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对BMC-7的p38 MAPK信号通路磷酸化水平的影响;利用p38 MAPK信号通路抑制剂(PD 169316)孵育BMC-7,ELISA法检测相应细胞因子表达水平,以明确cylA基因调控该信号通路的分子机制。结果显示:与BME1708组相比,BME1708△cylA组在IL-10和TNF-α转录水平下调,IL-4、IL-8、IL-12以及NOS2转录水平上调,差异均具有统计学意义(P牛乳腺炎的治疗及防控提供新的靶位,可通过其毒力的钝化以及对p38 MAPK信号通路进行识别及信号通路封闭,对粪肠球菌感染进行有效防控。

关键词：牛乳腺炎粪肠球菌溶血素cylA基因细胞因子 p38 MAPK

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与牛乳腺炎关联的快速生长的分枝杆菌

动物医学进展 1983年第1期 27-28页

作者：吴信法

引起牛乳腺炎的非结核性分枝杆菌包括意外分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum),耻垢分枝杆菌,牝牛分枝杆菌(***)及牛草分枝杆菌。这些感染可能是由于乳腺内应用的油基抗菌素注射剂与洗必泰(Chlorhexidine)消毒药,以及卫生情况不良所致。

关键词：分枝杆菌快速生长牛乳腺炎奴卡氏菌