检索结果-南通市图书馆

贵州省牛乳头瘤病毒流行株基因分型及其L1基因表达研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

贵州省牛乳头瘤病毒流行株基因分型及其L1基因表达研究

作者：张海贵州大学

学位级别：硕士

牛乳头瘤(Bovine Papillomatosis,BP)是由牛乳头瘤病毒(Bovine papillama-virus,BPV)引起牛的一种以体表或部分黏膜慢性增生性肿瘤为特征的疾病,在世界各地均有报道。目前,BPV可分为14个基因型,还有众多未被分类的假定基因型。不同基因... 详细信息

牛乳头瘤(Bovine Papillomatosis,BP)是由牛乳头瘤病毒(Bovine papillama-virus,BPV)引起牛的一种以体表或部分黏膜慢性增生性肿瘤为特征的疾病,在世界各地均有报道。目前,BPV可分为14个基因型,还有众多未被分类的假定基因型。不同基因型BPV可引起不同部位的病理变化,且BPV具有很强的种属特异性,很难感染除宿主以外的其他动物。近年来,贵州省大力发展养牛业,不断从国内外引进优良的品种牛,牛养殖规模不断扩大。2015年镇宁县某养牛场发生了疑似牛乳头瘤病病例。为了解牛乳头瘤病毒在贵州省的流行情况,本实验开展了贵州省牛乳头瘤病毒病原学感染情况调查、BPV贵州流行株基因分型与BPV1贵州株全基因组测序,并对其L1基因进行生物信息学分析和原核与真核表达研究,以期为牛乳头瘤病诊断试剂和疫苗的研制奠定基础。1.贵州地区牛乳头瘤病毒感染情况调查及基因分型为了弄清贵州地区养牛场BPV感染情况及其病毒基因型,本研究采用发病情况调查、临床症状观察、病理切片观察、PCR检测和分子分型等方法,对贵州省发病养牛场32份疑似牛乳头瘤病例进行感染情况调查及基因分型,结果显示:患病牛的体表瘤体多呈结节状或菜花状,颜色多呈灰白色;组织病理学观察可见瘤体呈现角质化过度和细胞空泡化现象;在32份疑似病料中均可检测出BPV,其中检出BPV1有2份(占6.25%)、检出BPV2为28份(占87.50%)和检出BPV13有2份(占6.25%)。由此可见,在疑似牛乳头瘤病例中均有BPV感染,其中BPV2为贵州地区牛感染的主要基因型。2.牛乳头瘤病毒1型贵州株全基组克隆及相关序列分析为了解BPV1贵州株全基因组结构特征及遗传变异情况,本研究根据Gen Bank上BPV1参考株设计7对特异性引物,以贵州六枝患病牛皮肤肿瘤DNA提取物为模板进行PCR扩增、克隆与测序和拼接分析,结果显示:7对引物均可扩增出相应的DNA片段,其大小分别为1248 bp、1461 bp、846 bp、817 bp、1475 bp、1488 bp和985 bp;经拼接获得BPV1贵州株全基因组大小为7946 bp,A+T含量为54.73%,G+C含量为45.27%,包括E6、E7、E1、E2、E4、E5、L2和L1 8个开放阅读框,具有典型的BPV1基因组结构特征;进化树分析显示其与BPV2、BPV13和BPV14进化关系较近。3.牛乳头瘤病毒1型贵州株L1基因生物信息学分析为了解牛乳头瘤病毒1型贵州株L1基因分子特征和预测编码蛋白生物学功能,本研究选取BPV1贵州株L1基因序列,应用生物信息学相关软件及方法进行分析,结果显示:BPV1贵州株与BPV1参考株的核苷酸和氨基酸同源性最高,分别为99.8%和100%;与BPV2、BPV13和BPV14参考株的核苷酸和氨基酸序列同源性较高,分别为84.3%、85.5%、73.4%和92.1%、92.7%、80.6%;与BPV2、BPV13、BPV14同属于Delta属;经预测,BPV1贵州株L1基因编码蛋白二级结构以无规则卷曲、β-折叠和α-螺旋区域为主,存在多个抗原表位,无跨膜区域和信号肽区域,是一种非分泌蛋白。这些研究结果为BPV1 L1基因的表达研究提供理论依据。4.牛乳头瘤病毒1型贵州株L1衣壳蛋白表达研究为了解BPV1贵州株L1基因在原核细胞和真核细胞中的表达情况,本研究首先将L1基因连接入p Cold I载体,转化至BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE与Western Blotting进行反应原性鉴定;然后将L1基因克隆入p EGFP-C1,转染MDBK细胞,通过荧光显微镜观察和Western Blotting鉴定;原核表达产物经His-tag镍柱亲和层析法纯化,免疫家兔制备多克隆抗体,结果显示:L1基因能在原核细胞上得到良好的表达,表达产物的分子质量约为55.6 k D,且以包涵体形式存在,表达蛋白能与His标签抗体发生特异性反应;L1基因真核表达质粒转染MDBK细胞后,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,且该真核表达产物能与GFP标签抗体发生特异性反应;家兔制备的多克隆抗体能与L1基因表达产物发生特异性结合。这些结果为探索以BPV1 L1基因为靶标开展BP基因免疫研究奠定了坚实的基础数据。综上所述,本研究首次证实了贵州地区牛存在BPV感染并确定其基因型,获得BPV1贵州株全基因组序列,构建了BPV1 L1基因的原核表达质粒p Cold I-BPV1-L1和真核表达质粒p EGFP-BPV1-L1并成功表达,且获得了兔抗BPV1 L1多克隆抗体。

关键词：牛乳头瘤病毒基因分型 L1基因表达贵州

新疆北疆地区牛乳头瘤病毒流行株基因分型及其衣壳蛋白表达研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

新疆北疆地区牛乳头瘤病毒流行株基因分型及其衣壳蛋白表达研究

作者：贺志昊石河子大学

学位级别：硕士

牛乳头状瘤是由牛乳头瘤病毒（Bovine papillomavirus，BPV）所引起的一种牛体表或部分黏膜发生慢性增生性肿瘤病，世界各地均有该病的发生，因损害皮革质量和降低动物体质而给养牛业造成较大的经济损失。根据BPV L1蛋白基因序列，至今... 详细信息

牛乳头状瘤是由牛乳头瘤病毒（Bovine papillomavirus，BPV）所引起的一种牛体表或部分黏膜发生慢性增生性肿瘤病，世界各地均有该病的发生，因损害皮革质量和降低动物体质而给养牛业造成较大的经济损失。根据BPV L1蛋白基因序列，至今已被鉴定的BPV基因型有13种，还有很多未分类的假定基因型。目前，尚无有效疫苗来预防牛乳头瘤病的发生。新疆是中国五大牧区之一，奶牛存栏数达280万头左右，疑似BPV感染的病例在规模化奶牛场中时常发生，然而至今尚无关于奶牛感染BPV基因分型及其疫苗的研究报道，因此开展新疆地区牛感染BPV的基因分型及BPV疫苗研究具有十分重要的意义。为了弄清新疆北疆地区牛感染BPV的基因型，本研究对新疆北疆地区牛乳头状瘤疑似病料进行了病理组织学检查和PCR检测，并对新疆北疆BPV流行株进行了基因分型。对BPV新疆流行株全基因组进行克隆。将BPV2衣壳蛋白L1基因克隆入原核表达载体pGEX4T-1以及真核表达载体pcDNA3.1(+)中，分别在大肠杆菌表达系统以及BHK-21细胞中诱导表达，对原核表达的重组蛋白进行Western blot鉴定，对真核表达的重组蛋白进行间接免疫荧光检测。本研究首次对新疆北疆地区BPV流行株进行了基因分型，表达了BPV2L1蛋白，为牛乳头瘤病的诊断试剂和疫苗研发奠定了前期基础。研究方法和主要结果如下：1.新疆北疆地区牛乳头瘤病毒的检测及基因分型研究为弄清新疆北疆地区（昌吉、石河子、塔城、伊犁）牛感染BPV的基因型，根据乳头瘤病毒衣壳蛋白L1基因的保守序列设计的简并引物FAP59/FAP64，利用该引物对56份牛乳头状瘤疑似病料进行了病理组织学检查和PCR检测。通过测序、序列比对及遗传进化分析，完成了BPV新疆流行株的基因分型。结果显示，新疆北疆地区56份患病牛皮肤乳头状肿瘤样本中，检测出BPV1、BPV2、BPV3、BPV7、BPV8及一种新型的BPV（BPV/CHI-SW1）。其中37份皮肤肿瘤样本感染BPV1（66.07%），53份皮肤肿瘤样本感染BPV2（94.64%），8份皮肤肿瘤样本感染BPV3（14.29%），5份皮肤肿瘤样本感染BPV7（8.93%），23份皮肤肿瘤样本感染BPV8（41.07%），1份皮肤肿瘤样本感染BPVCHI-SW1（1.79%）。BPV2为北疆地区牛感染的主要基因型。2. BPV2新疆流行株全基因组的克隆及序列分析设计6对BPV2基因型特异性引物，经扩增、测序、拼接、比对后获得BPV2-SW01全基因组序列。该毒株基因组全长7944bp，包括E6、E7、E1、E8、E2、E4、E3、E5、L2、L1共10个开放阅读框（ORF）。遗传进化树分析显示，BPV2-SW01归于Delta乳头瘤病毒属，与BPV-1、BPV-13进化关系最近。3. BPV2新疆流行株L1基因的原核表达研究采用PCR方法从奶牛皮肤肿瘤病料中扩增BPV2新疆流行株L1基因，克隆后测序，并将L1基因亚克隆入原核表达质粒pGEX4T-1中，用IPTG诱导L1蛋白表达，并对重组蛋白进行SDS-PAGE和Westernblot分析。SDS-PAGE分析显示，诱导后能够表达分子量80KD的重组蛋白;Westernblot显示该蛋白可与抗BPV2多克隆抗体发生免疫反应，证实其具有良好的反应原性。4. BPV2新疆流行株L1基因在真核细胞中的表达初步研究采用PCR方法从奶牛皮肤肿瘤病料中扩增BPV2新疆流行株L1基因，以pcDNA3.1(+)为真核表达载体构建重组表达质粒，转染入BHK-21细胞，通过间接荧光免疫试验检测BPV2-L1蛋白的表达。本研究成功构建pcDNA3.1(+)-BPV2-L1重组真核表达质粒，证实能表达出BPV2-L1蛋白，为BPV2DNA疫苗研发提供了前期基础。

关键词：牛乳头瘤病毒基因分型衣壳蛋白L1基因重组表达北疆地区

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

智利进口种牛乳头瘤病毒的检测与分析

中国动物检疫 2017年第5期34卷 47-49,53页

作者：王昱唐昌杰肖红波聂福平马飞杨俊陈冉越吴蕊重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心重庆400044 武隆县畜牧兽医局重庆武隆408528 唐山出入境检验检疫局河北唐山063000

通过临床观察、采样、PCR检测、克隆和测序,对智利进口种牛进行了牛乳头瘤病毒(BPV)检测和基因分型。结果表明,智利进口牛的BPV总体感染率为0.4%,病毒亚型有BPV2和BPV13,其中以BPV2为主,BPV13的感染率仅为0.09%。L基因进化分析表明,BPV... 详细信息

通过临床观察、采样、PCR检测、克隆和测序,对智利进口种牛进行了牛乳头瘤病毒(BPV)检测和基因分型。结果表明,智利进口牛的BPV总体感染率为0.4%,病毒亚型有BPV2和BPV13,其中以BPV2为主,BPV13的感染率仅为0.09%。L基因进化分析表明,BPV智利株和我国BPV的感染情况显著不同,呈现明显的地域特征,两国的BPV2 L1基因具有较高的同源性。BPV阳性牛的治疗结果显示,75%左右的阳性牛经外科剪切、抗生素治疗后愈合良好,但仍有部分牛出现新的小疣。调查结果提示:BPV感染并非全为一过性感染;BPV13亚型仍为我国外来亚型,仍需进出口检验检疫部门加强对BPV的检疫。

关键词：牛乳头瘤病毒智利进口奶牛检测与分析

博宁霉素霜剂对牛乳头瘤病毒所致奶牛乳头瘤的疗效观察

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国抗生素杂志 2003年第9期28卷 568-570页

作者：齐长明许鸿章陈汝贤中国农业大学动物医学院北京100094 中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050

目的　观察博宁霉素霜剂对牛乳头瘤病毒所致奶牛乳头瘤的疗效。方法　将临床患病牛随机分为 2组每次将药物和基质分别涂于试验牛及对照牛乳头皮肤的肿瘤上 ,每日 3次 ,连续进行 10 d。结果　试验组 2例指状乳头状瘤分别于第 6天和第 9... 详细信息

目的　观察博宁霉素霜剂对牛乳头瘤病毒所致奶牛乳头瘤的疗效。方法　将临床患病牛随机分为 2组每次将药物和基质分别涂于试验牛及对照牛乳头皮肤的肿瘤上 ,每日 3次 ,连续进行 10 d。结果　试验组 2例指状乳头状瘤分别于第 6天和第 9天完全脱落 ;4例扁平瘤虽未脱落 ,但瘤体表面均发生明显的剥蚀 ;对照组均未发生此类现象。结论　博宁霉素霜剂对奶牛乳头的皮肤无损害作用 ,但可选择性地使指状乳头瘤脱落 ,扁平瘤剥蚀、脱皮 ,呈现良好的治疗作用。

关键词：博宁霉素牛乳头瘤病毒乳头瘤疗效

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

新疆南疆牛乳头状瘤病毒鉴定与基因分型

畜牧与兽医 2015年第11期47卷 99-103页

作者：王青青石长青胡建军刘黎黄耀杰徐建平黄忠武焦海宏张婉琪努尔阿丽亚.马木提新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室/塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300 新疆和田地区畜牧技术推广中心新疆和田848000 新疆生产建设兵团第一师兽医站新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团第二师畜牧兽医工作站新疆库尔勒841000 新疆阿克苏地区库车县兽医站新疆阿克苏842000

为探究新疆南疆某奶牛场疑似感染牛乳头状瘤病及病毒基因型,本试验采取牛皮肤病变肿瘤样组织,进行组织病理学检查,并提取病料DNA,以乳头状瘤病毒(bovine papillomavirus,BPV)L1基因简并引物和通用引物(FAP59/FAP64和MY11/MY09)进行PCR... 详细信息

为探究新疆南疆某奶牛场疑似感染牛乳头状瘤病及病毒基因型,本试验采取牛皮肤病变肿瘤样组织,进行组织病理学检查,并提取病料DNA,以乳头状瘤病毒(bovine papillomavirus,BPV)L1基因简并引物和通用引物(FAP59/FAP64和MY11/MY09)进行PCR扩增、测序、序列分析及遗传进化树构建。测序结果表明:新疆南疆Aks-01株与Gen Bank收录的BPV-2基因型参考株核苷酸序列比较,核苷酸同源性可达95%,为BPV-2基因型;与BPV-1、BPV-13基因型参考株遗传进化关系最近,同属Delta属。结合临床症状、组织病理学检查,确定该奶牛场牛乳头瘤由BPV-2基因型感染引起。

关键词：牛乳头瘤病毒基因型序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

牛乳头状瘤病的防治

中国畜牧业 2021年第16期 66-66页

作者：李月福闫文军甘肃省天祝藏族自治县打柴沟镇农业综合服务中心

牛乳头状瘤病是由牛乳头瘤病毒引起牛的一种良性肿瘤,是慢性的皮肤增生性疾病。与其他家畜相比,乳头瘤在牛群中较为常见。不同日龄的牛均会感染,一岁内牛发生频率较高。牛乳头瘤病毒有10种可以鉴别的病毒型,另外还有一些类型已经被建议... 详细信息

牛乳头状瘤病是由牛乳头瘤病毒引起牛的一种良性肿瘤,是慢性的皮肤增生性疾病。与其他家畜相比,乳头瘤在牛群中较为常见。不同日龄的牛均会感染,一岁内牛发生频率较高。牛乳头瘤病毒有10种可以鉴别的病毒型,另外还有一些类型已经被建议加入其中。牛乳头瘤病毒1型和2型属于δ乳头瘤病毒属,具有较宽的宿主范围和组织嗜性,在牛中可引起纤维乳头状瘤,在马中可引起结节病。牛乳头瘤病毒3、4、6、9和10型属于ξ乳头瘤病毒属,仅可感染牛,并且只感染牛上皮细胞,诱导产生确实的乳头瘤。牛乳头瘤病毒5型和8型是e乳头瘤病毒属成员,可引起纤维乳头状瘤和确实的乳头瘤。目前,牛乳头瘤病毒还没有分类,许多牛乳头瘤病毒的生物学性质,有待进一步补充确定。

关键词：乳头状瘤牛乳头瘤病毒组织嗜性牛群生物学性质乳头瘤病毒型增生性疾病

以减毒沙门氏菌携带BPV1-L2表达质粒诱导HPV中和性抗体的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

以减毒沙门氏菌携带BPV1-L2表达质粒诱导HPV中和性抗体的研究

作者：许多吉林大学

学位级别：硕士

目的:以减毒沙门氏菌携带BPV1-L2（牛乳头状瘤病毒1型-L2抗原）表达质粒,滴鼻粘膜免疫小鼠后,观察小鼠血清及阴道冲洗液中抗HPV16-L1及HPV18-L1抗体产生的情况。以期证实BPV1-L2单一抗原免疫,可建立对多种型别人乳头状瘤病毒的交叉免疫... 详细信息

目的:以减毒沙门氏菌携带BPV1-L2（牛乳头状瘤病毒1型-L2抗原）表达质粒,滴鼻粘膜免疫小鼠后,观察小鼠血清及阴道冲洗液中抗HPV16-L1及HPV18-L1抗体产生的情况。以期证实BPV1-L2单一抗原免疫,可建立对多种型别人乳头状瘤病毒的交叉免疫应答。方法:从牛皮肤赘生物组织基因组DNA中,钓取目的基因BPV1-L2,连接至pMD-18T质粒,经双酶切及测序鉴定正确后,构建原核表达质粒pET28a-BPV1-L2,将重组质粒转化至感受态大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白。以pET28a-BPV1-L2质粒为模板,扩增BPV1-L2基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1-BPV1-L2,将重组质粒转染至Vero细胞,SDS-PAGE检测目的蛋白。将pcDNA3.1-BPV1-L2质粒电转化至减毒沙门氏菌Ty21a和PhoP/PhoQ,于第0、7、21天经滴鼻免疫雌性BalB/c小鼠,于第28天收集小鼠血清及阴道冲洗液,应用Western bloting、细胞免疫荧光染色和ELISA方法检测血清及阴道冲洗液中抗BPV1-L2抗体、抗HPV16-L1抗体和抗HPV18-L1抗体。ELISA方法检测小鼠血清中IL-2和IFN-γ含量。结果:成功构建原核表达质粒pET28a-BPV1-L2及真核表达质粒pcDNA3.1-BPV1-L2;免疫细胞荧光染色、Western bloting结果显示,免疫血清中含有抗HPV16-L1（人乳头状瘤病毒16型L1抗原）的抗体,ELISA检测到血清及阴道冲洗物中抗HPV16-L1、HPV18-L1（人乳头状瘤病毒18型L1抗原）的抗体,及血清中细胞因子IL-2、INF-γ,表明以减毒沙门氏菌携带BPV1-L2表达质粒可激活小鼠的免疫应答,并诱导小鼠产生抗HPV中和性抗体。结论:减毒沙门氏菌可作为抗原的运载体携带其他免疫抗原,经粘膜免疫后,能激活机体对异源抗原特异性免疫应答,其自身还具有CpG佐剂效应,加强机体的保护性免疫应答。本实验证实,以牛乳头状瘤病毒L2单一抗原产生的免疫应答,可以产生针对两个型别（HPV16及HPV18）人乳头状瘤病毒的交叉免疫应答。

关键词：预防性疫苗人乳头瘤病毒减毒沙门氏菌牛乳头瘤病毒

用BPV转化灶做选择标记表达HBsAg的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国医学科学院学报 1989年第5期11卷 373-375页

作者：温晓燕中国预防医学科学院病毒学研究所

作者构建了pBMTHBR2质粒,此质粒含有鼠MT启动子、完整的HBsAg基因(preS和S基因)、SV_(40)的拼接信号和完整的BPV基因组。用磷酸钙沉淀技术把此质粒导入鼠C_(127)细胞内,用BPV转化灶做标记,获得了转化细胞克隆。实验表明,57%的克隆细胞... 详细信息

作者构建了pBMTHBR2质粒,此质粒含有鼠MT启动子、完整的HBsAg基因(preS和S基因)、SV_(40)的拼接信号和完整的BPV基因组。用磷酸钙沉淀技术把此质粒导入鼠C_(127)细胞内,用BPV转化灶做标记,获得了转化细胞克隆。实验表明,57%的克隆细胞系均能分泌HBsAg。

关键词： HBsAg 基因表达牛乳头瘤病毒

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人IL-4真核细胞表达载体的构建与分析

中国实验血液学杂志 1993年第2期1卷 155-158页

作者：王志华田长富刘理谭玉英森寿谷口维绍哈尔滨医科大学肿瘤研究所哈尔滨150040 日本大阪大学细胞与分子生物学研究所基因研究室

本研究应用牛乳头瘤病毒质粒(BPV-1)构建了一个表达载体pdBHhIL—4。该载体应用SV40启动子,可以有效地启动外源基因的表达,保留了BPV-1的氨基苄青霉素抗性(Amp^R)基因作为筛选标志,经限制性内切酶和Southern杂交分折提示构建是成功的,... 详细信息

本研究应用牛乳头瘤病毒质粒(BPV-1)构建了一个表达载体pdBHhIL—4。该载体应用SV40启动子,可以有效地启动外源基因的表达,保留了BPV-1的氨基苄青霉素抗性(Amp^R)基因作为筛选标志,经限制性内切酶和Southern杂交分折提示构建是成功的,新的载体不仅促进了IL—4转化和表达,也为其它真核基因在真核细胞的表达提供了工具。

关键词：牛乳头瘤病毒启动子载体白细胞介素4