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牙鲆注射免疫鳗弧菌灭活疫苗后13种免疫相关基因表达的变化

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中国海洋大学学报（自然科学版） 2016年第2期46卷 42-53页

作者：薛洁宋晓青邢婧战文斌中国海洋大学水产动物病害与免疫学研究室山东青岛266003

为制备鳗弧菌（Vibrio anguillarum）全菌灭活疫苗,采用腹腔注射的方式免疫牙鲆（Paralichthys olivaceus）。于免疫后0、4、8、12、24、48、72、96h和7、14d取脾、头肾、鳃组织,提取mRNA,应用实时荧光定量PCR法检测3个组织中Toll-like... 详细信息

为制备鳗弧菌（Vibrio anguillarum）全菌灭活疫苗,采用腹腔注射的方式免疫牙鲆（Paralichthys olivaceus）。于免疫后0、4、8、12、24、48、72、96h和7、14d取脾、头肾、鳃组织,提取mRNA,应用实时荧光定量PCR法检测3个组织中Toll-like受体（TLR）2、TLR5M、髓样分化因子MyD88、核转录因子（NF）-κB、白介素（IL）-6、干扰素（IFN）γ、趋化因子CXC、补体C3、C型溶菌酶（C-Lyz）、热休克蛋白（Hsp）-70、主要组织相容性复合体MHC II、T细胞表面受体CD4和膜结合型免疫球蛋白（mIg）D这13种免疫相关基因的表达。研究显示：注射免疫后,3个组织中,除了mIgD和TLR5M基因,其余11种基因与对照组相比均呈上调表达,上调表达高峰均在12~72h,基因表达量最高值是对照组的2~30倍;mIgD基因的表达显著下调或无显著差异,基因表达量最低值出现在8~12h,最低值是对照组的0.02~0.2倍;TLR5M基因的表达无显著变化。在头肾和脾脏组织中,除了TLR5M、CXC、C-Lyz和mIgD 4个基因其余9个基因的表达量显著高于鳃组织,且表达量最大值的出现时间均早于鳃组织。研究结果表明：腹腔注射免疫鳗弧菌全菌灭活疫苗能引起牙鲆脾脏、头肾和鳃免疫相关基因的快速变化。脾脏、头肾中基因的表达量大多显著高于鳃组织,且表达高峰值的出现早于鳃组织。注射免疫后,脾脏或头肾组织中TLR2、NF-κB和IL-6基因的表达量上调较快、较高,可作为注射免疫鳗弧菌全菌灭活疫苗效果的主要评价指标。本研究为牙鲆疫苗免疫效果的评价提供了理论依据。

关键词：牙鲆鳗弧菌灭活疫苗注射免疫免疫相关基因

牙鲆(Paralichthys olivaceus)红细胞单克隆抗体与五种养殖鱼类血细胞的交叉反应

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海洋与湖沼 2005年第2期36卷 123-129页

作者：邢婧战文斌曾晓华程顺峰中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室青岛266003

以牙鲆血细胞为抗原免疫Balb/c小鼠 ,选用聚乙二醇 (PEG)作为细胞融合剂 ,将免疫的小鼠脾细胞与P3X63Ag8U1骨髓瘤细胞融合 ,筛选、克隆出 3株生产抗牙鲆红细胞单克隆抗体 (Mabs)的杂交瘤细胞 ( 1C7、2B6、3A1 )。应用免疫荧光抗体法 (IF... 详细信息

以牙鲆血细胞为抗原免疫Balb/c小鼠 ,选用聚乙二醇 (PEG)作为细胞融合剂 ,将免疫的小鼠脾细胞与P3X63Ag8U1骨髓瘤细胞融合 ,筛选、克隆出 3株生产抗牙鲆红细胞单克隆抗体 (Mabs)的杂交瘤细胞 ( 1C7、2B6、3A1 )。应用免疫荧光抗体法 (IFAT)研究 3株单抗与 5种常见养殖鱼类 (大菱鲆、花鲈、真鲷、许氏平、鲫鱼 )红细胞的交叉反应 ,结果显示 ,3株单抗与5种鱼类红细胞有不同程度的阳性反应 ;应用Westernblotting法分析单抗识别的蛋白分子量 ,结果显示 ,单抗 1C7与大菱鲆血细胞结合的蛋白分子量为 5 2kD、47kD、45kD、32kD、2 9kD、2 7kD ,与花鲈、许氏平结合的蛋白分子量是 5 2kD、2 9kD ,与真鲷结合的为 2 9kD ,与鲫鱼结合的为44kD、2 9kD、2 8kD ;单抗 2B6与大菱鲆、花鲈血细胞结合的蛋白带分子量是 30kD、2 8kD ,与真鲷结合的为 30kD ,与许氏平结合的为 2 9kD、2 8kD ;单抗 3A1没有Westernblotting反应。结果表明 ,这 6种鱼红细胞存在相同或相似的抗原决定簇 ,蛋白成分具有相似性。

关键词：牙鲆血细胞单克隆抗体鱼类

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牙鲆的胚胎发育

水产学报 2004年第6期28卷 609-615页

作者：田永胜陈松林严安生季相山中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点实验室华中农业大学水产学院中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点实验室山东青岛　266071 湖北武汉　430070

在牙鲆胚胎玻璃化冷冻中,为了准确选择胚胎的冷冻时期,掌握胚胎发育进程,同时为牙鲆苗种培育提供一定的依据,对海水工厂化养殖牙鲆的胚胎发育进行了研究。牙鲆受精卵培养在14～16℃、盐度29.9的海水中,利用Olympus显微镜对牙鲆胚胎发育... 详细信息

在牙鲆胚胎玻璃化冷冻中,为了准确选择胚胎的冷冻时期,掌握胚胎发育进程,同时为牙鲆苗种培育提供一定的依据,对海水工厂化养殖牙鲆的胚胎发育进行了研究。牙鲆受精卵培养在14～16℃、盐度29.9的海水中,利用Olympus显微镜对牙鲆胚胎发育过程连续观察,对各个胚胎时期的发育时间进行了记录,并对每一时期的特征用Olympus照像机进行了拍摄。实验记录了从受精卵到出膜后5d的29个具体发育时期的特征和发育时间,拍摄了30张具有代表性的胚胎和鱼苗图片,将牙鲆胚胎发育划分为卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、肌节期、尾芽期、心跳期、胚体转动期、出膜前期、出膜期10个连续的典型时期。在此培养条件下牙鲆胚胎历时93h完成整个胚胎发育,孵化出膜,再经96h的胚后发育卵黄囊完全吸收,之后进入变态期,向成鱼转化。

关键词：牙鲆胚胎发育

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牙鲆病原秦皇岛弧菌主要生物学性状研究

水生生物学报 2005年第4期29卷 366-371页

作者：房海陈翠珍张晓君河北科技师范学院动物科学系秦皇岛066600

从秦皇岛某海水养殖场牙鲆(ParalichthysolivaceusL.)细菌性败血感染症的病例中,分离到了相应的病原细菌。经对12株纯培养菌进行形态特征、培养特性、理化特性等方面较系统的表观分类学指征及代表菌株DNA中G+Cmol%的测定,表明为弧菌属(V... 详细信息

从秦皇岛某海水养殖场牙鲆(ParalichthysolivaceusL.)细菌性败血感染症的病例中,分离到了相应的病原细菌。经对12株纯培养菌进行形态特征、培养特性、理化特性等方面较系统的表观分类学指征及代表菌株DNA中G+Cmol%的测定,表明为弧菌属(VibrioPacini1854)细菌的一个新种,并定名为秦皇岛弧菌(***.)。同时对该菌的血清型进行了检定,表明12株菌具有同种的K抗原和同种的O抗原(血清同源);另外,经以37种抗菌类药物做敏感性测定,结果显示对供试的头孢唑啉等32种药物敏感、对青霉素G等5种耐药,在不同菌株间无明显的敏感与耐药差异。

关键词：牙鲆秦皇岛弧菌生物学性状血清型耐药性药敏试验

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牙鲆渤海自然群体的遗传多样性分析

水产学报 2013年第11期37卷 1609-1617页

作者：刘永新朱以美刘英杰高磊方辉韩刚王玉芬姜秀凤刘海金中国水产科学研究院中国水产科学研究院北戴河中心实验站东北农业大学动物科学技术学院

为分析牙鲆自然群体的遗传多样性并筛选出能有效鉴定群体遗传特征的特异性微卫星标记,实验收集了渤海流域74尾野生个体组成实验群体。选择牙鲆24个连锁群上不同区域的72个微卫星标记进行遗传分析,其中,近着丝粒区域包含17个标记,连锁群... 详细信息

为分析牙鲆自然群体的遗传多样性并筛选出能有效鉴定群体遗传特征的特异性微卫星标记,实验收集了渤海流域74尾野生个体组成实验群体。选择牙鲆24个连锁群上不同区域的72个微卫星标记进行遗传分析,其中,近着丝粒区域包含17个标记,连锁群中部包含19个标记,远着丝粒区域包含36个标记。结果显示:在连锁群不同区域上等位基因数(A)介于6.400~7.389,有效等位基因数(N e)介于4.469~5.129,Shannon多样性指数(I)介于1.565~1.683;观测杂合度(H o)、无偏倚杂合度期望值(H e)和多态信息含量(PIC)的范围分别为0.568~0.593、0.738~0.753和0.707~0.746;Hardy-Weinberg遗传偏离指数(d)在-0.200以下;群体内个体之间的遗传距离在0.620以上。各项遗传参数表明该实验群体具有较为丰富的遗传多样性,个体之间具有相对较远的遗传距离,适宜作为基础群体进行选育。位于连锁群不同区域的微卫星标记获得的遗传参数并无明显差异,验证了标记所在位置与标记多样性高低不存在必然联系,但这些多态性标记可以作为分析牙鲆群体遗传结构的候选标记。

关键词：牙鲆自然群体微卫星着丝粒

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牙鲆早期发育阶段的摄食节律

水产学报 2006年第3期30卷 329-334页

作者：林利民李益云万瑞景庄志猛集美大学水产学院中国水产科学研究院黄海水产研究所

实验对人工饲养条件下牙鲆(Paralichthys olivaceus)早期发育阶段摄食节律进行研究。在水温14.417.6℃条件下,初孵仔鱼约经56d开口摄食,开口饵料为经120目筛网过滤的褶皱臂尾轮虫(Bruchionus plicatilis),1720d投喂卤虫无节幼体(Artemia... 详细信息

实验对人工饲养条件下牙鲆(Paralichthys olivaceus)早期发育阶段摄食节律进行研究。在水温14.417.6℃条件下,初孵仔鱼约经56d开口摄食,开口饵料为经120目筛网过滤的褶皱臂尾轮虫(Bruchionus plicatilis),1720d投喂卤虫无节幼体(Artemianauplii),21d后开始投喂桡足类(Copepoda)直至幼鱼阶段。通过对1 090尾仔、稚、幼鱼的测定、统计结果得出:饵料充足时饱食个体占65.8%,日间摄食率达93.7%,10日龄后[全长大于(5.20±0.24)mm],牙鲆日间的摄食率达100%,空胃个体主要出现在10日龄前。仔、稚鱼在早晨8:00和下午16:00出现两个摄食高峰,夜间基本不摄食。幼鱼夜间摄食则比较活跃,摄食量与仔、稚鱼相比明显增加,下午16:00仍为幼鱼摄食高峰。实验结果表明,牙鲆仔、稚、幼鱼具有明显的摄食节律,呈现白天摄食为主,清晨和黄昏双高峰的特点。

关键词：牙鲆仔、稚、幼鱼摄食节律摄食率

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牙鲆工厂化养殖HACCP管理模式初探

水产科技情报 2008年第6期35卷 261-264页

作者：宫春光于清海陈福杰河北农大海洋学院秦皇岛066003 中国水产科学院北戴河实验站秦皇岛066000

对牙鲆的工厂化养殖进行危害分析,找出其关键控制点,即水质、苗种、饲料、病害防治和运输与暂养,提出了相应的预防措施,使各关键控制点处于人为控制之下,从而确定其养殖期间日常管理的操作规程,建立了牙鲆工厂化养殖的HACCP管理模式。

关键词：牙鲆工厂化养殖操作规程 HACCP

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牙鲆体质量与形态性状的异速生长分析

南方水产科学 2016年第1期12卷 36-42页

作者：刘永新刘奕刘英杰杨润清中国水产科学研究院北京100141 中国水产科学研究院珠江水产研究所广东广州510380

为分析牙鲆（Paralichthys olivaceus）体质量与形态性状之间异速生长的遗传规律,通过人工受精的方法建立牙鲆19个全同胞家系,测量了牙鲆不同日龄的体质量和形态性状。采用逐步回归方法建立最优联合异速生长模型,将此模型镶嵌到体质量... 详细信息

为分析牙鲆（Paralichthys olivaceus）体质量与形态性状之间异速生长的遗传规律,通过人工受精的方法建立牙鲆19个全同胞家系,测量了牙鲆不同日龄的体质量和形态性状。采用逐步回归方法建立最优联合异速生长模型,将此模型镶嵌到体质量动物模型的每个遗传和环境效应中,进一步分析对多个形态性状异速生长遗传规律。静态异速生长分析表明：体质量与全长之间存在最大异速生长指数（1.415 5）,表现为正异速生长,剩余形态性状与体质量之间的异速生长指数为0.061 5~0.718 0,皆表现为负异速生长。全长与尾柄高之间异速生长指数的正遗传相关最大（0.907 8）;全长与尾柄长之间的负遗传相关最大（-0.946 8）。不同模型通过统计标准比较,确定模型Ⅰ为进行牙鲆动态异速生长分析的最优随机回归模型。

关键词：牙鲆体质量形态性状异速生长

促卵泡激素对牙鲆尾部神经分泌系统活动的影响

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水产学报 2022年第1期46卷 10-19页

作者：江鹏鑫潘歆蓓吕为群上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海海洋大学海洋生物科学国际联合研究中心(中国科学技术部)

为探究促卵泡激素(FSH)是否参与调控鱼类特有的尾部神经分泌系统(CNSS)活动,实验利用电生理技术检测FSH是否影响dahlgren细胞放电活动。此外,利用PCR技术检测离体的CNSS在FSH急性灌流后和繁殖季节CNSS主要的相关基因的表达。结果显示,FS... 详细信息

为探究促卵泡激素(FSH)是否参与调控鱼类特有的尾部神经分泌系统(CNSS)活动,实验利用电生理技术检测FSH是否影响dahlgren细胞放电活动。此外,利用PCR技术检测离体的CNSS在FSH急性灌流后和繁殖季节CNSS主要的相关基因的表达。结果显示,FSH促进dahlgren细胞放电频率和诱导部分细胞静止型放电转向爆发型放电。促卵泡激素受体结合抑制剂(FRBI-8)能够阻断FSH对dahlgren细胞放电活动的影响。FSH灌流后,CNSS中FSH受体基因(fshr)的表达量无显著变化,而L型电压门控钙离子通道基因(LCa2+)的表达量显著上调。在繁殖季节,脑垂体中fshβ的表达量和性腺指数(GSI)或CNSS中的尾加压素Ⅱ基因(UⅡ)的表达量呈显著的正相关。本研究首次证明FSH能够调控CNSS,这为进一步解析CNSS在生殖和季节适应中的作用奠定基础。

关键词：牙鲆尾部神经分泌系统神经调节促卵泡激素尾加压素Ⅱ