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LIM矿化蛋白1在大鼠牙髓损伤修复中的时空表达

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上海口腔医学 2016年第2期25卷 157-161页

作者：方平娟潘乙怀孙仁义赵瑜孙瑜温州医科大学附属口腔医院牙体牙髓病科温州医科大学附属口腔医院口腔颌面外科浙江温州325027

目的 :探讨LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein 1,LMP-1)在大鼠磨牙牙髓损伤修复中的表达。方法 :建立大鼠磨牙牙髓损伤修复动物模型,用免疫组织化学染色方法观察LMP-1在大鼠牙髓损伤修复中的表达,并用Image-Pro Plus 6.0图像分... 详细信息

目的 :探讨LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein 1,LMP-1)在大鼠磨牙牙髓损伤修复中的表达。方法 :建立大鼠磨牙牙髓损伤修复动物模型,用免疫组织化学染色方法观察LMP-1在大鼠牙髓损伤修复中的表达,并用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件及单因素方差分析比较各组间的差异。结果 :在正常大鼠牙髓组织中LMP-1表达阴性;在大鼠牙髓损伤后1 d,LMP-1表达于成牙本质细胞及部分牙髓成纤维细胞;术后3 d,LMP-1表达于坏死牙髓下方的细胞增殖层;术后7 d,LMP-1显著表达于增殖活跃的牙髓细胞及部分成牙本质细胞中。结论:LMP-1在牙髓损伤修复过程中呈时空特异性表达,可能参与成牙本质细胞及牙髓细胞的增殖、分化及修复性牙本质的形成。

关键词： LIM矿化蛋白1 牙髓损伤修复时空表达

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细胞自噬在牙髓损伤修复过程中的作用

口腔医学研究 2019年第6期35卷 531-536页

作者：陈杰徐华兴程抒华张旗同济大学口腔医学院·同济大学附属口腔医院牙体牙髓科上海200072 上海牙组织修复与再生工程技术研究中心上海200072

目的:研究大鼠牙髓损伤修复过程中细胞自噬表达的变化,探讨其在这一过程中可能发挥的作用。方法: 60只8周龄SD大鼠上颌第一磨牙开髓后直接盖髓,术后第1、3、7、14天取材,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、Masson染色观察牙髓损... 详细信息

目的:研究大鼠牙髓损伤修复过程中细胞自噬表达的变化,探讨其在这一过程中可能发挥的作用。方法: 60只8周龄SD大鼠上颌第一磨牙开髓后直接盖髓,术后第1、3、7、14天取材,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、Masson染色观察牙髓损伤修复情况,免疫组织荧光染色检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、CD68以及自噬蛋白LC3B和Beclin1的表达。分别提取损伤牙髓组织及体外培养牙髓细胞加脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative Real-time PCR)检测损伤后不同时间点炎症、矿化和自噬相关基因的表达变化。结果:术后第1天大量中性粒细胞浸润,第3天炎症浸润逐渐减轻,第14天炎症明显好转,有新胶原纤维形成( P 牙髓细胞、成牙本质细胞及血管内皮细胞胞质及胞膜上。mRNA水平表明炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、CD68、TNF-α在损伤后3天表达达高峰,随后降低;矿化指标Ⅰ型胶原(collagen type I,COL1)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)及牙本质基质蛋白1 (dentin matrix protein1,DMP1)在损伤修复过程中表达逐渐升高。自噬基因LC3B与Atg5在损伤后12 h表达量至高峰,24 h表达量最低,随后逐渐升高;Atg12与Beclin1在损伤后出现先降低后升高趋势。体外细胞与体内组织mRNA趋势一致,差异有统计学意义( P 牙髓损伤修复过程中,自噬参与牙髓炎症的发生发展,并促进牙髓组织修复。

关键词：细胞自噬牙髓炎症牙髓损伤修复

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MMP-3与CCN2在牙髓损伤修复的表达

MMP-3与CCN2在牙髓损伤修复的表达

作者：李梦洁吉林大学

学位级别：硕士

目的:建立大鼠实验性牙髓损伤修复的动物模型，观察牙髓损伤修复后的组织病理学反应。观察MMP-3与CCN2蛋白在牙髓损伤修复过程中的表达，初步探讨MMP-3与CCN2在牙髓损伤过程中的作用。方法：择28只wistar大鼠，平均分为7组，每组4只，... 详细信息

目的:建立大鼠实验性牙髓损伤修复的动物模型，观察牙髓损伤修复后的组织病理学反应。观察MMP-3与CCN2蛋白在牙髓损伤修复过程中的表达，初步探讨MMP-3与CCN2在牙髓损伤过程中的作用。方法：择28只wistar大鼠，平均分为7组，每组4只，随机取一组作为对照组，另六组在双侧第一磨牙备洞。分别于术后即刻、6小时、1天、3天、7天、14天灌流固定处死实验动物取牙齿标本，经固定、脱钙、切片、HE与免疫组化染色在光镜观察牙髓损伤修复的组织学变化及MMP-3与CCN2在正常牙髓及牙髓损伤修复过程中的定位、定性表达过程。结果：牙髓组织术后6小时血管扩张明显，三天可见炎症细胞聚集在备洞下方牙髓，7天炎症程度降低牙髓修复活跃可见新生血管、成纤维细胞增生活跃、新生牙本质样细胞。14天备洞下方可见修复性牙本质。正常大鼠牙髓中MMP-3与CCN2均呈阴性表达。6小时后可见弱阳性表达，牙髓损伤1天后开髓点下方成牙本质细胞和细胞基质中可见阳性表达，损伤3-7天时牙髓可见强阳性表达，可见于成牙本质细胞、成纤维细胞、中性粒细胞等，损伤14天后出现修复性牙本质阳性表达减弱。结论：通过单纯备洞法可观察牙髓损伤后自然修复过程，是研究牙髓损伤修复的一个良好模型。MMP-3与CCN2在大鼠牙髓损伤中的表达呈现先升高后降低的趋势，并在不同的时间点在不同的细胞有高表达，提示MMP3与CCN2可能与牙髓损伤后的自身修复有关。为临床提供了新盖髓剂的理论基础及牙髓损伤生物学治疗方法。揭示牙髓损伤修复机制新线索。

关键词：牙髓损伤修复 MMP-3 CCN2 动物模型

MMP-3与CCN2对牙髓损伤修复作用的研究—盖髓效果的实验观察

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MMP-3与CCN2对牙髓损伤修复作用的研究—盖髓效果的实验观察

作者：李雯吉林大学

学位级别：硕士

目的:建立大鼠牙髓机械损伤修复模型,将基质金属蛋白酶3(Matrix metalloprot einase 3,MMP-3)和结缔组织生长因子CCN2(Connective growth factor,CTG F/CCN2)分别覆盖于损伤牙髓处,观察在不同时间点大鼠牙髓的组织病理学反应,研究MMP-3... 详细信息

目的:建立大鼠牙髓机械损伤修复模型,将基质金属蛋白酶3(Matrix metalloprot einase 3,MMP-3)和结缔组织生长因子CCN2(Connective growth factor,CTG F/CCN2)分别覆盖于损伤牙髓处,观察在不同时间点大鼠牙髓的组织病理学反应,研究MMP-3和CCN2对牙髓损伤后成牙本质细胞和修复性牙本质形成的作用。方法:取48只雄性Wistar大鼠,按不同盖髓剂随机分为3大组(n=16):对照组(PBS盖髓)、实验组(MMP-3盖髓)、实验组(CCN2盖髓),每组大鼠再根据观察时间的不同随机分为3、7、14和28 d四个亚组(n=4)。在每只大鼠的左侧上颌第一磨牙面中央备洞,PBS组在露髓处放置PBS,MMP-3组在露髓处放置MMP-3,CCN2组在露髓处放置CCN2。各组大鼠按照时间点分别于盖髓术后3、7、14和28天灌流固定处死大鼠并取牙齿标本,经固定,脱钙,切片,HE染色与免疫组织化学染色在光镜下观察修复性牙本质形成和成牙本质细胞阳性表达的情况。结果:HE染色结果显示:与PBS组相比:术后3天,MMP-3组露髓点下方少量炎细胞聚集,CCN2组露髓点下方炎细胞无减少,但两实验组均可见明显扩张血管及新生血管形成。术后7天炎症逐渐减轻,可见成纤维细胞与牙本质之间形成少量前期牙本质。术后14天,MMP-3组和CCN2组露髓点下方可见连续完整的钙化桥形成,无明显炎细胞。术后28天见大量修复性牙本质形成。免疫组化染色结果显示:MMP-3组和CCN2组中DMP-1和DSP在术后3、7、14天阳性表达逐渐增强,且与同时间点的PBS组相比有显著差异,术后28天,三组中DMP-1和DSP阳性表达均减弱。结论:MMP-3和CCN2作用于损伤牙髓露髓处,对增强成牙本质细胞的活跃性和修复性牙本质的形成能力有一定的促进作用,本次研究提示基质金属蛋白酶MMP-3和结缔组织生长因子CCN2是良好的盖髓剂,与氢氧化钙等盖髓剂联合应用于临床,为开发新的盖髓剂提供了一定的理论依据和新思路。

关键词：牙髓损伤修复 MMP-3 CCN2 盖髓剂

NELL-1联合BMP2蛋白盖髓在大鼠牙髓损伤修复中的作用分析

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临床和实验医学杂志 2019年第21期18卷 2251-2255页

作者：谭雅琴刘波夏凌云十堰市太和医院口腔科

目的探究NELL样1型分子(NELL-1)联合骨形态发生蛋白2(BMP2)盖髓在大鼠牙髓损伤修复中的作用。方法选取60只6周龄Wistar大鼠,随机分为4组,分别为:模型组、NELL-1组、BMP2组和联合组;将大鼠制成牙髓损伤模型,模型组使用空白胶原海绵对大... 详细信息

目的探究NELL样1型分子(NELL-1)联合骨形态发生蛋白2(BMP2)盖髓在大鼠牙髓损伤修复中的作用。方法选取60只6周龄Wistar大鼠,随机分为4组,分别为:模型组、NELL-1组、BMP2组和联合组;将大鼠制成牙髓损伤模型,模型组使用空白胶原海绵对大鼠行直接盖髓术; NELL-1组使用胶原海绵+700 ng/ml的NELL-1为盖髓剂行盖髓术; BMP2组使用和胶原海绵+700 ng/ml BMP2为盖髓剂行盖髓术;联合组使用胶原海绵+700 ng/ml的NELL-1和700 ng/ml BMP2为盖髓剂进行直接盖髓术。分别于造模后2周、4周处死大鼠。使用WB分别检测各组大鼠蛋白牙本质涎磷蛋白(DSPP)的表达;使用RT-PCR检测各组大鼠牙髓中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α) mRNA的表达情况;使用苏木精-伊红(HE)染色检测修复性牙本质形成的效果。结果相比模型组,第2周和第4周时,NELL-1组和BMP2组IL-6和TNF-αmRNA水平均显著降低,相比NELL-1组,联合组IL-6和TNF-αmRNA水平显著降低(P 牙髓中的炎症反应,促进牙髓损伤的修复,且两者联合作用效果优于单独使用。

关键词：大鼠牙髓损伤 NELL-1 BMP2 盖髓剂牙髓损伤修复

Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的促进作用

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吉林大学学报（医学版） 2020年第1期46卷 73-77,I0005页

作者：谢金芳孟琳高华丽李雪洋胡雪张颖丽尹硕吉林大学口腔医院综合口腔治疗科吉林长春130021 吉林大学口腔医院病理科吉林长春130021 吉林大学口腔医院牙体牙髓科吉林长春130021 吉林省长春市口腔医院修复科吉林长春130022

目的:研究Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的作用,探讨其作为新型盖髓剂的可能性。方法:28只雄性Wistar大鼠,在大鼠的双侧上颌第一磨牙牙合面备洞至露髓后,左侧用含Matrilin-4的胶原蛋白海绵盖髓(Matrilin-4组),右侧用含磷... 详细信息

目的:研究Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的作用,探讨其作为新型盖髓剂的可能性。方法:28只雄性Wistar大鼠,在大鼠的双侧上颌第一磨牙牙合面备洞至露髓后,左侧用含Matrilin-4的胶原蛋白海绵盖髓(Matrilin-4组),右侧用含磷酸盐缓冲溶液(PBS)的胶原蛋白海绵盖髓(PBS组),双侧均用玻璃离子封洞。分别于3、7、14和28d灌流固定处死大鼠并取上颌双侧第一磨牙标本,HE染色和免疫组织化学染色观察分析各组大鼠修复性牙本质形成及成牙本质细胞中牙本质涎蛋白(DSP)的表达情况。结果:HE染色,3d时与PBS组比较,Matrilin-4组穿髓孔下方较少量炎症细胞聚集,并可见明显的血管扩张;7d时2组穿髓孔下方炎症反应加重,但Matrilin-4组明显轻于PBS组,且可见前期牙本质形成;14d时Matrilin-4组露髓区域可被较连续完整的修复性牙本质桥覆盖;28d时,与PBS组比较,Matrilin-4组穿髓孔下方可见厚而完整的修复性牙本质桥,牙本质桥下面有重组的成牙本质细胞层。免疫组织化学染色,2组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度在术后3、7和14d呈逐渐增强趋势,28d时减弱;盖髓后各时间点Matrilin-4组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度均强于PBS组,且14d时阳性表达达高峰。与PBS组比较,3、7和14d时Matrilin-4组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度明显升高(P牙髓损伤后修复性牙本质的形成具有促进作用。

关键词： Matrilin-4 牙髓损伤修复盖髓剂成牙本质细胞

Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后的修复作用

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Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后的修复作用

作者：谢金芳吉林大学

学位级别：硕士

目的:应用大鼠构建牙髓损伤修复模型,将matrilin-4作为盖髓剂置于暴露牙髓处,观察术后不同时间点大鼠牙髓组织的形态学改变及免疫染色结果,以探讨matrilin-4对成牙本质细胞的活性及修复性牙本质形成的影响。方法:将已适应性饲养的28只雄... 详细信息

目的:应用大鼠构建牙髓损伤修复模型,将matrilin-4作为盖髓剂置于暴露牙髓处,观察术后不同时间点大鼠牙髓组织的形态学改变及免疫染色结果,以探讨matrilin-4对成牙本质细胞的活性及修复性牙本质形成的影响。方法:将已适应性饲养的28只雄性Wistar大鼠随机分为4组(n=7);于各组大鼠的双侧上颌第一磨牙牙合面备洞近髓,探针穿髓,左侧用matrilin-4,右侧用PBS盖髓后双侧均用玻璃离子封洞;分别于术后3、7、14、28d将大鼠灌流固定处死后取含其双侧上颌第一磨牙的骨组织标本,经固定、脱钙、切片后行HE染色及免疫组化染色,观察各组牙髓组织反应情况、修复性牙本质形成情况及DSP在成牙本质细胞中的表达情况。结果:观察HE染色情况发现:术后3d,matrilin～4组较PBS组相比穿髓孔下方少量炎症细胞聚集,并可见明显的血管扩张。术后7d,matrilin-4组穿髓孔下方炎症反应较matrilin-4 3d组加重,但明显轻于PBS 7d组,血管扩张明显,穿髓孔周边的牙髓牙本质壁上可见前期牙本质形成。术后14d,matrilin-4组露髓区域可被较连续完整的修复性牙本质桥覆盖,但修复性牙本质桥中可见牙髓组织(Pulpal tissue,PT)及未完全吸收的盖髓材料,修复性牙本质桥之间还观察到隧道缺陷。牙本质侧形成的修复性牙本质由管状牙本质(tubular dentin,TD)组成,其下方有重组的成牙本质细胞层。术后28d,matrilin-4组穿髓孔下方可见厚而完整的修复性牙本质桥,由管状牙本质组成,牙本质桥下面有重组的成牙本质细胞层,牙髓形态正常。免疫组化染色结果显示:两组中DSP的阳性表达在术后3、7、14d呈逐渐增强趋势,28d减弱。盖髓后各时间点DSP阳性表达均强于PBS组,且14d时阳性表达达高峰。Matrilin-4组与PBS组相比,在术后3、7、14 d的差异具有统计学意义(P损伤的牙髓暴露区,可一定程度上增强成牙本质细胞的活性并促进修复性牙本质的形成。本结果提示,marilin-4可能作为一种新型盖髓剂,单独或与Ca(OH)2、MTA等联合用于临床,改善现有盖髓剂的不足之处,为研发性能更优异的盖髓剂提供理论基础。

关键词： Matrilin-4 牙髓损伤修复盖髓剂成牙本质细胞

MMP-3与CCN2在牙髓损伤与修复作用中的研究——对人牙髓细胞迁移的影响

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MMP-3与CCN2在牙髓损伤与修复作用中的研究——对人牙髓细胞迁移...

作者：王贺吉林大学

学位级别：硕士

目的：在牙髓损伤修复过程中通过观察MMP-3与CCN2诱导体外培养人牙髓细胞细胞迁移率的变化以及观察MMP-3对CCN2mRNA表达的影响，阐述MMP-3促进牙髓损伤修复的功能并揭示其机制。方法：选取年轻患者因正畸或阻生拔除的健康第三磨牙，取... 详细信息

目的：在牙髓损伤修复过程中通过观察MMP-3与CCN2诱导体外培养人牙髓细胞细胞迁移率的变化以及观察MMP-3对CCN2mRNA表达的影响，阐述MMP-3促进牙髓损伤修复的功能并揭示其机制。方法：选取年轻患者因正畸或阻生拔除的健康第三磨牙，取出牙髓，以酶消化联合组织块法获得人牙髓成纤维细胞，首先采用transwell小室培养法进行两部分实验：①MMP-3（100ng/ml）和CCN2(100ng/ml)分别诱导人牙髓成纤维细胞，观察不同时间（12h、24h和48h）作用下，细胞迁移活性的变化;②实验分6组即空白对照组、MMP-3组（100ng/ml）、antiCCN2（1ug/ml）组、MMP3+antiCCN2（0.01ug/ml）组、MMP3+antiCCN2（0.1ug/ml）组和MMP3+antiCCN2（1ug/ml）组，观察24h后牙髓成纤维细胞迁移活性的变化;采用RT-PCR方法检测经不同时间（30min、1h、3h、6h、9h、12h）MMP-3诱导后人牙髓成纤维细胞中CCN2mRNA的表达。结果：Transwell小室细胞迁移实验分两部分，第一部分中实验组与对照组相比，MMP-3和CCN2在12h组、24h组和48h组均有显著性统计学差异（P0.05);第二部分中，空白组与anti-CCN2组间比较无显著性差异(P>0.05)，与其它各组两两比较均有显著性统计学差异（P牙髓损伤修复。CCN2在MMP3促进牙髓损伤修复过程中的作用不容小觑，这为临床工作中研制新的盖髓剂提供良好的理论基础，而且也提供了新的牙髓损伤生物学治疗方法。

关键词：牙髓损伤修复人牙髓成纤维细胞基质金属蛋白酶-3 结缔组织生长因子

matrilin-2和matrilin-4在大鼠牙髓损伤动物模型中的表达

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现代口腔医学杂志 2016年第1期30卷 6-11页

作者：杨楠李雯高华丽孟琳谢金芳尹硕张颖丽吉林大学口腔医院长春130021

目的建立大鼠牙髓损伤修复的动物模型,观察matrilin-2、matrilin-4在正常牙髓及牙髓损伤修复过程中的定位、定性表达过程。方法选择30只雄性wistar大鼠,平均分为5组。随机选取一组作为正常组,其余四组在大鼠左侧上颌第一磨牙咬合面开髓... 详细信息

目的建立大鼠牙髓损伤修复的动物模型,观察matrilin-2、matrilin-4在正常牙髓及牙髓损伤修复过程中的定位、定性表达过程。方法选择30只雄性wistar大鼠,平均分为5组。随机选取一组作为正常组,其余四组在大鼠左侧上颌第一磨牙咬合面开髓作为实验组。分别于3,7,14,21d灌流固定处死动物并取大鼠上颌左侧第一磨牙标本,经固定、脱钙、切片、HE染色与免疫组化染色在光镜下观察牙髓修复的形态学变化及matrilin-2与matrilin-4在正常牙髓及牙髓损伤修复过程中的定位定性表达。结果在正常牙髓中matrilin-2在整个牙髓组织中呈强阳性表达,matrilin-4仅在成牙本质细胞层中表达。在实验组牙髓中,随着时间的推移,matrilin-2在成牙本质细胞层及相邻牙髓细胞中的表达逐渐减弱,而matrilin-4在该部位的表达逐渐增强。结论 matrilin-2和matrilin-4的表达与牙髓炎症发生发展的程度有关,它们可能参与牙髓损伤修复的过程。

关键词：牙髓损伤修复 matrilin-2 matrilin-4 动物模型