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牙髓干细胞诱导来源的腺上皮样细胞超微结构的研究

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牙髓干细胞诱导来源的腺上皮样细胞超微结构的研究

作者：张星魁河北医科大学

学位级别：硕士

目的:唾液腺功能退化严重影响患者的生活质量与水平,从根本上解决唾液腺退化仍是医学上的一大难题。随着再生医学的发展,自体腺上皮样细胞注射为解决唾液腺功能退化提供一种新的治疗方案。本实验旨在研究牙髓干细胞诱导来源腺上皮样细... 详细信息

目的:唾液腺功能退化严重影响患者的生活质量与水平,从根本上解决唾液腺退化仍是医学上的一大难题。随着再生医学的发展,自体腺上皮样细胞注射为解决唾液腺功能退化提供一种新的治疗方案。本实验旨在研究牙髓干细胞诱导来源腺上皮样细胞与腺上皮细胞及牙髓干细胞之间在超微结构上的异同之处及其功能变化,为再生医学治疗唾液腺功能退化提供新的治疗思路。方法:1.原代细胞的培养与鉴定1.1牙髓干细胞培养与鉴定:收集人牙髓组织取自于本院正畸减数拔除的前磨牙。取出牙髓组织后,采用组织块酶消化法培养原代牙髓细胞,采用流式细胞术对细胞进行鉴定。1.2腺上皮细胞培养与鉴定:收集人体本院因颈部淋巴结清扫术后下颌下腺标本,采用组织块酶消化法培养原代腺上皮细胞,通过免疫细胞化学染色法对细胞进行鉴定。2.建立人牙髓干细胞与腺上皮细胞共培养体系:本实验采用transwell小室完成共培养体系的建立。牙髓干细胞第3代,以1×10个/ml密度接种于transwell下层培养室内进行培养(以下简称共培养细胞),待细胞贴壁后,将人腺上皮细胞第三代,以4×10个/ml密度接种transwell上层培养室。单独培养的牙髓干细胞与腺上皮细胞作为对照,培养基每两天更换一次。共培养12天,每天观察细胞形态。3.透射电镜观察:选取第2、4、6、8、10和12天的共培养细胞,牙髓干细胞第3代与腺上皮细胞第3代,透射电镜观察和拍照。4.免疫细胞化学染色:选取第4、8、12天的共培养细胞,爬片成功后免疫细胞化学染色法鉴定CK-8和vimentin表达情况。5.唾液淀粉酶的测定:在共培养第2、4、6、8、10和12天去除上层腺上皮细胞,加入含有10%胎牛血清的培养液3ml,置于37℃恒温箱培养3天后,使用α-淀粉酶(AMS)测试盒测定其上清液中淀粉酶活性。***-8法测定增殖曲线:选取第2、4、6、8、10、12天共培养细胞,采用CCK-8法测定在其在450 nm处吸光度值。结果:1.在共培养过程中,共培养细胞出现了腺上皮样的多边形细胞,这些细胞紧密聚集,形成岛状结构,并在部分细胞岛的顶端可见串珠样气泡。这些细胞岛的数量在第8天达到顶峰后开始逐渐减少。在第10-12天共培养细胞逐渐转变为扁平状,紧密排列,细胞岛数量减少,串珠样分泌气泡减少甚至消失。2.在透射电镜下共培养细胞在第2天和第4天细胞内可见大量的线粒体,并可见许多核糖体及发达的粗面内质网;在共培养第6天可见细胞内可见少量的分泌颗粒样结构,并可见发达的粗面内质网,核糖体和线粒体的数量增多;在第8天分泌颗粒样结构数量进一步增多,并出现较多的空泡样结构;在第10和12天细胞内可见分泌颗粒样结构与空泡样结构数量减少,线粒体与粗面内质网未见明显减少。这些超微结构的改变明显区别于牙髓干细胞,与腺上皮细胞有着相似之处。3.免疫细胞化学染色显示:在共培养过程中,共培养细胞中vimentin表达逐渐降低,CK-8表达逐渐升高,在单独培养的牙髓干细胞中未发现此种改变,表明牙髓干细胞逐渐丧失间充质干细胞的特征,开始向上皮细胞转化。4.通过α-淀粉酶(AMS)测试法发现共培养细胞具有分泌唾液淀粉酶的能力,唾液淀粉酶活性随着共培养时间逐渐上升,在第8天达到顶峰后开始逐渐下降。共培养细胞上清中唾液淀粉酶活性与腺上皮细胞在第8至12天未见无明显统计学差异(P>0.05),两者均明显高于单独培养的牙髓干细胞(P细胞的平均吸光度值逐渐增高,在第4天开始进入对数期,在第8天达到顶峰。共培养细胞与牙髓干细胞平均吸光度值之间无明显的统计学差异(P>0.05),两者均明显高于腺上皮细胞(P牙髓干细胞在与腺上皮细胞共培养过程中可以转化为腺上皮样细胞,且增殖能力与牙髓干细胞无明显差异,明显优于下颌下腺来源的腺上皮细胞。2.牙髓干细胞在腺上皮细胞共培养诱导过程中自诱导第6天开始具备与腺上皮细胞相似的超微结构,超微结构变化与细胞光镜下形态、CK-8及vimentin表达变化及分泌功能变化基本一致,其中线粒体与粗面内质网可能在诱导过程中对细胞结构和功能转化起着重要作用。3.牙髓干细胞诱导来源腺上皮样细胞具有与腺上皮细胞同样的良好分泌功能,为解决腺体功能减退提供可靠的组织工程细胞来源。

关键词：腺上皮细胞牙髓干细胞透射电镜诱导分化间充质-上皮转化

载TGF-β3甲基丙烯酰化肝素对牙髓干细胞成骨分化能力的影响及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2022年第4期48卷 954-961页

作者：邹馨颖高爽赵红刘新赵远航宋嘉卓闫琳琳张志民吉林大学口腔医院牙体牙髓科吉林长春130021

目的:探讨载转化生长因子β3(TGF-β3)甲基丙烯酰化肝素(HepMA)对牙髓干细胞(DPSCs)成骨分化能力的促进作用,阐明其可能的作用机制。方法:体外分离培养人牙髓干细胞(hDPSCs)并通过流式细胞术进行细胞鉴定。合成光固化HepMA水凝胶,利用... 详细信息

目的:探讨载转化生长因子β3(TGF-β3)甲基丙烯酰化肝素(HepMA)对牙髓干细胞(DPSCs)成骨分化能力的促进作用,阐明其可能的作用机制。方法:体外分离培养人牙髓干细胞(hDPSCs)并通过流式细胞术进行细胞鉴定。合成光固化HepMA水凝胶,利用扫描电子显微镜观察材料表面形态特征。合成载不同浓度(20、40、60、80和100μg·L^(-1))TGF-β3的HepMA(TGF-β3-HepMA),采用其浸提液分别培养hDPSCs 1、3和5 d,同时设对照组,采用CCK-8法筛选出载TGF-β3的最适浓度。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各时间点TGF-β3-HepMA中TGF-β3的累积释放量并绘制药物释放曲线。hDPSCs分为对照组、HepMA组和载最适浓度TGF-β3的HepMA(TGF-β3-HepMA)组,加入含有相对应浸提液的培养基培养24 h,配制成骨诱导液分别诱导hDPSCs 7、14和21 d,采用碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色法检测各组细胞ALP染色及钙结节形成情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中成骨相关因子mRNA表达水平。结果:分离培养的hDPSCs在光学显微镜下观察呈长梭形;流式细胞术检测,培养的hDPSCs中CD105和CD90呈阳性表达,CD34和CD45呈阴性表达,验证本研究中分离培养的细胞为hDPSCs。扫描电子显微镜(SEM)观察,HepMA平均孔径为50~70μm。ELISA法检测,TGF-β3在7 d内呈突释阶段后缓慢释放,21 d左右达到平衡。CCK-8法检测,与0μg·L^(-1) TGF-β3-HepMA组比较,20、40和60μg·L^(-1) TGF-β3-HepMA组hDPSCs增殖率呈剂量依赖性升高(P细胞中ALP染色面积最大且染色颜色最深,14 d时细胞中ALP染色较7 d时更加明显;成骨诱导21 d时,与对照组和HepMA组比较,TGF-β3-HepMA组细胞中茜素红染色的矿化钙结节面积最大。RT-qPCR法检测,培养7和14 d时,与对照组比较,HepMA组和TGF-β3-HepMA组细胞中Runt相关转录因子2(Runx2)、ALP、骨钙桥素(OCN)和Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)mRNA表达水平明显升高(P细胞中Runx2、ALP、OCN和COL-ⅠmRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论:载TGF-β3的HepMA能够提高hDPSCs成骨分化能力,其机制可能与上调成骨相关因子的表达有关。

关键词：转化生长因子β3 牙髓干细胞甲基丙烯酰化肝素成骨分化

缺氧诱导因子1α基因修饰牙髓干细胞的体外成骨及成血管分化

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中国组织工程研究 2023年第24期27卷 3865-3870页

作者：唐娟于栋林刘郭琦宋娇娇左金华付洪海滨州医学院山东省滨州市256603 滨州医学院附属医院口腔颌面外科山东省滨州市256603

背景:如何有效地修复和重建临界骨缺损是临床医学的难题。牙髓干细胞作为转基因靶细胞修复受损组织或器官具有一定优势。目的:探究缺氧诱导因子1α对牙髓干细胞体外成骨及成血管的作用。方法:选取临床上12-18岁患者因正畸治疗需要拔除... 详细信息

背景:如何有效地修复和重建临界骨缺损是临床医学的难题。牙髓干细胞作为转基因靶细胞修复受损组织或器官具有一定优势。目的:探究缺氧诱导因子1α对牙髓干细胞体外成骨及成血管的作用。方法:选取临床上12-18岁患者因正畸治疗需要拔除的健康、完整双尖牙的牙髓组织分离、培养牙髓干细胞,实验组将缺氧诱导因子1α基因转染至牙髓干细胞,对照组不做任何处理,采用qPCR检测缺氧诱导因子1α的基因表达以及Western blot检测成骨及成血管因子的蛋白表达。结果与结论:(1)牙髓干细胞为短梭形的成纤维样细胞,细胞呈集落式生长。(2)缺氧诱导因子1α基因稳定转染至牙髓干细胞内,随着时间延长缺氧诱导因子1α基因表达逐渐增高,至14 d达到高峰,21 d明显降低。(3)与对照组相比,实验组的成血管相关因子表达水平更高。转染后1 d,血管内皮生成因子、基质细胞衍生因子1、促血管生成素2、胎盘生长因子蛋白表达明显增高,4 d达到高峰,随后实验组成血管相关蛋白表达虽略有降低,但与对照组相比明显增高。(4)与对照组相比,实验组的成骨相关因子表达水平更高。转染后1 d,人骨形态发生蛋白2、骨钙蛋白、Runt相关转录因子2蛋白表达明显增高,4 d达到高峰。(5)结果表明,缺氧诱导因子1α能够促进牙髓干细胞成骨及成血管因子的表达。

关键词：牙髓干细胞缺氧诱导因子1α 血管内皮生长因子骨形态发生蛋白2 生长因子基质细胞衍生因子1 血管生成素2

缺氧处理牙髓干细胞外泌体诱导M2巨噬细胞极化

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中国组织工程研究 2022年第25期26卷 3961-3967页

作者：谭旭梁羽梁燕廖健贵州医科大学口腔医学院/附属口腔医院贵州省贵阳市550004 贵州省人民医院口腔科贵州省贵阳市550002

背景:研究发现,在缺氧预处理条件下人牙髓干细胞能够治疗根尖周炎骨缺损,但是缺氧预处理的牙髓干细胞外泌体是否能携带母细胞的生物信息而对巨噬细胞极化产生影响尚不清楚。目的:探讨缺氧处理牙髓干细胞来源外泌体对巨噬细胞极化的影响... 详细信息

背景:研究发现,在缺氧预处理条件下人牙髓干细胞能够治疗根尖周炎骨缺损,但是缺氧预处理的牙髓干细胞外泌体是否能携带母细胞的生物信息而对巨噬细胞极化产生影响尚不清楚。目的:探讨缺氧处理牙髓干细胞来源外泌体对巨噬细胞极化的影响。方法:将第3代牙髓干细胞放入正常培养箱和缺氧培养箱培养,培养48 h换液1次,当细胞生长至汇合率达80%-90%时收集细胞培养上清液,差速离心法提取外泌体。将人单核细胞系THP-1诱导分化为巨噬细胞,诱导的同时与PBS、正常培养和缺氧培养的牙髓干细胞来源外泌体共孵育48 h,ELISA检测细胞培养上清液中白细胞介素10和肿瘤坏死因子α水平,RT-qPCR检测巨噬细胞CD163、白细胞介素1受体拮抗剂、转化生长因子β1、趋化因子CCL2和肿瘤坏死因子αmRNA表达,流式细胞术检测CD11b^(+)CD163^(+)巨噬细胞表达,Western blot检测NF-κB和STAT3信号通路激活情况。结果与结论:①与PBS组相比,正常培养牙髓干细胞来源外泌体组巨噬细胞培养上清中白细胞介素10水平显著增加(P细胞CD163、转化生长因子β1和趋化因子CCL2 mRNA表达均显著上升(P细胞阳性率显著升高(P牙髓干细胞来源外泌体组相比,缺氧培养牙髓干细胞来源外泌体组巨噬细胞上清中白细胞介素10水平显著升高(P细胞介素1受体拮抗剂mRNA表达均显著升高(P细胞阳性率显著升高(P牙髓干细胞来源外泌体均可促进巨噬细胞M2型极化,且缺氧培养条件下巨噬细胞M2极化更为明显,其机制可能为激活STAT3信号通路,抑制NF-κB信号通路。

关键词：干细胞牙髓干细胞缺氧外泌体巨噬细胞极化 STAT3 NF-κB 信号通路

慢病毒介导沉默Smad2基因对人牙髓干细胞成骨向分化的作用

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中国组织工程研究 2023年第19期27卷 2999-3004页

作者：汪畅孙帅陈晓涛张晓莉新疆医科大学新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830001 徐州市口腔医院彭城门诊部江苏省徐州市221000 新疆维吾尔自治区人民医院口腔科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830001

背景:人牙髓干细胞成骨分化的具体调控机制尚不明确,研究其具体机制对干细胞在组织工程中的应用有重要意义。目的:探究慢病毒介导沉默Smad2基因对人牙髓干细胞成骨分化的影响。方法:将培养的第3代人牙髓干细胞分为空白对照组、阴性对照... 详细信息

背景:人牙髓干细胞成骨分化的具体调控机制尚不明确,研究其具体机制对干细胞在组织工程中的应用有重要意义。目的:探究慢病毒介导沉默Smad2基因对人牙髓干细胞成骨分化的影响。方法:将培养的第3代人牙髓干细胞分为空白对照组、阴性对照组、Smad2-shRNA组和Smad2-shRNA+转化生长因子β3组。利用qRT-PCR技术检测成骨相关基因RUNX2、骨钙素、Smad2、Smad3及Smad4的mRNA表达,利用Western blot技术检测RUNX2、骨钙素、Smad2/Smad3、p-Smad2/Smad3及Smad4的蛋白表达,各组细胞培养第7,14天进行茜素红染色。结果与结论:①与阴性对照组及空白对照组比较,Smad2-shRNA组RUNX2、骨钙素、Smad2、Smad3和Smad4的mRNA表达量降低,差异有显著性意义(P牙髓干细胞的成骨分化,而转化生长因子β3能够正向调控人牙髓干细胞的成骨向分化;④结果表明,转化生长因子β/Smad2信号转导途径在人牙髓干细胞的成骨分化过程中发挥着重要作用。

关键词：慢病毒 Smad2基因牙髓干细胞成骨分化转化生长因子β

牙髓干细胞凋亡小体促进破牙细胞生成的实验研究

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牙髓干细胞凋亡小体促进破牙细胞生成的实验研究

作者：罗慧坤中国医科大学

学位级别：硕士

目的:牙内吸收(Internal Resorption)是始于髓腔内的炎症过程,是由破牙细胞作用导致牙体硬组织丢失的一种病理现象,但其病因尚未完全明确。创伤和慢性牙髓炎是导致牙内吸收的主要因素,牙外伤可以直接损伤牙髓及根尖周组织,破坏牙髓和根... 详细信息

目的:牙内吸收(Internal Resorption)是始于髓腔内的炎症过程,是由破牙细胞作用导致牙体硬组织丢失的一种病理现象,但其病因尚未完全明确。创伤和慢性牙髓炎是导致牙内吸收的主要因素,牙外伤可以直接损伤牙髓及根尖周组织,破坏牙髓和根尖周的神经与血供。短暂缺血会引起细胞线粒体损伤和caspase介导的凋亡。在细胞凋亡晚期,细胞会形成凋亡小体(Apoptotic bodies,ABs)。ABs可包含多种细胞成分,并可对其下游细胞或受体细胞产生重要影响。破牙细胞(Odontoclasts)是产生吸收腔隙的多核细胞,是牙齿吸收的关键细胞,可由起源于牙髓和牙周膜中的循环祖细胞分化而来。多项研究认为牙内吸收与骨吸收的调节机制相似。牙髓内炎症级联反应是触发破牙细胞分化导致牙本质吸收的重要机制,而外伤患牙牙髓轻微感染的环境中,破牙细胞如何被激活进而引起牙内吸收,尚不明确。研究表明,牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)凋亡释放的凋亡囊泡能被内皮细胞吞噬,并调控内皮细胞的血管生成。在牙内吸收过程中,DPSC凋亡释放的凋亡小体(DPSC-ABs)是否影响破牙细胞介导的牙本质吸收尚不明确。因此,本研究拟获取DPSC-ABs,以其诱导RAW264.7细胞破牙向分化,检测破牙细胞生成及相关标志基因的表达,继而探索DPSC-ABs调控破牙细胞生成的相关机制,以期为牙内吸收的预防与治疗探寻新的靶点。研究方法:酶消化法分离人原代DPSC并进行表面标志分子鉴定,诱导凋亡后差速离心法收集DPSC-ABs并进行鉴定;荧光标记DPSC-ABs后与RAW264.7细胞共培养,荧光染色检测RAW264.7细胞对凋亡小体的吞噬作用。DPSC-ABs诱导RAW264.7细胞破牙向分化,抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色和荧光染色检测多核破牙细胞的生成;定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)及蛋白质印迹(Western blot)检测破牙细胞标志基因活化T细胞核因子1(Nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic-1,NFATc1)、组织蛋白酶K(cathepsin K)及TRAP的mRNA、蛋白表达。自噬激活剂雷帕霉素(Rapamycin)预处理后将DPSC-ABs作用于RAW264.7细胞,TRAP染色检测多核破牙细胞生成,Western blot检测破牙标志蛋白NFATc1、c-Fos、TRAP及自噬相关基因的表达。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)预处理后将DPSC-ABs作用于RAW264.7细胞,Western blot检测破牙标志蛋白NFATc1、TRAP的表达。结果:1、流式细胞术结果显示DPSC表面间充质干细胞标志分子CD29、CD105、CD46阳性,造血干细胞标志分子CD14、CD45阴性;DPSC-ABs荧光染色显示 Annexin V 阳性,Western blot 结果显示 DPSC-ABs 表达 Cleaved-caspase 3蛋白。2、荧光染色结果显示共培养24 h后DPSC-ABs定位于RAW264.7细胞内;DPSC-ABs诱导RAW264.7细胞4 d后,TRAP染色及荧光染色结果显示浓度为0.125-4 μg/mL DPSC-ABs促进多核(细胞核个数≥3)破牙细胞的生成,促进效果在DPSC-ABs浓度为0.25 μg/mL时最显著;RT-qPCR的结果显示,破牙细胞相关基因 NFATc1、cathepsin K、TRAP mRNA 水平升高;Western blot 结果显示破牙细胞相关基因NFATc1、cathepsin K、TRAP蛋白水平升高。3、Western blot结果显示DPSC-ABs促进破牙前体细胞自噬激活标志LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ的表达,雷帕霉素促进破牙细胞相关基因NFATc1、c-Fos和TRAP的蛋白表达,但雷帕霉素和DPSC-ABs共同作用抑制了破牙细胞相关基因NFATc1、c-Fos等的蛋白表达。TRAP染色结果显示DPSC-ABs与雷帕霉素均促进破牙细胞生成,但雷帕霉素和DPSC-ABs共同作用抑制破牙细胞生成。3-MA预处理后抑制了 DPSC-ABs的促进破牙细胞标志蛋白NFATc1、TRAP表达的作用。结论:1、DPSC-ABs被破牙前体细胞吞噬后在0.125-4 μg/mL浓度范围内促进多核破牙细胞的生成,促进效果在DPSC-ABs浓度为0.25 μg/mL时最显著。2、DPSC-ABs通过促进RAW264.7细胞的自噬促进破牙细胞

关键词：凋亡小体破牙细胞牙髓干细胞自噬

miR-31-5p对牙髓干细胞HIF-1α/BNIP3信号通路及成骨相关因子表达的影响

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上海口腔医学 2022年第3期31卷 237-242页

作者：付洪海孙乐刚丁昌成马向瑞黄玉梅滨州医学院附属医院口腔颌面外科山东滨州256603 滨州医学院附属医院药学部山东滨州256603 滨州医学院附属医院口腔修复科山东滨州256603

目的 :探讨微小RNA-31-5p(miR-31-5p)对牙髓干细胞(DPSCs)低氧诱导因子1α(HIF-1α)/Bcl-2/腺病毒E1B 19-kDa相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路及成骨相关因子表达的影响。方法 :体外培养人DPSCs,分为对照组(不转染)、mimic NC组(转染negati... 详细信息

目的 :探讨微小RNA-31-5p(miR-31-5p)对牙髓干细胞(DPSCs)低氧诱导因子1α(HIF-1α)/Bcl-2/腺病毒E1B 19-kDa相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路及成骨相关因子表达的影响。方法 :体外培养人DPSCs,分为对照组(不转染)、mimic NC组(转染negative control-miR-31-5p)、miR-31-5p mimic组(转染hsa-miR-31-5p mimic)、si RNA NC组(转染nonsense siRNA)和miR-31-5p siRNA组(转染miR-31-5p siRNA)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组DPSCs细胞中miR-31-5p、HIF-1α、BNIP3、碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录子2(Runx2)mRNA的表达情况,MTT法检测各组DPSCs细胞增殖情况,ALP活性测定试剂盒检测各组DPSCs细胞ALP活性,蛋白印迹(WB)法检测各组DPSCs细胞中HIF-1α、BNIP3、Runx2蛋白的表达情况。采用SPSS 24.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与对照组、mimic NC组相比,miR-31-5p mimic组DPSCs细胞A值、ALP mRNA表达水平及活性、Runx2 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P细胞A值、ALP mRNA表达水平及活性、Runx2 mRNA及蛋白水平显著升高(P细胞的成骨相关因子表达。

关键词：微小RNA-31-5p 牙髓干细胞 HIF-1α BNIP3 成骨相关因子表达

髓芯减压联合牙髓干细胞治疗兔早期激素性股骨头坏死

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中国组织工程研究 2022年第7期26卷 1074-1079页

作者：王新民刘飞许杰白玉玺吕剑秦皇岛市第一医院骨科二病区河北省秦皇岛市066000

背景:牙髓干细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能,在骨和软骨组织工程中的应用取得了明显进展,因此研究牙髓干细胞对股骨头坏死的治疗作用,将为股骨头坏死患者带来新的治疗策略和希望。目的:观察髓芯减压联合牙髓干细胞对兔早期激素... 详细信息

背景:牙髓干细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能,在骨和软骨组织工程中的应用取得了明显进展,因此研究牙髓干细胞对股骨头坏死的治疗作用,将为股骨头坏死患者带来新的治疗策略和希望。目的:观察髓芯减压联合牙髓干细胞对兔早期激素型股骨头坏死的治疗作用。方法:成年健康新西兰大白兔52只,随机分为正常对照组、模型组、溶媒组、牙髓干细胞组,除正常对照组外,其余3组采用激素型股骨头坏死造模方法。造模成功后(第4周),溶媒组和牙髓干细胞组右侧行髓芯减压术,牙髓干细胞组于股骨头减压孔注射牙髓干细胞,溶媒组同时注射同体积生理盐水,第4,5,6周共注射3次。第12周检测骨密度、骨形态学参数、空骨陷窝率、骨小梁面积比等指标。结果与结论:①影像学检查提示溶媒组和牙髓干细胞组治疗效果均较模型组有显著改善;与溶媒组比较,牙髓干细胞组骨体积分数、骨小梁数量、骨密度改善更明显,差异有显著性意义(P牙髓干细胞组空骨陷窝率和骨小梁面积比与正常对照组更为接近,溶媒组空骨陷窝率高于正常对照组(P牙髓干细胞组空骨陷窝率明显低于模型组(P牙髓干细胞联合髓芯减压治疗早期股骨头坏死优于单纯髓芯减压。

关键词：干细胞牙髓干细胞髓芯减压激素型股骨头坏死兔病理动物模型

白藜芦醇在人牙髓干细胞成牙本质向分化中的调控机制研究

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上海口腔医学 2023年第2期32卷 132-136页

作者：李宗谕李晓琳尉鹏功曲柳仇丽鸿于雅琼中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科辽宁省口腔疾病重点实验室辽宁沈阳110002

目的:探讨白藜芦醇是否通过上调沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)的表达并激活β-catenin信号通路,从而促进人牙髓干细胞(DPSCs)成牙本质向分化。方法:不同浓度白藜芦醇(0、10、15、20、50μmol/L)作用于DPSCs ... 详细信息

目的:探讨白藜芦醇是否通过上调沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)的表达并激活β-catenin信号通路,从而促进人牙髓干细胞(DPSCs)成牙本质向分化。方法:不同浓度白藜芦醇(0、10、15、20、50μmol/L)作用于DPSCs 7天和14天后,利用CCK-8法检测细胞增殖活性。在15μmol/L白藜芦醇作用下,成牙本质向分化诱导培养DPSCs 7天后,检测碱性磷酸酶(ALP)活性;采用实时定量反转录PCR(qRT-PCR)检测Runt相关转录因子2(Runx2)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)和牙本质基质蛋白1(DMP-1)的mRNA表达情况;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测DPSCs分化诱导不同时间(0、3、5、7、14天)后SIRT1的蛋白表达情况。15μmol/L白藜芦醇作用下分化诱导培养DPSCs 7天后,检测SIRT1和活化β连环蛋白(β-catenin)表达水平。采用GraphPad Prism 9软件包对数据进行统计学分析。结果:15μmol/L白藜芦醇对DPSCs 7天和14天的增殖活性无明显影响;15μmol/L白藜芦醇促进DPSCs的成牙本质向分化,上调Runx2、DSPP和DMP-1的mRNA表达。DPSCs分化诱导7天时,SIRT1蛋白表达量最大;15μmol/L白藜芦醇作用下分化诱导DPSCs 7天时,SIRT1及活化β-catenin蛋白表达显著增加。结论:白藜芦醇通过上调SIRT1蛋白表达并激活β-catenin信号通路,促进人DPSCs成牙本质向分化。

关键词：白藜芦醇牙髓干细胞成牙本质向分化沉默信息调节因子1 β连环蛋白