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口腔医学 2017年第11期37卷 965-968页

作者：李功臣胡凌玮许婷婷孙瑶同济大学口腔医学院.同济大学附属口腔医院种植科上海牙组织修复与再生工程技术研究中心上海200072

目的通过免疫组织化学方法观察小鼠牙本质生成过程中Osterix(Osx)的表达变化,探索其功能及意义。方法取小鼠不同年龄段及建立修复性牙本质模型的下颌骨,石蜡包埋切片后分别进行HE染色和免疫组织化学染色。结果在钟状期晚期,Osx在牙尖处... 详细信息

目的通过免疫组织化学方法观察小鼠牙本质生成过程中Osterix(Osx)的表达变化,探索其功能及意义。方法取小鼠不同年龄段及建立修复性牙本质模型的下颌骨,石蜡包埋切片后分别进行HE染色和免疫组织化学染色。结果在钟状期晚期,Osx在牙尖处成牙本质细胞核内表达。小鼠出生后3 d,Osx在牙冠的全部成牙本质细胞核内高表达。2周龄小鼠,冠部成牙本质细胞核内几乎不表达Osx,磨牙根部成牙本质细胞核内Osx高表达。牙尖磨损建模7 d后,Osx在成牙本质细胞核内表达升高,14 d时表达量下降。结论 Osx在促进成牙本质生成和修复过程中发挥作用。

关键词： Osterix 成牙本质细胞牙本质生成修复性牙本质小鼠

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成牙本质细胞中上游刺激因子1对骨桥素表达调控的研究

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中华口腔医学杂志 2007年第11期42卷 663-664页

作者：吴礼安文玲英杨富生王小竞第四军医大学口腔医学院儿童口腔科西安710032

目的检测成牙本质细胞中上游刺激因子1(upstream stimulatory factor 1,USF1)对骨桥素表达的影响。方法培养成牙本质细胞 MDPC-23,稳定转染 PCMV-USF1和酸性-USF(A-USF)质粒,提取总 RNA,半定量反转录聚合酶链反应检测骨桥素的表达水平,... 详细信息

目的检测成牙本质细胞中上游刺激因子1(upstream stimulatory factor 1,USF1)对骨桥素表达的影响。方法培养成牙本质细胞 MDPC-23,稳定转染 PCMV-USF1和酸性-USF(A-USF)质粒,提取总 RNA,半定量反转录聚合酶链反应检测骨桥素的表达水平,并对结果进行统计学分析。结果筛选出稳定转染 USF1和 A-USF 的抗性克隆,USF1、A-USF 转染组和对照组骨桥素相对灰度比值分别为:60.33%±4.51%、229.33%±7.09%、110.00%±15.62%,转染组与对照组差异有统计学意义(P牙本质细胞骨桥素 mRNA 转录,该作用被 A-USF 部分阻断。

关键词：牙本质生成逆转录聚合酶链反应成牙本质细胞

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成牙本质细胞内牙本质涎蛋白被活性明胶酶酶切的研究

成牙本质细胞内牙本质涎蛋白被活性明胶酶酶切的研究

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作者：勾晓辉武汉大学

学位级别：硕士

牙本质涎磷蛋白(DSPP),由成牙本质细胞合成,合成后很快就被酶切为C端的牙本质磷蛋白(DPP)和N端的牙本质涎蛋白(DSP),且此酶切过程对其生物学功能的获得十分重要。牙本质涎蛋白,可被其他的蛋白酶进一步被酶切成小分子蛋白片段,并且其N端... 详细信息

牙本质涎磷蛋白(DSPP),由成牙本质细胞合成,合成后很快就被酶切为C端的牙本质磷蛋白(DPP)和N端的牙本质涎蛋白(DSP),且此酶切过程对其生物学功能的获得十分重要。牙本质涎蛋白,可被其他的蛋白酶进一步被酶切成小分子蛋白片段,并且其N端和C端片段在牙本质中的分布模式不同。在成牙本质细胞系MO6-G3的细胞裂解液中,不仅存在牙本质涎蛋白的全长形式,而且还有分子量处于25-65kDa之间的多种牙本质涎蛋白片段存在。明胶酶(包括基质金属蛋白酶9和2),属于基质金属蛋白酶家族,在许多生理和病理活动中发挥重要作用。以非活性酶原形式分泌到细胞外的明胶酶被其他蛋白酶激活后获得酶切活性,然后活性明胶酶通过降解某些细胞外基质成分来发挥作用。近来有文献报道,活性明胶酶能够酶切某些细胞内底物蛋白。那么,成牙本质细胞内内存在活性基质金属蛋白酶9(MMP9)的机制是什么?弗林蛋白酶(FURIN),前体蛋白转化酶家族的成员之一,广泛存在于包括成牙本质细胞在内的机体多种类型细胞内,在胚胎发育过程中作用十分关键。弗林蛋白酶可识别前体蛋白的(K/R)-(X)n-(K/R)(X是除精氨酸外的其他任何氨基酸,n=0,2,4,6)序列并酶切,从而通过激活或者失活下游的前体蛋白来发挥作用。对基质金属蛋白酶9(MMP9)的前体蛋白进行氨基酸序列分析后发现,在其前肽和活性酶结构域间存在着弗林蛋白酶的识别序列(K/R)-(X)n-(K/R),且基质金属蛋白酶9与弗林蛋白酶在成牙本质细胞内存在相互结合。在此论文中,将会探索成牙本质细胞内牙本质涎蛋白被活性明胶酶酶切及成牙本质细胞内存在活性MMP9的机制。第一部分:成牙本质细胞内牙本质涎蛋白被活性明胶酶酶切的研究目的:证明在成牙本质细胞内,牙本质涎蛋白可被活性明胶酶酶切。材料与方法:1.取新生小鼠的磨牙牙乳头细胞培养,矿化诱导液诱导分化为成牙本质细胞。2.分离出生后1天、3天、7天小鼠下颌组织,固定、脱矿、石蜡包埋后切片。对小鼠下颌组织切片及爬片上生长的成牙本质细胞进行免疫荧光实验,确定牙本质涎蛋白和明胶酶在成牙本质细胞内的表达模式,以及探索二者是否在细胞内存在共定位。3.原位邻接技术检测成牙本质细胞内牙本质涎蛋白和明胶酶的结合情况。4.明胶酶谱实验和原位明胶酶谱实验检测成牙本质细胞内明胶酶的表达情况。5.将生长密度相同的成牙本质细胞随机分成四组,在各组培养液中分别加入DMSO、MMP9抑制剂、基质金属蛋白酶2(MMP2)抑制剂及广谱基质金属蛋白酶抑制剂,置于培养箱中培养8h。相同生长密度的Mmp9-/-小鼠成牙本质细胞在相同条件下培养相同时间,然后分别收集以上各组细胞的胞内总蛋白,Western Blot技术检测成牙本质细胞内牙本质涎蛋白的表达变化。结果:1.在小鼠下颌组织中,明胶酶广泛表达于成牙本质细胞层,牙乳头细胞及周围的牙槽骨中。2.牙本质涎蛋白分别与MMP9或MMP2在成牙本质细胞内存在共定位。3.成牙本质细胞内,牙本质涎蛋白与明胶酶存在结合。4.成牙本质细胞内有明胶酶表达,且细胞内的明胶酶有活性蛋白酶和非活性酶原两种形式。5.培养液中加入不同抑制剂培养后,成牙本质细胞内的牙本质涎蛋白表达模式不同。在Mmp9-/-小鼠的成牙本质细胞内,以及加入MMP9抑制剂、MMP2抑制剂、广谱基质金属蛋白酶抑制剂培养的野生型小鼠的成牙本质细胞内,高分子量(>100kDa)牙本质涎蛋白的含量增加,且高分子量DSP蛋白(100kDa)/低分子量蛋白(牙本质细胞组。结论:成牙本质细胞内存在活性的MMP9和MMP2蛋白酶,且二者参与了成牙本质细胞内牙本质涎蛋白的酶切。第二部分:成牙本质细胞内存在活性MMP9的机制初步探究目的:探究成牙本质细胞内存在活性基质金属蛋白酶9的机制材料与方法:1.免疫组化实验检测弗林蛋白酶(FURIN)在出生后1天和7天小鼠磨牙组织中的表达情况。2.免疫荧光实验检测成牙本质细胞内FURIN与MMP9的共定位情况。3.免疫共沉淀实验检测成牙本质细胞内FURIN与MMP9的结合情况。4.将RVKR抑制剂加入至培养基中,用于抑制成牙本质细胞内的FURIN活性,Western Blot实验检测成牙本质细胞内MMP9的变化情况。结果:1.FURIN恒定广泛的表达于成牙本质细胞层、牙囊细胞、牙乳头细胞及周围的牙槽骨中,但其在成牙本质细胞内的表达水平高于其他部位。2.成牙本质细胞内,FURIN与MMP9的表达部位存在重合。3.成牙本质细胞内,FURIN与MMP9存在结合。4.RVKR抑制FURIN活性后,成牙本质细胞内活性MMP9蛋白酶的表达量降低,且MMP9酶原/活性MMP9蛋白酶的比值增加。结论:FURIN参与了成牙本质细胞内MMP9酶原的活化

关键词：牙本质涎蛋白明胶酶弗林蛋白酶成牙本质细胞牙本质生成

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MDM2通过泛素化Dlx3和p53来调控成牙本质细胞分化

MDM2通过泛素化Dlx3和p53来调控成牙本质细胞分化

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2019年中华口腔医学会儿童口腔医学专业委员会儿童口腔...

作者：袁国华武汉大学口腔医学院

Murine double minute 2 (Mdm2)是一个重要的E3泛素连接酶,在成牙本质细胞分化中的作用尚不清楚。本研究发现Mdm2在成牙本质细胞中高表达,在小鼠切牙和磨牙牙乳头细胞中少量表达。进一步的研究证实Mdm2可促进小鼠成牙本质细胞样细胞向... 详细信息

Murine double minute 2 (Mdm2)是一个重要的E3泛素连接酶,在成牙本质细胞分化中的作用尚不清楚。本研究发现Mdm2在成牙本质细胞中高表达,在小鼠切牙和磨牙牙乳头细胞中少量表达。进一步的研究证实Mdm2可促进小鼠成牙本质细胞样细胞向分化。Mdm2与成牙本质细胞重要的转录因子Dlx3在细胞核内共表达并结合,从而单泛素化Dlx3并增强其靶基因Dspp的表达。此外,p53在成牙本质细胞分化过程中被Mdm2泛素化并降解。基因敲低实验证实p53能抑制成牙本质细胞样细胞向分化。p53和Mdm2同时敲低可部分挽救Mdm2单独敲低对成牙本质细胞样细胞向分化的抑制作用。总之,该研究揭示了:(1)Mdm2单泛素化Dlx3,使成牙本质细胞分化特异性标记基因Dspp上调;(2)Mdm2泛素化降解p53,从而降低了p53对成牙本质细胞样细胞向分化的抑制作用。

关键词： Dlx3 p53 MDM2 成牙本质细胞分化牙本质生成

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纤毛转运蛋白IFT140在牙发育的中的作用

纤毛转运蛋白IFT140在牙发育的中的作用

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2017全国口腔生物医学学术年会

作者：李功臣刘蒙蒙张书凡万会璇张旗王佐林孙瑶同济大学附属口腔医院上海牙组织修复与再生工程技术研究中心

目的:初级纤毛是细胞表面的突起状细胞器,几乎存在于所有细胞表面,感受细胞外的力学、化学和生物信号。初级纤毛在器官发育中发挥重要的信号传递作用。初级纤毛由外部的纤毛膜和内部的轴丝骨架组成。经典Sonic Hedgehog(Shh)是与发育密... 详细信息

目的:初级纤毛是细胞表面的突起状细胞器,几乎存在于所有细胞表面,感受细胞外的力学、化学和生物信号。初级纤毛在器官发育中发挥重要的信号传递作用。初级纤毛由外部的纤毛膜和内部的轴丝骨架组成。经典Sonic Hedgehog(Shh)是与发育密切相关的重要信

关键词：牙齿发育纤毛转运蛋白IFT140 蛋白表达牙本质生成

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