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转染猿猴空泡病毒40大T抗原基因无限增殖化大鼠牙囊细胞的实验研究

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中华口腔医学杂志 2012年第10期47卷 631-636页

作者：周洁刘婷郑鸿宋锦璘邓锋重庆医科大学附属口腔医院正畸科·重庆市口腔疾病与生物医学研究中心 401147

目的以猿猴空泡病毒40大T抗原基因（simian virus 40 large tumor antigen，SV40Tag）转染SD大鼠牙囊细胞（rats’dental follicle cells，rDFC）构建无限增殖化rDFC，以期为牙周组织工程研究提供稳定的细胞来源。方法分离SD大鼠下颌第... 详细信息

目的以猿猴空泡病毒40大T抗原基因（simian virus 40 large tumor antigen，SV40Tag）转染SD大鼠牙囊细胞（rats’dental follicle cells，rDFC）构建无限增殖化rDFC，以期为牙周组织工程研究提供稳定的细胞来源。方法分离SD大鼠下颌第一磨牙牙胚，组织块法分离培养原代rDFC，免疫组织化学技术鉴定细胞来源。利用脂质体介导含有SV40Tag的质粒pSSR69-pAmpho转染293细胞，取病毒上清液感染rDFC，潮霉素筛选，阳性克隆扩大培养（无限增殖化组）；以未转染细胞作对照组，观察细胞形态，计算细胞群体倍增时间，绘制细胞生长曲线和倍增曲线。反转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT—PCR）检测rDFC中SV40Tag基因的表达，蛋白质印迹法检测端粒酶表达，计算平板克隆形成率，行软琼脂克隆形成实验及细胞致瘤性实验。对无限增殖化组和对照组细胞群体倍增时间采用两独立样本t检验，对两组细胞平板克隆形成率采用两独立样本率χ2检验。结果无限增殖化rDFC形态与正常rDFC形态无明显差别。无限增殖化rDFC中SV40Tag RT—PCR结果显示在357bp处有一条特异扩增条带，未转染细胞未见条带，无限增殖化rDFC端粒酶表达显著高于正常细胞。两组rDFC生长曲线无明显差异，倍增曲线显示无限增殖化组rDFC保持了较强的增殖能力。无限增殖化rDFC平板克隆形成率[34％（33／96）]高于对照组[22％（21／96）]，但差异无统计学意义（χ2=3．71，P〉0．05），软琼脂内不能形成克隆；两组细胞致瘤性实验均未见肿瘤形成。结论SV40Tag基因无限增殖化rDFC能在体外长期培养并多次传代，具有相对稳定的增殖特性和功能状态，为良性转化，有望进一步应用于牙周组织工程研究。

关键词：牙囊猴病毒40 组织工程大鼠无限增殖化

无翅型MMTV整合位点家族成员3在大鼠牙囊及牙囊细胞成骨分化中的表达

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中华口腔医学杂志 2013年第7期48卷 423-428页

作者：刘燕杜宇凌均棨项露赛中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓科·广东省口腔医学重点实验室广州510055

目的研究无翅型MMTV整合位点家族成员3 （wingless-type MMTV integration site family, member 3, Wnt3）在大鼠体内外牙囊中的表达，检测成骨诱导后Wnt3在大鼠牙囊细胞中的表达变化，探讨Wnt3在牙囊成骨分化中的作用。方法取出生后1、... 详细信息

目的研究无翅型MMTV整合位点家族成员3 （wingless-type MMTV integration site family, member 3, Wnt3）在大鼠体内外牙囊中的表达，检测成骨诱导后Wnt3在大鼠牙囊细胞中的表达变化，探讨Wnt3在牙囊成骨分化中的作用。方法取出生后1、3、5、7、9、11、13d的SD仔鼠各1只，引颈处死，切取下颌骨，取出生后各时间点的组织切片各3张作为实验组，阴性对照组以磷酸盐缓冲液代替一抗，滴加在出生后11d的组织切片上，其余处理同实验组。免疫组化检测Wnt3在大鼠体内牙囊中的表达。间接免疫荧光检测Wnt3在牙囊细胞内的表达和分布。茜素红染色检测成骨诱导后矿化结节的形成。蛋白质印迹法检测成骨诱导1、2、3周后牙囊细胞中Wnt3和p-联蛋白（3-eatenin）表达的变化。结果Wnt3在出生后第1、3天的大鼠牙囊组织内无明显表达，第5天开始出现阳性表达，并持续表达至第13天。免疫荧光检测显示Wnt3在牙囊细胞胞质中表达。成骨诱导后牙囊细胞分化为成骨细胞，形成矿化结节，茜素红染色阳性。成骨诱导第1周Wnt3蛋白表达（2．60±0．04）较阴性对照组（1．00±0．00）显著增加（P〈0．05），并随着诱导时间的延长Wnt3表达逐渐减少，至第3周Wnt3在成骨诱导组表达水平（1．00±0．05）与阴性对照组基本相等，差异无统计学意义（P〉0．05）。β-联蛋白在成骨诱导1、2、3周后表达增加（分别为1．95±0．05、9．77±0．65、1．75±0．21），与阴性对照组（1．00±0．00）相比差异均有统计学意义（P〈0．05），并在第2周达峰值（9．77±0．65），后逐渐降低。结论Wnt3在体内外大鼠牙囊中表达，成骨诱导早期牙囊细胞中Wnt3表达明显增加，提示Wnt3可能参与牙囊细胞的早期成骨向分化；Wnt3和β-联蛋白在成骨诱导过程中表达水平的差异提示Wnt3可能与其他因子或信号通路成分相互作用，调控β-联蛋白的表达，参与牙囊细胞的成骨向分化。

关键词： WNT蛋白质类牙囊 β-联蛋白成骨分化

牙囊在埋伏上颌中切牙唇侧微创开放式牵引中的作用探讨

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华西口腔医学杂志 2023年第2期41卷 197-202页

作者：黄佳玥刘显王艳包崇云口腔疾病研究国家重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、四川大学华西口腔医院成都610041

目的总结既往上前牙区埋伏牙开放式牵引方法的基础上,报告一种基于牙囊的软组织处理技术,并监测治疗后埋伏牙牙根长度变化和牙槽骨丢失量,探讨牙囊在埋伏上颌中切牙唇侧微创开放式牵引中的重要作用。方法选择单侧唇侧埋伏上颌中切牙并... 详细信息

目的总结既往上前牙区埋伏牙开放式牵引方法的基础上,报告一种基于牙囊的软组织处理技术,并监测治疗后埋伏牙牙根长度变化和牙槽骨丢失量,探讨牙囊在埋伏上颌中切牙唇侧微创开放式牵引中的重要作用。方法选择单侧唇侧埋伏上颌中切牙并采用开放式牵引技术治疗的患者,将埋伏中切牙纳入试验组,将对侧未受影响的中切牙纳入对照组。在外科手术暴露埋伏上颌中切牙时,利用埋伏牙周围的牙囊组织进行术区软组织管理,最大程度地保存埋伏牙周围软硬组织量。在埋伏上颌中切牙牵引至平面后,记录其牙长、根长、骨丢失量、骨厚度等测量值。结果成功牵引了17例单侧唇侧埋伏上颌中切牙。牵引后试验组与对照组之间,牙长、根长、唇侧骨丢失量的差异有统计学意义(P0.05)。结论在外科手术暴露唇侧埋伏上颌中切牙时,本方法利用埋伏牙周围的牙囊组织进行术区软组织管理,最大程度地保存埋伏牙周围软硬组织量,尽可能在牵引萌出后获得更好的美学效果和健康的牙周组织。

关键词：微创开放式牵引外科技术牙囊阻生牙

下颌埋伏第三磨牙拔除后残余牙囊对邻牙牙周健康影响的研究

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中华口腔医学杂志 2024年第8期59卷 784-790页

作者：李婷婷王超凡蔡育李志政赵吉宏武汉大学口腔医(学)院口颌系统重建与再生全国重点实验室、口腔生物医学教育部重点实验室口腔医学、湖北省重点实验室武汉430079 苏州大学附属口腔医院·苏州口腔医院口腔颌面外科苏州215000

目的探讨下颌埋伏第三磨牙拔除后牙槽窝内残余牙囊是否对邻牙牙周健康产生影响,为第三磨牙拔除后残余牙囊的处理提供临床参考。方法研究前瞻性纳入2020年11月1日至2022年11月30日就诊于武汉大学口腔医(学)院口腔颌面外科并拔除双侧下颌... 详细信息

目的探讨下颌埋伏第三磨牙拔除后牙槽窝内残余牙囊是否对邻牙牙周健康产生影响,为第三磨牙拔除后残余牙囊的处理提供临床参考。方法研究前瞻性纳入2020年11月1日至2022年11月30日就诊于武汉大学口腔医(学)院口腔颌面外科并拔除双侧下颌埋伏第三磨牙的患者82例。采用自身对照,将每例患者双侧下颌第三磨牙根据随机数字表法随机分为A组(拔除第三磨牙并彻底刮除残余牙囊组织)和B组(拔除第三磨牙后不对留存的牙囊组织作任何处理)。记录手术时间及不良反应。术后6个月随访对两组患者进行临床及影像学检查,评估双侧下颌第二磨牙的牙周指标及牙槽骨高度,比较两组间有无差异。结果所有患者的双侧下颌第三磨牙均成功拔除,均未发生出血、创口感染、干槽症、下唇麻木等不良反应,两组手术时间、术后疼痛及面部肿胀差异均无统计学意义(P>0.05)。术后6个月时,A组第二磨牙远中探诊深度[2.67(2.00,3.67)mm]显著小于B组[4.00(3.00,5.00)mm](Z=-6.55,P0.05)。结论下颌埋伏第三磨牙拔除后牙槽窝内残余牙囊可对邻牙的牙周健康产生不良影响;拔除下颌埋伏第三磨牙术中刮除残余牙囊有利于术后第二磨牙远中牙槽骨高度的恢复,尤其是20岁以上的患者。

关键词：下颌骨磨牙,第三牙,阻生牙囊邻牙牙槽骨牙周组织

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成体人牙囊细胞的分离培养及生物学特性研究

中华口腔医学杂志 2013年第2期48卷 96-101页

作者：张超程祥荣武汉大学口腔医学院口腔基础医学省部共建国家重点实验室培育基地和口腔生物医学教育部重点实验室 430079

目的从成体人牙囊组织中分离培养牙周组织的前体细胞及牙囊细胞并进行生物学特性评价，分析牙囊细胞作为牙周组织工程种子细胞的可能性。方法用胶原酶消化联合组织块培养的方法从17～22岁拔牙患者完全埋伏阻生的第三磨牙牙囊中分离培养... 详细信息

目的从成体人牙囊组织中分离培养牙周组织的前体细胞及牙囊细胞并进行生物学特性评价，分析牙囊细胞作为牙周组织工程种子细胞的可能性。方法用胶原酶消化联合组织块培养的方法从17～22岁拔牙患者完全埋伏阻生的第三磨牙牙囊中分离培养牙囊细胞，用有限稀释法检测牙囊细胞的克隆形成能力，免疫组化检测牙囊细胞中基质细胞抗原1（Stro-1）、缺刻蛋白1（Notch．1）、巢蛋白（nestin）的表达。将牙囊细胞分别经矿化、脂肪化、软骨化诱导培养后检测其多向分化能力。甲基噻唑基四唑（methylthiazoloyltetrazolium，MTY）法比较牙囊细胞和牙周膜细胞（periodontalligamentcell，PDLC）的增殖能力。反转录PCR（reversetranscriptase—PCR，RT—PCR）检测比较牙囊细胞和PDLC中生腱蛋白N（tenascin—N）和细胞外基质底物反应蛋白1（F-spondin）基因的表达。结果牙囊细胞大多数为梭形成纤维样细胞，具有克隆形成能力，克隆形成率为3．70％。牙囊细胞中部分细胞Stro—1表达阳性、几乎所有细胞Notch—1巢蛋白均表达阳性。牙囊细胞经矿化、脂肪化、软骨化诱导培养21d后，可分别形成矿化结节、细胞内脂滴及Ⅱ型胶原。MTT结果显示，牙囊细胞和PDLC在孔板中均生长良好，增殖迅速。培养第3天和第5天，牙囊细胞增殖能力[A值分别为（0．20±0．01）、（0．51±0．09）]均大于PDLC[A值分别为（0．16±0．03）、（0．47±0．07）]，但差异无统计学意义（P〉0．05）；第7天时，牙囊细胞增殖能力[A值为（1．03±0．11）]显著高于PDLC[A值为（0．93±0．09）]，差异有统计意义（P〈0．05）。RT—PCR结果显示：tenascin—N在牙囊细胞中几乎无表达，而在PDLC中有较强表达；F—spondin在牙囊细胞中强阳性表达，在PDLC中无表达。结论胶原酶消化联合组织块培养的方法为培养牙囊细胞的适宜方法；牙囊细胞具有良好的细胞活性，为外胚间充质来源的混合细胞，其中含有干细胞特性的具有多向分化潜能的牙囊细胞，有作为组织工程种子细胞的可能，为运用于牙周组织再生提供了实验依据。

关键词：牙囊干细胞细胞培养技术组织工程

热休克蛋白25在大鼠牙囊细胞中的表达及生物学意义

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中华口腔医学杂志 2009年第8期44卷 492-496页

作者：杜宇凌均棨谷海晶龚启梅谢楠中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓科中山大学口腔医学研究所广州510055

目的检测不同出生时间段以及体外培养大鼠牙囊细胞中热休克蛋白25（heatshock protein25，HSP-25）的表达，探讨其对牙囊细胞增殖和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性的影响，进一步了解HSP-25在牙齿发育中的作用。方法免疫... 详细信息

目的检测不同出生时间段以及体外培养大鼠牙囊细胞中热休克蛋白25（heatshock protein25，HSP-25）的表达，探讨其对牙囊细胞增殖和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性的影响，进一步了解HSP-25在牙齿发育中的作用。方法免疫组化法检测HSP-25在出生后第1、3、5、7、9、11天的SD大鼠下颌第一磨牙牙囊中的表达情况；间接免疫荧光法检测HSP-25在体外培养的大鼠牙囊细胞中的表达；甲基噻唑基四唑（MTT）法和流式细胞术分别检测不同质量浓度的重组鼠HSP-25刺激牙囊细胞增殖及细胞周期的变化，并检测ALP活性的变化。结果HSP-25在出生早期大鼠牙囊细胞内不表达或弱表达，第5天时表达增强并维持到第11天。HSP-25在牙囊细胞的胞质中呈阳性表达。MTF法结果显示不同质量浓度的HSP-25刺激牙囊细胞1、2、3d后细胞增殖无明显差异，流式细胞仪结果显示0和100μg/L HSP-25刺激牙囊细胞3d后细胞周期无明显差异。50和100μg／L HSP-25刺激牙囊细胞9d后ALP活性达到最高[A值分别为（1．6±0．3）、（1．8±0．2）]。结论HSP-25在出生早期的大鼠牙囊细胞中无表达，之后随时间变化表达逐渐增强；HSP-25在体外培养的大鼠牙囊细胞胞质中表达；不同质量浓度HSP-25对大鼠牙囊细胞增殖无影响，高质量浓度HSP-25可刺激牙囊细胞ALP活性增高。

关键词：牙囊细胞增殖碱性磷酸酶热休克蛋白25

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小鼠牙囊细胞的体外培养及表型特征

华西口腔医学杂志 2005年第5期23卷 415-417页

作者：葛少华杨丕山赵宁李纾山东大学口腔医院牙周病科山东济南250012

目的建立小鼠牙囊细胞(DFC)的体外分离培养方法,研究牙囊细胞的表型特征。方法用1%的胰蛋白酶消化分离9 d龄Balb/c小鼠的下颌第一磨牙牙胚的牙囊组织进行体外培养,倒置显微镜下观察细胞的形态,扫描电镜观察细胞的表面形貌,SP免疫组化法... 详细信息

目的建立小鼠牙囊细胞(DFC)的体外分离培养方法,研究牙囊细胞的表型特征。方法用1%的胰蛋白酶消化分离9 d龄Balb/c小鼠的下颌第一磨牙牙胚的牙囊组织进行体外培养,倒置显微镜下观察细胞的形态,扫描电镜观察细胞的表面形貌,SP免疫组化法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)、骨桥蛋白(OPN)的表达。结果分离培养的细胞有3种类型:立方形或多角形;长梭形;非常细长的细胞形状。扫描电镜下细胞具有多形性,有大量的线状胞浆突和微绒毛;根据细胞表面有无纤维细丝覆盖,可将细胞分为有纤维细丝、无纤维细丝两个亚群。免疫组化染色显示部分牙囊细胞的ALP、BSP、OPN的表达阳性。结论牙囊细胞具有多种细胞的表型特征,有分化为成牙骨质细胞、牙周膜细胞和成骨细胞的潜能。

关键词：牙囊碱性磷酸酶骨桥蛋白骨涎蛋白

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大鼠牙囊细胞集落刺激因子1受体的研究

中华口腔医学杂志 2003年第6期38卷 435-437,C006页

作者：谷海晶凌均棨中山大学光华口腔医学院牙体牙髓科广州510055

目的　研究不同浓度集落刺激因子 1(colony stimulatingfactor 1,CSF 1)、白细胞介素 1α(interleukin 1α ,IL 1α)对大鼠牙囊细胞CSF 1受体基因表达的影响 ;明确CSF 1自分泌作用的抑制机制 ,为研究细胞因子在牙齿萌出和牙槽骨吸收中... 详细信息

目的　研究不同浓度集落刺激因子 1(colony stimulatingfactor 1,CSF 1)、白细胞介素 1α(interleukin 1α ,IL 1α)对大鼠牙囊细胞CSF 1受体基因表达的影响 ;明确CSF 1自分泌作用的抑制机制 ,为研究细胞因子在牙齿萌出和牙槽骨吸收中的作用奠定基础。方法　间接免疫酶标法检测体外培养牙囊细胞 ,以及出生后不同时期牙囊组织中CSF 1受体蛋白表达。逆转录多聚酶链反应法 (RT PCR)检测在细胞培养液中分别加入不同浓度CSF 1、IL 1α对牙囊细胞CSF 1受体基因表达的影响。结果　间接免疫酶标法染色显示CSF 1受体蛋白在生后早期牙囊中染色明显 ,10d后染色不明显或者完全无染色 ,高浓度CSF 1作用下 ,牙囊细胞CSF 1受体mRNA表达明显消失。不同浓度IL 1α作用后 ,CSF 1受体mRNA水平保持不变。结论　CSF 1受体蛋白在出生后早期牙囊中表达明显 ,随后逐渐消失。高浓度CSF 1抑制CSF 1受体基因的表达 ,不同浓度IL 1α对牙囊细胞CSF 1受体mRNA表达无影响。

关键词：大鼠牙囊细胞集落刺激因子1 CSF-1 白细胞介素1α IL-1α 免疫定位

无翅型MMTV整合位点家族成员5A/受体酪氨酸激酶样孤儿受体2在大鼠牙囊细胞中的表达及其意义

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华西口腔医学杂志 2016年第4期34卷 341-345页

作者：王丽萍李伯琦王琪铁晓敏刘奕杉新疆医科大学第一附属医院儿童口腔科-口腔预防科乌鲁木齐830000

目的：观察在牙齿正常萌出过程中无翅型MMTV整合位点家族成员5A（Wnt5A）/受体酪氨酸激酶样孤儿受体2（Ror2）信号在大鼠体内外牙囊细胞表达的特点，探讨其与成熟破骨细胞形成及牙齿萌出的相关性。方法分离出生后1-13 d的SD大鼠下颌骨... 详细信息

目的：观察在牙齿正常萌出过程中无翅型MMTV整合位点家族成员5A（Wnt5A）/受体酪氨酸激酶样孤儿受体2（Ror2）信号在大鼠体内外牙囊细胞表达的特点，探讨其与成熟破骨细胞形成及牙齿萌出的相关性。方法分离出生后1-13 d的SD大鼠下颌骨，苏木精-伊红染色观察牙囊及牙槽骨生长发育过程，免疫组织化学法观察在下颌第一磨牙萌出过程中Wnt5A和Ror2在牙囊细胞中的表达。体外培养出生后5-6 d的SD大鼠第一磨牙牙囊细胞，免疫组织化学法观察Wnt5A、Ror2在牙囊细胞中的表达。结果SD大鼠出生后第2天牙囊开始分化为牙周组织，1-3 d牙槽骨变化不明显，第4天起，破骨细胞数量明显增多。Wnt5A在出生后第1-3天的大鼠牙囊组织内无明显表达，第4天开始出现阳性表达，并持续表达至第13天。Ror2在出生后第1-3天的大鼠牙囊组织表达呈强阳性，而在第4-13天呈弱阳性。结论 Wnt5A、Ror2在牙萌出过程中有特定的时间分布，提示其可能参与牙齿萌出的调控。

关键词：受体酪氨酸激酶样孤儿受体2 牙囊破骨细胞