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天蚕素A-爪蟾素2杂合肽P18对MDA-MB-435s乳腺癌细胞的作用研究

四川动物 2010年第1期29卷 41-44页

作者：孙彬斌赵晓军四川大学纳米生物医学技术与膜生物学研究所成都610041 Center of Biomedical Engineering NFA7-379Massachusetts Institute of TechnologyCambridgeMA02139-4307

目的研究天蚕素A-爪蟾素2杂合肽P18对体外培养的人类乳腺癌细胞株MDA-MB-435s的活性作用。方法采用MTT法检测P18对体外培养的MDA-MB-435s细胞增殖的影响;使用Live/Dead Viability/Cytotoxicity试剂盒对细胞进行染色,并在荧光显微镜下观... 详细信息

目的研究天蚕素A-爪蟾素2杂合肽P18对体外培养的人类乳腺癌细胞株MDA-MB-435s的活性作用。方法采用MTT法检测P18对体外培养的MDA-MB-435s细胞增殖的影响;使用Live/Dead Viability/Cytotoxicity试剂盒对细胞进行染色,并在荧光显微镜下观察细胞的存活状态;通过DiBAC4(3)染色,以荧光分光光度计检测给肽时细胞膜的膜电位变化;在透射电子显微镜下观察P18作用24h后细胞超微结构的变化。结果MTT试验表明P18对MDA-MB-435s细胞的增殖具有浓度依赖性的抑制作用;荧光显微镜下可观察到P18可以使MDA-MB-435s细胞膜破损,细胞死亡;P18作用时,荧光分光光度计检测到MDA-MB-435s的细胞膜发生了去极化现象;透射电子显微镜下可见大量细胞崩解坏死。结论杂合肽P18能够引起MDA-MB-435s细胞膜的通透性改变而导致细胞坏死。

关键词： P18 天蚕素A 爪蟾素2 乳腺癌细胞MDA—MB-435s 细胞膜通透性

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源自天蚕素A和爪蟾素2的杂合肽P18体外抑制内皮细胞血管生成

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四川动物 2009年第5期28卷 661-664页

作者：邵喜明赵晓军四川大学纳米生物医学技术与膜生物学研究所成都610041

目的探讨杂合肽P18体外对内皮细胞EA.hy926血管生成的抑制作用。方法采用MTT法检测P18对EA.hy926细胞增殖的影响;应用Matrigel实验检测P18对内皮细胞形成管状结构的影响;利用流式细胞术分析P18对内皮细胞的损伤作用。结果MTT结果显示P1... 详细信息

目的探讨杂合肽P18体外对内皮细胞EA.hy926血管生成的抑制作用。方法采用MTT法检测P18对EA.hy926细胞增殖的影响;应用Matrigel实验检测P18对内皮细胞形成管状结构的影响;利用流式细胞术分析P18对内皮细胞的损伤作用。结果MTT结果显示P18可明显抑制EA.hy926细胞的增殖,且抑制率存在剂量依赖性;Matrigel实验表明P18具有抑制EA.hy926细胞体外分化成管状结构的作用;流式结果显示15μMP18作用内皮细胞6h后,所诱导的细胞坏死比例达到81.4%。结论体外实验结果表明,杂合肽P18具有体外抑制EA.hy926细胞血管生成的作用。

关键词： P18 天蚕素A 爪蟾素2 内皮细胞EA.hy926 血管生成

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基于仿细胞膜体系抗菌肽膜渗透活性的实验和模拟研究

基于仿细胞膜体系抗菌肽膜渗透活性的实验和模拟研究

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作者：姜建功伊犁师范大学

学位级别：硕士

抗菌肽具有广谱抗菌性,同时还具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生理特性。相比于抗生素,抗菌肽凭借其独特的膜渗透活性机制,具有不易产生耐药性的巨大优势,应用前景广阔。深入探索抗菌肽膜渗透活性在不同膜物理性质下的响应是抗菌肽... 详细信息

抗菌肽具有广谱抗菌性,同时还具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生理特性。相比于抗生素,抗菌肽凭借其独特的膜渗透活性机制,具有不易产生耐药性的巨大优势,应用前景广阔。深入探索抗菌肽膜渗透活性在不同膜物理性质下的响应是抗菌肽得以广泛应用的重要前提。但遗憾的是,目前对于其中的分子作用机理尚不完全清楚。基于仿细胞膜模型探索抗菌肽膜渗透活性机理,可以避免潜在活性细胞过程的影响。在此,本论文以蜂毒肽(Melittin)和爪蟾素2(Magainin 2)作为抗菌肽模型,以单层巨囊泡(GUVs)为载体,可在光学显微镜下直接观察和操作,同时结合分子动力学模拟,通过对抗菌肽诱导囊泡的泄漏以及分子动力学模拟轨迹RMSD、RMSF等参数的分析,具体研究了磷脂电性和膜电位对抗菌肽膜渗透活性的影响。蜂毒肽靶向细胞膜具有非特异性,用蜂毒肽构建载药体系攻击肿瘤细胞的研究正在兴起。在本文第三章,我们分别以POPC和POPC/POPS(7:3)两种不同电性磷脂组分的GUVs作为蜂毒肽的靶向膜,获得蜂毒肽在仿正常细胞和仿肿瘤细胞两种不同电性磷脂刺激下的具体响应。研究得出,低浓度蜂毒肽诱导囊泡泄漏实验表明中性磷脂囊泡以孔模式为主泄漏,负电性磷脂囊泡以爆裂模式为主泄漏;高浓度蜂毒肽诱导囊泡泄漏实验表明负电性磷脂相较于中性磷脂可延迟蜂毒肽作用效果;蜂毒肽色氨酸残基荧光光谱表明囊泡膜表面蜂毒肽吸附量以及泄漏模式依赖于磷脂电性。此外推断了蜂毒肽对不同电性磷脂膜的渗透作用模型。爪蟾素2靶向细胞膜具有特异性,主要依靠静电力驱动才能与细胞膜结合。膜电位对爪蟾素2产生质膜损伤的影响是一个重要但不明确的过程。在本文第四章,为表征膜电位对爪蟾素2膜渗透活性的影响,我们以DOPG/DOPC/Gramicidin A(40:60:0.01)组分的GUVs作为抗菌肽的靶向膜,其中Gramicidin A用来替代细胞膜中的蛋白质离子通道,通过改变囊泡内外K的浓度,从而使GUVs产生不同的膜电位。研究发现,在膜电位的存在下,爪蟾素2可以诱导GUVs以孔模式实现高效率的泄漏,并且GUVs的孔形成速率常数与膜电位有关,其随膜负电位的增加而增加,这也表明膜负电位的存在有利于爪蟾素2膜渗透活性的表达。根据实验研究结果,在抗菌肽两态模型作用机制的基础上,进一步描述了膜电位对此过程的影响。将分子动力学模拟与实验相结合已经成为研究复杂生物过程的重要手段。在本文第五章,我们分别模拟了蜂毒肽在POPC和POPS磷脂双层上以及蜂毒肽穿过POPC和POPC/POPS(7:3)磷脂双层的过程,对比研究了磷脂电性对蜂毒肽膜渗透活性的影响。通过对模拟轨迹的分析发现蜂毒肽以平行构象吸附到磷脂膜时,蜂毒肽在磷脂膜上会发生偏移,且偏移量的大小与磷脂电性有关,并且蜂毒肽在负电性磷脂双层上的结构更加稳定。另外我们发现POPC/POPS磷脂双层相较于POPC磷脂双层刚性较强,蜂毒肽更难穿过POPC/POPS磷脂双层。最后对本文所做的工作进行了总结,并结合本文的研究结果对抗菌肽在未来的研究方向进行了展望。

关键词：蜂毒肽爪蟾素2 膜渗透活性泄漏分子动力学模拟

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