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烷化溶血磷脂体外净化多发性骨髓瘤的实验研究

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烷化溶血磷脂体外净化多发性骨髓瘤的实验研究

作者：黄春玲福建医科大学

学位级别：硕士

多发性骨髓瘤(MM)目前仍是一种难治性造血系统恶性肿瘤。大剂量化疗联合自体干细胞移植的应用明显提高了存活率，但存在着移植后复发的问题，这主要与回输移植物中含有残留的肿瘤细胞有关。为此有必要对移植物进行体外净化，清除残留的... 详细信息

多发性骨髓瘤(MM)目前仍是一种难治性造血系统恶性肿瘤。大剂量化疗联合自体干细胞移植的应用明显提高了存活率，但存在着移植后复发的问题，这主要与回输移植物中含有残留的肿瘤细胞有关。为此有必要对移植物进行体外净化，清除残留的肿瘤细胞。近年来研究认为，烷化溶血磷脂(ALP)是一种较为理想的净化药物，它可选择性地杀伤肿瘤细胞，而对正常的造血祖细胞影响甚小。本课题选用ET-18-OCH(ALP家族中应用最广的一员)作为MM体外净化的药物，处理U266细胞和MM骨髓细胞，研究ALP对骨髓瘤细胞的杀伤作用和骨髓净化效果，旨在为ALP用于MM的体外净化提供实验依据。本研究主要包括2个部分： (1)ET-18-OCH对U266细胞的抗肿瘤效应：不同浓度的ET-18-OCH与U266细胞作用一定时间后，收集这些细胞，进行细胞计数和集落形成实验(CFU-U266)观察ET-18-OCH对U266细胞的杀伤作用;通过形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞技术观察ET-18-OCH诱导细胞凋亡现象;利用RT-PCR、流式细胞技术检测U266细胞bcl-2、c-myc mRNA水平及蛋白表达率，以探讨ET-18-OCH杀伤U266细胞的作用机制。结果表明ET-18-OCH对U266细胞具有明显的细胞毒作用，并可抑制U266 Aq4K＃k＃ 99 gg：rff．m－－＄k＆1 ，zvxH 细胞集落的形成，这些作用均呈剂量和时间的依赖性;形态学特征及梯状DNA降解片段表明n－18个。还可诱导U266细胞发生凋亡，并具有时效关系：流式细胞技术检测实验组细胞凋亡率为N．53兑而对照组细胞未出现凋亡现象;RT干CR结果显示经ETl0。处理后U266细胞的 b＊七、旷叮cInRNA表达明显减少，分别减少了原来的86％和72协流式细胞技术检测结果显示U266细胞的BCI六儿仇yC蛋白水平也明显下降，阳性率分别下降了原来的 17％和 60儿门)ETl刁。对删骨髓的体外净化作用：MM患者骨髓细胞与75 u g／ml ET18－OCH。作用 4h后，利用流式细胞技术检狈 CD38”CD56”CD45－细胞数的变化、半巢式 PCR检测蛇H CDRlll基因的变化及粒－单核系造血祖细胞集落形成实验JFU－GM)研究 ET习十。对 W患者骨髓体外净化的效果;利用流式细胞技术检测正常骨髓CD34”细胞和 CFU｛M的变化分析ETl刁。对正常造血祖细胞的影响;利用RT干CR、流式细胞技术检测 MM ＄者骨髓细胞 bC刁、C皿 InRN及蛋白的变化，以探讨 ET－18－OCH。体外净化删的作用机末。结果表明 ET－18－OCH。可有效地杀伤骨髓瘤细胞，使删患者骨髓m38℃仍讥M5细胞及蛇HmRHI基因表达明显减少;但不影响删患者的造血功能，作用后删患者的CFU｛M 无明显变化。ET叫刁。对正常的造血祖细胞影响甚小，作用后正常骨髓CD34”细胞与CFU｛M均无明显变化;RT干CR、流式细胞技术检测结果显示经 ET－18－OCH。处理后删患者骨髓细胞的仇－2、c－myc。RNA水平及蛋白表达率均有所下降。结论：＊)ET、刁。可有效地杀伤U266细胞，并可通过下调k七、 C－IllyC InRNA及蛋白的表达，诱导U266细胞发生凋亡，具有显著的抗肿瘤效应。Q)ETIS个。可有效地杀伤骨髓瘤细胞，而对正常的造血祖细胞影响甚小，可用于MM患者骨髓的体外狰化。

关键词：烷化溶血磷脂 U266细胞系多发性骨髓瘤骨髓净化

bcl-2部分编码区的反义RNA促进烷化溶血磷脂诱导的白血病细胞凋亡

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中华内科杂志 2002年第1期41卷 48-49页

作者：林祥华陈志哲杨婷吕联煌福建医科大学附属协和医院福建省血液病研究所福州350001

bcl-2抗凋亡基因在白血病细胞株常有高表达，引起对化放疗的耐受，封闭该基因的转录和翻译都将诱导白血病细胞凋亡，且对化放疗敏感。本研究通过比较逆转录病毒载体介导的全部和部分编码区的bcl-2反义基因瞬时和稳定表达在对抗bcl-2作... 详细信息

bcl-2抗凋亡基因在白血病细胞株常有高表达，引起对化放疗的耐受，封闭该基因的转录和翻译都将诱导白血病细胞凋亡，且对化放疗敏感。本研究通过比较逆转录病毒载体介导的全部和部分编码区的bcl-2反义基因瞬时和稳定表达在对抗bcl-2作用、降低内源性bcl-2蛋白水平和对烷化溶血磷脂ET18-OCH3（ALP）诱导白血病细胞凋亡的影响的差异，探讨了短片段bcl-2反义RNA作用特点，以期为硫代寡聚脱氧核苷酸的治疗白血病和对ALP协同体外净化白血病细胞提供实验基础。

关键词：白血病细胞凋亡编码区 bcl-2 反义RNA 烷化溶血磷脂

烷化溶血磷脂ET-18-OCH3对K562细胞作用的研究

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细胞生物学杂志 2001年第2期23卷 98-102页

作者：石奇珍黄慧芳陈志哲吕联煌福建医科大学附属协和医院福建省血液病研究所福州350001

为研究烷化溶血磷脂ET-18-OCH3(ALP)的抗白血病效果,本文以K562细胞为研究对象,通过台盼蓝拒染法测定ALP作用后K562细胞的生长抑制率和生长曲线;甲基纤维素半固体培养法测定克隆原细胞的存活率;流式细胞仪检测K562细胞P210蛋白表达;RT-... 详细信息

为研究烷化溶血磷脂ET-18-OCH3(ALP)的抗白血病效果,本文以K562细胞为研究对象,通过台盼蓝拒染法测定ALP作用后K562细胞的生长抑制率和生长曲线;甲基纤维素半固体培养法测定克隆原细胞的存活率;流式细胞仪检测K562细胞P210蛋白表达;RT-PCR半定量法测定细胞的bcr-abl mRAN;采用流式细胞仪进行DNA分析以及电镜观察细胞形态学改变。结果显示,K562细胞经ALP处理后细胞生长明显受抑制,呈作用时间和剂量的依赖性,IC_(50)为31.6(24),22.3(48h),14.8(72h)μg/ml;细胞增殖速度显著降低,克隆原细胞存活曲线呈指数型,而正常对照组细胞的CFU-GM则未受影响;ALP还可使K562细胞P210及bcr-abl mRNA水平下调,并有诱导细胞凋亡的作用。说明ALP对K562细胞生长具有明显抑制作用,并有诱导细胞凋亡作用,提示ALP具有一定的抗白血病效应。

关键词：烷化溶血磷脂 ET-18-OCH3 K562细胞抗肿瘤作用

烷化溶血磷脂体外净化多发性骨髓瘤的实验研究

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福建医科大学学报 2003年第2期37卷 132-132页

作者：黄春玲陈志哲王少元陈君敏刘庭波临床检验诊断学

目的　选用 ET- 18- OCH3作为多发性骨髓瘤 (MM)体外净化的药物 ,处理 U2 6 6细胞和 MM骨髓细胞 ,研究 AL P对骨髓瘤细胞的杀伤作用和骨髓净化效果 ,为 AL P用于 MM的体外净化提供实验依据。研究包括 2个部分 :(1) ET- 18- OCH3对 U2 6 ... 详细信息

目的　选用 ET- 18- OCH3作为多发性骨髓瘤 (MM)体外净化的药物 ,处理 U2 6 6细胞和 MM骨髓细胞 ,研究 AL P对骨髓瘤细胞的杀伤作用和骨髓净化效果 ,为 AL P用于 MM的体外净化提供实验依据。研究包括 2个部分 :(1) ET- 18- OCH3对 U2 6 6细胞的抗肿瘤效应　方法　不同浓度 ET- 18- OCH3与 U2 6 6细胞作用一定时间 ,收集细胞 ,进行计数和集落形成实验 (CFU- U2 6 6 )观察 ET- 18- OCH3对 U 2 6 6细胞的杀伤作用 ;通过形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞技术观察ET- 18- OCH3诱导细胞凋亡现象 ;利用 RT- PCR、流式细胞技术检测 U2 6 6细胞 bcl- 2 ,c- myc m RNA水平及蛋白表达率 ,探讨 ET- 18- OCH3杀伤 U2 6 6细胞的作用机制。　结果　 ET-18- OCH3对 U2 6 6细胞具有明显的细胞毒作用 ,并可抑制U2 6 6细胞集落的形成 ,这些作用呈剂量和时间的依赖性 ;形态学特征及梯状 DNA降解片段表明 ET- 18- OCH3;还可诱导U2 6 6细胞发生凋亡 ,并具有时效关系 ;流式细胞技术检测实验组细胞凋亡率为 17.5 3% ,而对照组细胞未出现凋亡现象 ;RT- PCR显示经 ET- 18- OCH3处理后 U 2 6 6细胞的 bcl- 2 ,c-myc RNA表达明显减少 ,分别减少了原来的 86 %和 72 % ;流式细胞技术检测 U 2 6 6细胞的 Bcl- 2、C- myc蛋白水平明?

关键词：烷化溶血磷脂 U266细胞系多发性骨髓瘤骨髓净化