检索结果-南通市图书馆

作者：高璇山东大学

学位级别：硕士

研究背景自身免疫性肝炎(Autoimmune hepatitis,AIH)是一种T细胞介导的肝脏疾病,在全球所有种族人群中都有发生,其发病率和患病率在世界范围内呈增加趋势。AIH的具体病因并不明确,目前认为是免疫、遗传和环境因素相互作用引起,其起病隐... 详细信息

研究背景自身免疫性肝炎(Autoimmune hepatitis,AIH)是一种T细胞介导的肝脏疾病,在全球所有种族人群中都有发生,其发病率和患病率在世界范围内呈增加趋势。AIH的具体病因并不明确,目前认为是免疫、遗传和环境因素相互作用引起,其起病隐匿且治疗效果不理想。刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)动物模型是近年来应用最广泛的研究AIH的体内实验模型之一。烯丙基甲基二硫(Allyl methyl disulfide,AMDS)是大蒜中的一种有机硫化物,有研究表明AMDS对对乙酰氨基酚诱导的肝损伤有保护作用,但AMDS是否能预防AIH目前未见报道。炎症是AIH的主要表现,巨噬细胞激活在炎性的发生发展中发挥了核心作用。核因子κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)是一种参与炎症反应的重要转录因子,也是介导巨噬细胞M1型活化的关键转录因子。同时NF-κB也是NLR家族PYRIN 域蛋白 3(NLR family pyrin domain containing protein 3,NLRP3)炎症小体激活的启动信号的中心介质。研究目的1.筛选出对ConA诱导的肝损伤最敏感的小鼠品系。2.对AMDS进行急性毒性评价,根据AMDS的经口 LD50确定AMDS给药剂量。3.通过体内实验和体外实验研究AMDS预处理对ConA诱导的肝损伤的保护作用,并以调控巨噬细胞极化和NLRP3炎性小体活化为切入点探讨其相关分子机制。研究方法1.筛选对ConA敏感的小鼠品系和性别:ICR小鼠、Balb/c小鼠和C57BL/6J小鼠各32只,雌雄各半,分别分为雄性对照组、雄性模型组、雌性对照组和雌性模型组。模型组小鼠尾静脉注射12 mg/kg的ConA诱导急性肝损伤,对照组注射同等体积生理盐水;8h后处死小鼠,分离肝脏,计算肝脏系数,检测血清中丙氨酸氨基转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphates,ALP)、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)的活力,并通过肝脏切片H&E染色进行肝脏病理学检查,评价不同品系和性别小鼠对ConA诱导的肝损伤的敏感性。2.筛选AMDS重复给药的安全剂量:以第一部分筛选出的对ConA敏感的C57BL/6J小鼠为研究对象,按霍恩氏法进行试验设计对AMDS进行急性毒性评价。将小鼠随机分为 4 组:AMDS 100 mg/kg 组、AMDS 215 mg/kg 组、AMDS 464 mg/kg组、AMDS 1000 mg/kg组。各组小鼠分别经口给予一次相应剂量的AMDS,每天监测小鼠正常活动和体重的变化,并记录出现毒性或死亡迹象的时间,观察14天。根据每组动物死亡数和其所在剂量组,查表求得AMDS经口 LD50。AMDS重复给药安全性评价中,根据1/10 LD50、1/5 LD50和2/5 LD50进行剂量设计,将小鼠随机分为4组:对照组、AMDS低剂量组(25 mg/kg)组、AMDS中剂量组(50 mg/kg)、AMDS高剂量组(100 mg/kg),连续7天灌胃给药。末次给药后24 h处死,通过血常规、血生化和主要脏器的脏器系数等指标确定AMDS重复给药的安全剂量。***预处理对ConA诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及机制研究:采用C57BL/6J雄性小鼠,随机分为5组:对照组、AMDS(50 mg/kg)组、ConA组、ConA+AMDS 25 mg/kg 组、ConA+AMDS 50 mg/kg 组,除对照组外其余四组小鼠连续灌胃AMDS 7天,对照组灌胃等体积玉米油,最后一次AMDS给药2 h后尾静脉注射给予ConA,对照组注射等体积生理盐水,8 h后处死。测定血清中ALT、AST和LDH活力以及肝脏组织病理学变化评价AMDS对ConA诱导的小鼠肝损伤的保护效果;通过免疫组化技术检测肝细胞增殖标志物、中性粒细胞标志物以及巨噬细胞极化标志物的表达;通过免疫荧光、qPCR技术和western blot检测小鼠肝脏M1型巨噬细胞极化、NLRP3炎性小体通路和NF-κB信号通路、凋亡通路相关分子的mRNA和蛋白表达水平。4.体外实验研究巨噬细胞在AMDS拮抗ConA诱导的肝细胞损伤中的作用:通过CCK-8法分别确定ConA和AMDS对小鼠单核巨噬细胞J774A.1和正常肝细胞AML12的安全剂量。J774A.1细胞分为6组:对照组、AMDS(50 μM)组、ConA 组、ConA+AMDS 12.5 μM组、ConA+AMDS 25 μM 组和 ConA+AMDS 50 μM组。ELISA法检测细

关键词：自身免疫性肝炎刀豆蛋白A 烯丙基甲基二硫巨噬细胞 NLRP3炎性小体

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大蒜油中主要脂溶性有机硫化物对小鼠酒精性肝损伤拮抗作用的研究

大蒜油中主要脂溶性有机硫化物对小鼠酒精性肝损伤拮抗作用的研究

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作者：管敏杰山东大学

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研究目的酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是指由于长期大量的酒精摄入导致的一系列肝脏损伤性疾病,按发展进程分为酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化。在世界各地区范围内ALD发病率和死亡率持续升高,AL... 详细信息

研究目的酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是指由于长期大量的酒精摄入导致的一系列肝脏损伤性疾病,按发展进程分为酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化。在世界各地区范围内ALD发病率和死亡率持续升高,ALD已经成为不容忽视的公共卫生问题。近年来虽然在ALD发病机制的研究上取得了一些突破,但目前仍然缺乏有效的防治方法。已有的研究表明,ALD的发病与酒精摄入后导致的氧化应激密切相关。Nrf-2(NF-E2 related factor 2)是迄今为止发现的最为重要的调控内源性抗氧化系统活性的核转录因子,可调控一系列抗氧化酶及Ⅱ相解毒酶的表达。从调控“氧化应激”入手,研究能够激活“Nrf-2调控的抗氧化信号通路”的天然或化学合成物质对ALD的防治作用,将有助于找到可有效防治ALD的新药物。大蒜作为一种民间用药有非常悠久的历史。最近几十年关于大蒜医学治疗作用的研究表明,大蒜中所含的有机硫化物具有广泛且显著的生物学活性。来自国内外许多实验室的研究结果提示大蒜中的多种有机硫化物具有抑制ALD发生和进展的作用。本研究将比较大蒜油中5种主要的脂溶性有机硫化物对小鼠ALD的拮抗效果,并围绕Nrf-2信号通路探讨其可能的作用机制。研究方法1.动物分组及处理:将SPF级ICR雄性小鼠随机分成10个组,即对照组、模型组、DATS高剂量组(100mg/***)、DATS低剂量组(50mg/***)、DADS高剂量组(lOOmg/***)、DADS低剂量组(50mg/***)、DAS高剂量组(100mg/***)、DAS低剂量组(50mg/***)、AMTS组(100mg/***)、AMDS组(1OOmg/***)。模型组和各干预组小鼠喂饲含有5%(w/v)酒精的液体饲料,对照组小鼠喂饲不含酒精的等体积等热量的液体饲料。用玉米油将各种有机硫化物溶于溶剂中并混匀,采用灌胃的方式给予干预剂。4周末,模型组及各干预组小鼠均给予5g/***的酒精灌胃,对照组小鼠给予等体积等热量的麦芽糖糊精溶液。4h后处死小鼠,取血和肝脏组织备用。2.血清转氨酶:将采集的血液用离心机3000rpm/min离心15min,分离血清,用全自动生化分析仪测定血清谷丙转氨酶(alanine transferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartatetransferase,AST)活性。3.肝脏甘油三酯(triglyceride,TG)含量测定:采用北京普利莱公司提供的组织TG测定试剂盒测定肝组织中TG含量,并测定肝组织匀浆中蛋白含量对测定结果进行校正。4.肝脏病理检测:取小块肝脏组织,分别制备石蜡切片和冰冻切片,进行苏木素-伊红(H&E)染色和油红O染色,观察肝脏损伤情况。5.肝组织中Nrf-2、过氧化物酶体增殖物活化受体α(peroxisome proliferator-activated receptor α,PPAR-α)、甾醇调节原件结合蛋白(sterol regulatory element binding protein 1c,SREBP-1c)等相关蛋白表达:称取一定量的肝脏组织,用预冷的RIPA裂解液按照1:5(w/v)的比例制备匀浆12000g/min离心30min,上清液即为总蛋白;用细胞浆和细胞核蛋白抽提试剂盒按照操作指示提取细胞浆和细胞核蛋白。采用western blotting测定蛋白样品中相关蛋白的表达。研究结果1 大蒜的各有机硫化物拮抗酒精性肝病效果的评价1.1各有机硫化物对实验动物体重、肝重和脏器系数的影响实验结束时,与对照组小鼠相比,模型组小鼠体重无显著差异(P>0.05),肝脏重量和肝脏系数均明显增加(P硫化物对小鼠血清转氨酶活性的影响与对照组小鼠相比,模型组小鼠血清中AST和ALT活性均明显升高(P硫化物对小鼠酒精性肝病造成的氧化应激损伤及脂质代谢紊乱的干预效果的评估。2.1各组小鼠肝脏组织中脂肪含量的测定与对照组小鼠相比,模型组小鼠肝脏中TG含量明显升高(P硫化物干预组小鼠

关键词：酒精性脂肪肝二烯丙基三硫二烯丙基二硫二烯丙基一硫烯丙基甲基三硫烯丙基甲基二硫氧化应激 Nrf-2

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百科知识 2017年第5期 46-46页

为什么大蒜味难以去除?很多人都爱吃大蒜,但是又怕吃完后嘴里会有一股蒜臭味,久久不散,所以很多人都会忍痛割爱。大蒜味为何会久久不散呢?这是因为切碎或捣碎的蒜能够释放4种主要有机化合物:二烯丙基二硫、烯丙基甲基硫醚、烯丙基硫醇... 详细信息

为什么大蒜味难以去除?很多人都爱吃大蒜,但是又怕吃完后嘴里会有一股蒜臭味,久久不散,所以很多人都会忍痛割爱。大蒜味为何会久久不散呢?这是因为切碎或捣碎的蒜能够释放4种主要有机化合物:二烯丙基二硫、烯丙基甲基硫醚、烯丙基硫醇和烯丙基甲基二硫醚。其中烯丙基甲基硫醚是造成难闻口气的罪魁祸首,而且这种气味能够持续数个小时并且很难被去除。即使快速刷过牙之后,大部分

关键词：大蒜味烯丙基甲基二硫烯丙基硫醇

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